1
00:00:00,000 --> 00:00:08,140
Y la unidad de trabajo número uno se denomina validación de métodos analíticos, aseguramiento de la validad de los resultados.

2
00:00:08,140 --> 00:00:14,140
El resto de unidades de trabajo las tenéis ocultas, no podéis verlas.

3
00:00:15,740 --> 00:00:26,339
Entonces, esta unidad de trabajo tiene un apartado que de momento os subiré orientaciones que considere que os van a hacer falta en el momento que las necesitéis.

4
00:00:26,339 --> 00:00:44,619
Y aquí tenéis en el apartado de contenidos, tenéis lo que es el tema en sí en PDF, porque lo que tengo aquí en esta otra pantalla que voy cambiando, ay, perdonad que me lo había descargado, esto de aquí es la presentación.

5
00:00:45,619 --> 00:00:53,899
Aquí tenéis lo que es la parte de los contenidos del tema que tiene dos grandes bloques.

6
00:00:54,200 --> 00:01:00,820
El proceso de validación en sí y lo que es el aseguramiento de la validad de los resultados analíticos.

7
00:01:00,820 --> 00:01:07,659
Esta parte está relacionada con el control de calidad, tanto interno como externo, que se llevan a cabo en los laboratorios.

8
00:01:08,420 --> 00:01:30,680
Este tema tiene parte de contenidos que os mencionarán también en el apartado del módulo de calidad. Algunos de vosotros ya lo tenéis aprobado, otros, pues no sé si os habéis matriculado de ese módulo o a lo mejor estáis cursándolo simultáneamente con el módulo optativo.

9
00:01:31,560 --> 00:01:34,920
Entonces, en el módulo de calidad vais a ver la norma de competencia técnica.

10
00:01:34,920 --> 00:01:46,659
Una de esas normas es la 17.025 y dicha norma, dentro de su estructura, uno de los aspectos en los que incide es en la validación de los métodos analíticos.

11
00:01:46,859 --> 00:01:57,480
Entonces, habrá partes que también os las comenten referentes a la validación en la parte de calidad, pero todo lo que afecta a la norma de competencia técnica.

12
00:01:57,480 --> 00:02:15,120
Yo me voy a centrar justo en lo que es validación. Aquí tenéis todos los contenidos desarrollados en PDF y luego lo que he preparado, perdonad que lo que he hecho ha sido abrirlo dos veces, he preparado una presentación que es la que tenéis aquí.

13
00:02:15,120 --> 00:02:35,520
Luego tenemos un mapa conceptual que también lo tengo abierto desde el escritorio, un informe de validación, esto es un ejemplo tipo de un informe de validación que ha efectuado el Instituto de Salud Pública de Chile.

14
00:02:35,520 --> 00:03:03,060
Entonces, me ha parecido muy interesante porque recoge muchos aspectos del proceso de validación de un método que ya lo explicaré cuando lleguemos en su momento y aquí que lo tenéis oculto, problemas de resolución de los parámetros o características estadísticas de la validación que ya los resolveremos justo cuando acabemos en la unidad de trabajo.

15
00:03:03,060 --> 00:03:05,139
Por eso los tenéis ocultos.

16
00:03:09,590 --> 00:03:15,330
Disculpa, purificación, o sea, ¿vas a abrir las unidades de trabajo cuando las terminemos de ver?

17
00:03:16,750 --> 00:03:23,330
Sí, las unidades de trabajo las voy a ir abriendo a medida que las vayamos empezando, no cuando las terminemos.

18
00:03:23,750 --> 00:03:25,870
Esta está abierta porque la empezamos hoy.

19
00:03:27,110 --> 00:03:32,469
Ah, no puedo ir yo adelantando por mi cuenta, por ejemplo, no, tengo que esperar a que empiece.

20
00:03:32,469 --> 00:03:47,050
Bueno, son recomendaciones que nos han dado desde la Comunidad de Madrid para que vuestro proceso de aprendizaje siga una marcha acorde a cada unidad de trabajo.

21
00:03:47,050 --> 00:04:06,530
Si os la abro entera, quizá tú puedas tener una organización o una planificación, pero a lo mejor hay personas que con tanto volumen de documentación, módulos en los que están matriculados puedan llegar de alguna forma a agobiarse.

22
00:04:06,530 --> 00:04:17,750
Son recomendaciones que nos han dado, a mí me han funcionado cuando lo he hecho anteriormente y de momento creo que puede funcionar.

23
00:04:18,569 --> 00:04:28,569
De todas maneras, este módulo optativo sabéis que es quincenal, es decir, hoy tenemos clase de la optativa 2 de ampliación de análisis instrumental,

24
00:04:28,569 --> 00:04:47,350
pero la semana que viene tenemos clase de introducción al análisis químico. La vamos a ir haciendo rotativas porque estos módulos no tienen la carga horaria que tienen los módulos transversales o asociados a unidades de competencia

25
00:04:47,350 --> 00:05:11,550
Y entonces creemos que es más operativo para vosotros y para nosotros a la hora de organizarlo, para mí, el hacerlo de manera quincenal. Entonces, unidades de trabajo aquí solamente vamos a tener cuatro, no vamos a tener más unidades de trabajo y vamos a irlas trabajando de manera secuencial. Creo que es mejor para vosotros.

26
00:05:11,550 --> 00:05:41,529
Vale, gracias.

27
00:05:41,550 --> 00:06:00,009
Aquella tarea o actividad que vaya asociada al módulo, que ya sabéis que son voluntarias, no son obligatorias, sin embargo, aquellas personas que van siguiendo la clase de manera secuencial, aunque sea asíncrona, pues les puede ayudar a afianzar los contenidos.

28
00:06:00,009 --> 00:06:06,649
Así, siempre dejaré un apartado de videoconferencias donde iré subiendo las respectivas videoconferencias del tema.

29
00:06:07,250 --> 00:06:21,490
¿De acuerdo? Entonces, volviendo a lo que son los recursos, vamos a comenzar con el mapa conceptual para hacernos una idea de lo que vamos a trabajar en este tema.

30
00:06:21,490 --> 00:06:43,189
En este tema vamos a ver dos grandes bloques. ¿Qué es el procedimiento de validación de un método analítico? ¿Cuáles son los principales criterios de validación? Esos criterios, como veis aquí, obedecen a una serie de parámetros o de características.

31
00:06:43,189 --> 00:07:01,569
Los criterios de fiabilidad son criterios estadísticos de carácter cuantitativo, es decir, son una serie de parámetros que se cuantifican y se utilizan para ello una serie de herramientas estadísticas.

32
00:07:01,569 --> 00:07:25,410
Vale, entonces aprovecho aquí para comentaros que, digamos, yo voy a iros subiendo también ejercicios resueltos con la hoja Excel, pero vosotros tenéis que saber manejar también la calculadora científica para poder calcular estos parámetros estadísticos.

33
00:07:25,410 --> 00:07:41,290
No sé qué calculadora científica tenéis, pero si ponéis en Google el modelo de vuestra calculadora científica, todos los manuales de cómo se utilizan están a disposición del usuario.

34
00:07:41,290 --> 00:07:55,750
Yo me he descargado el de mi calculadora científica. Entonces, os recomiendo, por favor, que busquéis el manual de instrucciones, si no lo tenéis, o lo descarguéis de internet y vayáis experimentando con la parte de estadística.

35
00:07:55,949 --> 00:08:04,329
A lo mejor algunos de vosotros ya sabéis manejarla y otros, pues es la primera vez que os enfrentáis a este tipo de herramientas.

36
00:08:04,329 --> 00:08:18,490
Los parámetros estadísticos se suelen calcular o con la calculadora científica o con la hoja Excel. Entonces es también necesario que vayáis soltando y adquiriendo fluidez en el manejo de la hoja Excel.

37
00:08:18,490 --> 00:08:33,889
Nosotros a lo largo de este módulo vamos a ir trabajando con las dos cosas y os iré subiendo ejercicios resueltos y explicados paso a paso para aquellas personas que aún no se están familiarizando con ello.

38
00:08:33,889 --> 00:08:50,909
Pero, por favor, sí insisto que tenéis que hacer un pequeño ejercicio en casa de mirar estos ejercicios y de trabajar la hoja Excel sobre todo porque sí es una cosa que en la empresa privada ya está prácticamente a la orden del día.

39
00:08:50,909 --> 00:09:05,929
La calculadora se utiliza muy poco, se utiliza hoja Excel y en última instancia, sobre todo en laboratorio farmacéutico, ya lo tienen todo automatizado con una plataforma que es la plataforma LIMS, donde se van volcando todos los datos.

40
00:09:05,929 --> 00:09:19,950
Hay que adquirir soltura con el manejo de todos estos parámetros con herramientas ofimáticas. Estos son los criterios que a mí me van a definir la validación de un método.

41
00:09:20,909 --> 00:09:36,190
Tenemos exactitud, representatividad, precisión, límite de detección, límite de cuantificación, linealidad, intervalo de concentración o intervalo de linealidad,

42
00:09:36,190 --> 00:09:43,909
porque lo podéis ver escrito de las dos formas, sensibilidad, selectividad y robustez.

43
00:09:43,909 --> 00:09:57,090
Luego tenemos los criterios de practicabilidad. Son criterios de carácter cualitativo, pero no son por ello menos importantes. Estos son los parámetros de validación.

44
00:09:57,090 --> 00:10:06,509
A continuación, veremos en qué consiste el diseño experimental de la validación de un método en un laboratorio.

45
00:10:07,549 --> 00:10:22,429
Este diseño experimental, ¿con qué concluye? Pues concluye con un informe de validación, un informe que siempre va a realizar el responsable de la validación o el responsable del laboratorio.

46
00:10:23,370 --> 00:10:38,950
Tiene que recoger y reflejar el resultado de la validación expresado de manera conveniente y concluir o no si la validación ha sido positiva o negativa de dicho método.

47
00:10:39,889 --> 00:10:45,990
A continuación, el segundo bloque se centra en las actividades de control de calidad.

48
00:10:45,990 --> 00:11:06,370
Estas actividades, dentro de un laboratorio, pueden ser de carácter interno, que veis ahí que se centran en análisis de blancos, análisis de muestras de control y análisis de muestras ciegas, y luego un control de calidad externo o ejercicios interlaboratorios, que se llaman.

49
00:11:07,110 --> 00:11:24,610
Dentro del control de calidad interno entrarían los gráficos de control. Los gráficos de control se utilizan muchísimo, no solo en laboratorios, sino también en fabricación de cualquier tipo de producto, pero en industria farmacéutica se utilizan mucho los gráficos Sheward.

50
00:11:24,610 --> 00:11:39,649
Aunque los gráficos CUSUM son gráficos que tienen una exactitud muchísimo mayor, pero se suelen utilizar por la forma de graficar los parámetros los gráficos SHIWAR, que ya veremos en qué consisten cada uno de ellos.

51
00:11:40,730 --> 00:11:48,110
Estos son los principales bloques que vamos a abordar en esta unidad de trabajo número 1.

52
00:11:48,110 --> 00:11:56,330
Comenzamos con la validación de los métodos analíticos.

53
00:11:56,330 --> 00:12:09,129
Como os he comentado anteriormente, es una exigencia que viene dada por la norma de competencia técnica, la norma UNE en ISO 17025.

54
00:12:10,129 --> 00:12:16,230
Esta norma es aplicable a los laboratorios de calibración y ensayos no clínicos.

55
00:12:16,230 --> 00:12:42,190
¿De acuerdo? Porque los laboratorios de ensayos clínicos se rigen por otros estándares. ¿Qué nos dice esta norma? Esta norma a la hora de definirnos qué requisitos nos van a determinar la calidad de los resultados analíticos, cuando hablo de calidad me refiero a que esos resultados de nuestros ensayos tengan una fiabilidad y una consistencia.

56
00:12:42,190 --> 00:13:09,750
De acuerdo, entonces esos requisitos técnicos se van a centrar sobre el personal de laboratorio que debe de cumplir una serie de requisitos, las instalaciones y las condiciones ambientales, métodos de ensayo, selección y validación, los equipos de nuestro laboratorio, la trazabilidad de las medidas, muestreo y manipulación de las muestras

57
00:13:09,750 --> 00:13:29,470
Y las actividades para el control de calidad. Como veis, en el apartado de validación de métodos, os he marcado en negrita los métodos de ensayo, la parte de selección y de validación, que es el apartado exigible de la norma 17.025.

58
00:13:29,470 --> 00:13:50,549
En este caso, ¿qué es lo que nos dice dicha norma? Tenéis ahí en el apartado 7.2.2 que la validación de los métodos es un requisito esencial para proporcionar datos que sean significativos.

59
00:13:50,549 --> 00:14:10,669
Es decir, el laboratorio debe de validar los métodos no normalizados, los métodos desarrollados por el laboratorio y los métodos normalizados utilizados fuera de su alcance o que estén modificados.

60
00:14:10,669 --> 00:14:24,970
La validación, ese procedimiento de validación es importante que abarque todas las necesidades que tenga que satisfacer ese método que voy a validar

61
00:14:24,970 --> 00:14:36,389
Es decir, el procedimiento de validación no está acotado, es un procedimiento cuyo alcance o cuya extensión tiene que ser tan amplia como sea necesaria

62
00:14:36,389 --> 00:14:51,190
Entonces, una vez que sabemos que este procedimiento de validación nos va a proporcionar datos significativos, ¿qué es lo que vamos a demostrar con este procedimiento?

63
00:14:51,190 --> 00:15:00,590
Pues vamos a demostrar que el método analítico cumple los requisitos necesarios para una aplicación concreta.

64
00:15:01,110 --> 00:15:13,950
Determinación de, por ejemplo, COPs en aguas, determinación de hierro, determinación de cadmio en muestras alimentarias, a eso es a lo que me refiero.

65
00:15:13,950 --> 00:15:39,649
¿Y cómo se demuestra? Con una serie de pruebas documentales. Mirad, ya lo estudiaréis en calidad. Todo lo que está regido por normas de competencia técnica o normas que en el fondo van a acreditar sistemas de certificar y acreditar sistemas de gestión, tienen que tener un soporte documental. Siempre.

66
00:15:39,649 --> 00:15:45,909
Y esto viene también exigido por la norma que tenéis aquí, la 17.025.

67
00:15:49,289 --> 00:15:57,019
Por tanto, ya tenemos la definición de lo que es validar.

68
00:15:58,279 --> 00:16:09,019
Es un procedimiento en el que pretende demostrar que el método analítico cumple los requisitos de una especificación concreta.

69
00:16:09,019 --> 00:16:16,120
concreta. ¿Cómo? Con pruebas documentales. ¿Cuándo se realiza? Es decir, ¿cuándo

70
00:16:16,120 --> 00:16:27,480
un laboratorio tiene que validar los métodos? El laboratorio debe de validar métodos no

71
00:16:27,480 --> 00:16:35,759
normalizados, métodos internos o métodos desarrollados por el propio laboratorio y

72
00:16:35,759 --> 00:16:55,379
Métodos normalizados pero que estén fuera de su alcance o que se hayan modificado. Estos son los puntos en los cuales el laboratorio tiene que pensar en un proceso de validación cuando se enfrenta a estos tres casos.

73
00:16:56,299 --> 00:17:12,559
¿Qué son los métodos oficiales? Los métodos oficiales son métodos que se diseñan para determinar parámetros analíticos en muestras que pueden ser de aguas, muestras de fármacos, muestras de alimentos.

74
00:17:12,559 --> 00:17:21,680
son, digamos, métodos que son de obligado cumplimiento y vienen referenciados por un estándar normativo.

75
00:17:22,359 --> 00:17:30,339
En España vienen referenciados por reales decretos, sobre todo, y a veces también referenciados en normas UNE.

76
00:17:30,980 --> 00:17:40,579
Entonces, como son métodos de obligado cumplimiento, son métodos que están validados por organismos competentes.

77
00:17:40,579 --> 00:18:03,819
Luego, los métodos oficiales entrarían dentro de lo que nosotros hemos llamado métodos normalizados. ¿Qué ocurre si yo cojo un método oficial y lo quiero aplicar en una aplicación, como estoy repitiendo, pero que está fuera del alcance de ese método?

78
00:18:03,819 --> 00:18:14,819
Pues aunque esté normalizado y aunque sea un método oficial, como la aplicación que yo quiero darle en mi laboratorio está fuera del alcance de ese método, tengo que validarlo.

79
00:18:19,480 --> 00:18:24,039
Entonces, aquí tenéis los distintos casos que hemos comentado antes.

80
00:18:24,559 --> 00:18:33,660
Cuando nosotros tenemos un método normalizado, hemos comentado que los métodos normalizados, como su nombre indica, ya están validados.

81
00:18:33,660 --> 00:18:43,759
Son métodos oficiales. Por eso, en el caso de un método normalizado, no se habla de validación, se habla de verificación.

82
00:18:43,759 --> 00:18:55,619
Entonces, cuando voy a verificar, lo que voy de alguna manera, que lo tenéis aquí en los contenidos del tema,

83
00:18:56,619 --> 00:19:07,819
en el caso del método normalizado, lo que hace el laboratorio es verificar el desempeño o idoneidad de dicho método

84
00:19:07,819 --> 00:19:17,819
centrándose en parámetros como puede ser la exactitud, la precisión, la repetibilidad, el límite de detección

85
00:19:17,819 --> 00:19:25,299
con el objetivo de determinar que el laboratorio domina ese ensayo y lo utiliza correctamente.

86
00:19:25,299 --> 00:19:30,000
No persigue su validación, no persigue su chequeo, solamente su verificación.

87
00:19:30,400 --> 00:19:31,359
Tener cuidado con eso.

88
00:19:31,839 --> 00:19:37,480
Los métodos normalizados, como su nombre indica, se verifican, no se validan.

89
00:19:37,819 --> 00:20:02,579
¿Qué ocurre en el caso número 2? Cuando tengo un método normalizado que sufre una modificación, en función de la amplitud de dicha modificación o qué características han sido modificadas con respecto al método oficial,

90
00:20:02,579 --> 00:20:14,920
el laboratorio tiene que decidir los parámetros o criterios de validación que se van a chequear, que se van a realizar o que se van a comprobar.

91
00:20:15,720 --> 00:20:23,579
Y en el caso número 3, si tenemos un método interno desarrollado por el propio laboratorio, lógicamente no está normalizado,

92
00:20:23,579 --> 00:20:42,039
En este caso, sí deben de evaluarse en el proceso de validación todos los parámetros estadísticos, todos los parámetros de fiabilidad que hemos visto en el mapa conceptual y que ahora pasaremos a detallar.

93
00:20:42,859 --> 00:20:52,059
Estos son los casos que os podéis encontrar si os toca participar en procesos de validación de métodos.

94
00:20:58,470 --> 00:21:17,569
Pues una vez que ya hemos visto la exigencia de la validación por parte de la norma y en qué consiste dicho proceso, vamos a meternos de lleno en cuáles son los parámetros estadísticos que nos determinan los criterios de fiabilidad.

95
00:21:18,490 --> 00:21:37,890
Lógicamente, se expresan en términos cuantitativos y nos van a permitir conocer la eficacia del método para resolver el problema analítico, para ver si se adecua o no a las características o requisitos que queremos cumplir con dicho método.

96
00:21:37,890 --> 00:21:47,000
Los parámetros o criterios de fiabilidad se subdividen en dos grandes grupos.

97
00:21:47,000 --> 00:22:10,259
Los parámetros de categoría suprema o supremos que se denominan son la exactitud y la representatividad, mientras que los parámetros básicos hacen referencia a la precisión, a la linealidad y al intervalo de linealidad, intervalo de concentración, también intervalo de trabajo.

98
00:22:10,259 --> 00:22:34,799
Se suele utilizar en el Argoate Laboratorio las tres denominaciones. Relacionados con el intervalo de linealidad nos encontramos el límite de cuantificación y el límite de detección, que también están relacionados con la sensibilidad, la selectividad.

99
00:22:40,259 --> 00:22:44,559
consigo la selectividad y la robustez. Voy a ponerme esto aquí arriba, que creo que

100
00:22:44,559 --> 00:22:58,009
es mejor. Es que tengo una duda, no entiendo bien la diferencia entre validación y normalización.

101
00:22:59,049 --> 00:23:09,990
No sé si al final me la respondas. No tiene nada que ver. La normalización es el procedimiento

102
00:23:09,990 --> 00:23:19,730
por el cual se confecciona una norma. Con la validación lo que vamos es a chequear, a comprobar,

103
00:23:19,890 --> 00:23:30,089
a verificar que un método analítico en nuestro laboratorio es adecuado para aquello que nosotros

104
00:23:30,089 --> 00:23:37,269
pretendemos averiguar con ese método o aquello en lo que nosotros pretendemos aplicarlo. Por

105
00:23:37,269 --> 00:23:45,089
ejemplo, si yo quiero determinar la concentración de cadmio en muestras de pescado, se va a seguir

106
00:23:45,089 --> 00:23:52,250
un método analítico, un método que puede estar basado en una técnica analítica de carácter

107
00:23:52,250 --> 00:23:58,349
cualitativo, de carácter cuantitativo tradicional, por ejemplo, una volumetría o de carácter

108
00:23:58,349 --> 00:24:06,730
instrumental, ¿de acuerdo? Entonces, ese método que se va a basar en una técnica, yo voy a aplicarlo

109
00:24:06,730 --> 00:24:21,250
Y lo que quiero es chequear que los parámetros que tenéis aquí en pantalla, dicho método los cumple para la determinación del cambio en pescado.

110
00:24:21,250 --> 00:24:36,990
La normalización es una cosa y la validación es otra. La validación viene exigida por una norma, es decir, es un proceso obligatorio. No es una cosa que los laboratorios hagan de rutina.

111
00:24:36,990 --> 00:24:53,450
Es un proceso que de alguna manera sirve para atestiguar que sus métodos de ensayo van a dar resultados, significativos resultados, que tienen el suficiente peso para luego poder emitir un informe a terceras personas.

112
00:24:55,269 --> 00:24:57,390
No sé si he respondido a la pregunta.

113
00:24:58,309 --> 00:25:03,210
Vale, sí. O sea, entiendo que primero se hace una normalización y luego se valida.

114
00:25:03,210 --> 00:25:17,029
La normalización es el proceso por el cual un organismo realiza normas y esas normas, concretamente la 17.025 es la que se aplica en los laboratorios de calibración y ensayo.

115
00:25:17,470 --> 00:25:23,910
Y esa norma en la actividad de rutina de esos laboratorios exige que los métodos se validen.

116
00:25:23,910 --> 00:25:29,130
son organismos diferentes

117
00:25:29,130 --> 00:25:32,029
los organismos que redactan las normas

118
00:25:32,029 --> 00:25:35,269
en España suelen ser AENOR

119
00:25:35,269 --> 00:25:37,589
y las normas son normas UNED

120
00:25:37,589 --> 00:25:42,349
y esas normas exigen unas cosas

121
00:25:42,349 --> 00:25:45,130
una de esas exigencias es la validación

122
00:25:45,130 --> 00:25:48,109
en laboratorio de calibración y ensayo

123
00:25:48,109 --> 00:25:51,670
en fabricación exigirán otras cosas

124
00:25:51,670 --> 00:25:54,309
En calidad exigirán otras cosas.

125
00:25:54,569 --> 00:26:00,630
O sea, si la norma me exige que se validen, pero es que tú dijiste que no se validaban, que se verificaban.

126
00:26:00,630 --> 00:26:12,109
No, se validan los métodos normalizados.

127
00:26:12,509 --> 00:26:19,150
Un método normalizado ya está validado porque ha habido un organismo oficial que lo ha chequeado.

128
00:26:19,150 --> 00:26:36,789
Como ya está validado y es de obligado cumplimiento, lo que hace el laboratorio no es volverlo a validar, lo que hace el laboratorio es verificar que el laboratorio es capaz de dominar esa técnica.

129
00:26:37,670 --> 00:26:39,789
Vale, gracias.

130
00:26:39,789 --> 00:26:42,009
De nada, venga, seguimos.

131
00:26:42,009 --> 00:27:10,289
Hemos visto los parámetros de validación cuantitativos. ¿Cuáles son los cualitativos? Aquellos que veis que pone la presentación que no son imprescindibles, pero son de gran utilidad para poder determinar o poder decantarse entre un método u otro dentro de un proceso de validación.

132
00:27:10,289 --> 00:27:32,849
¿Qué tengo que tener en cuenta a nivel cualitativo? Pues a nivel cualitativo se debe tener en consideración cuál es la velocidad o el tiempo que se va a invertir en ese proceso analítico, el coste y la disponibilidad del equipo instrumental si es necesario.

133
00:27:32,849 --> 00:27:47,910
Por ejemplo, imaginar un HPLC, un cromatógrafo de líquidos, un equipo de espectrofotometría. ¿Tengo disponibilidad de ese equipo en mi laboratorio? Sí, no, no la tengo. ¿Cuál es el coste? ¿Se puede asumir?

134
00:27:47,910 --> 00:28:04,009
Y el coste por muestra, la complejidad o la sencillez del método, porque la complejidad o la sencillez del método me va a mí de alguna manera a influir en la capacitación técnica de mi personal.

135
00:28:04,009 --> 00:28:16,890
Si es un método muy complejo, pues a lo mejor necesito un personal que esté altamente especializado en ese método. Estoy pensando, por ejemplo, en métodos que se aplican en laboratorios de biología molecular.

136
00:28:17,849 --> 00:28:39,430
Métodos de técnicas de PCR o de PCR en tiempo real que necesiten a lo mejor una pericia del operador muy alta. Si son métodos que no son tan complejos, pues a lo mejor la formación de los operadores no tiene que ser tan especializada. Eso redunda en tiempo de formación y en coste de formación.

137
00:28:39,430 --> 00:28:54,690
Si los reactivos son tóxicos o no y que medidas de seguridad adicionales debe de cumplir mi laboratorio más allá de las que sean exigibles por normativa, me estoy refiriendo en este caso a la prevención de riesgos laborales.

138
00:28:55,650 --> 00:29:06,890
Entonces, veis que a la hora de chequear un método, o de imaginaros que vosotros tenéis un método en un laboratorio interno, lo ha desarrollado el propio laboratorio, pero quiere validarlo.

139
00:29:07,589 --> 00:29:16,609
O sea, quiere darle un carácter dentro de su método de rutina y de cara a una futura auditoría quiere darle un peso específico.

140
00:29:16,609 --> 00:29:46,049
Entonces, lo valida y a la hora de validarlo tiene en cuenta no solamente los criterios estadísticos, sino también estos criterios cualitativos que de alguna manera van a incidir en la eficacia o eficiencia del método, porque no solamente influye si el método es exacto o es preciso, influye también el sitio donde se desarrolla el equipo y el personal y las muestras y reactivos con los cuales se va a llevar a cabo.

141
00:29:46,609 --> 00:29:56,190
Entonces, podéis haceros una idea de que un proceso de validación no es una cosa sencilla, ni es una cosa que dure poco tiempo.

142
00:29:56,190 --> 00:30:09,490
Los procesos de validación de métodos suelen ser complejos y suelen llevar inversión de tiempo a la hora desde que se plantea el plan de validación hasta que se ejecuta.

143
00:30:10,049 --> 00:30:13,190
Porque, insisto, todo tiene que estar correctamente documentado.

144
00:30:13,190 --> 00:30:21,970
documentado. Vale, entonces, una vez que ya hemos visto los criterios, tanto cualitativos como

145
00:30:21,970 --> 00:30:27,930
cuantitativos, ahora lo que vamos a pasar es a analizarlos cada uno de ellos, sobre todo los

146
00:30:27,930 --> 00:30:35,210
de carácter cuantitativo. Los criterios de carácter cualitativo, pues, se intuyen. Comenzamos con los

147
00:30:35,210 --> 00:30:43,029
parámetros supremos, que habíamos dicho que eran la exactitud y la representatividad. Comenzamos

148
00:30:43,029 --> 00:30:49,809
con la exactitud. Algunos de vosotros ya os sonará este concepto, a otros puede que no.

149
00:30:50,410 --> 00:31:01,990
Entonces, la exactitud es el grado de concordancia entre el resultado de una medición y el valor

150
00:31:01,990 --> 00:31:10,910
convencionalmente verdadero del mensurando. ¿Qué es el mensurando? El mensurando, pues,

151
00:31:10,910 --> 00:31:35,730
Es ese parámetro físico o físico-químico que vamos nosotros a medir, que vamos a cuantificar. Por ejemplo, la concentración del analito, que suele ser el parámetro que en la inmensa mayoría de los casos se utiliza en la validación de los métodos.

152
00:31:35,730 --> 00:31:52,650
Entonces, cuando yo realizo una medición, por ejemplo, en un instrumento de medida, ese instrumento de medida me da un valor. ¿Cuál es el valor convencionalmente verdadero con el que yo lo comparo?

153
00:31:52,650 --> 00:32:10,630
Ese valor convencionalmente verdadero puede ser un valor límite establecido en una norma. Por ejemplo, no se deben de superar las 13 ppm, partes por millón, de cadmio en una muestra de pescado.

154
00:32:10,630 --> 00:32:28,849
Me lo estoy inventando. Ese sería el valor convencionalmente verdadero, el que me da la norma. Y el valor que me arroja mi medición es si yo determino esa concentración, la determino por un método instrumental o por un método cuantitativo, el que yo obtenga.

155
00:32:28,849 --> 00:32:48,410
Y lo que hago es compararlo y veo cuál es ese grado de concordancia. A eso se refiere la exactitud. Lógicamente estaréis preguntándoos, bueno, ¿y eso cómo se cuantifica? Pues ahora vamos a verlo con qué parámetro estadístico se cuantifica la exactitud.

156
00:32:48,410 --> 00:33:02,089
Como veis, cuando nosotros hemos definido la exactitud, el resultado de una medición, aquí intervienen los errores sistemáticos y los errores aleatorios.

157
00:33:02,509 --> 00:33:10,609
Los errores sistemáticos son aquellos que afectan al operador, son aquellos que están vinculados al instrumento de medida.

158
00:33:10,609 --> 00:33:27,230
Es decir, un error sistemático es aquel que tiene un origen, se sabe identificar. El error aleatorio, su nombre lo indica, son errores que ocurren al azar, no son identificables. Entonces, la exactitud está afectada por estos errores.

159
00:33:27,230 --> 00:33:43,039
Nosotros en los laboratorios, por regla general, para calcular la exactitud se suelen utilizar con mucha frecuencia los materiales de referencia certificados

160
00:33:43,039 --> 00:33:52,039
Estos materiales suelen tener concentraciones del analito de interés en concentraciones perfectamente conocidas

161
00:33:52,039 --> 00:34:12,719
Como están certificados, estos materiales vienen acompañados de un modelo, o sea, de un documento donde se certifica la concentración de ese analito. Por tanto, yo conozco en mi material de referencia el valor real. Lo conozco.

162
00:34:12,719 --> 00:34:28,340
que se suele determinar por X real. ¿Cuál es el valor experimental, el valor de mi ensayo? Normalmente, los ensayos se suelen replicar un determinado número de veces.

163
00:34:29,039 --> 00:34:41,699
Cuando se está determinando la exactitud, como mínimo, se suelen realizar 10 réplicas, como mínimo. A partir de ahí, se pueden replicar aquellas que el laboratorio considere oportuno.

164
00:34:41,699 --> 00:34:59,500
Entonces, yo tomo mi muestra y hago 10 mediciones del parámetro que estoy buscando, ¿de acuerdo? Y de esas 10 mediciones se saca el valor medio, lo que es la media aritmética, ¿de acuerdo?

165
00:34:59,500 --> 00:35:14,460
Entonces, insisto que aquí debéis de saber cómo se calcula la media aritmética de 10 determinaciones o de 10 mediciones.

166
00:35:14,460 --> 00:35:29,579
Entonces, de estos datos obtenidos y de la comparación con su valor real, la exactitud se determina mediante el error relativo. ¿Qué es el error relativo?

167
00:35:29,579 --> 00:35:46,539
El valor absoluto, que es lo que significan estas dos barritas que tenéis aquí. Valor absoluto significa que lo que yo tengo dentro está siempre en positivo. Eso es lo que significa valor absoluto en términos matemáticos.

168
00:35:47,159 --> 00:35:55,980
Entonces, ¿yo qué hago? Comparo mi valor experimental, es decir, la media aritmética que yo he obtenido de mis 10 mediciones,

169
00:35:56,719 --> 00:36:07,519
la comparo ¿con qué? Con el valor real. Y lo divido, lo refiero sobre el valor real. Y lo multiplico por 100.

170
00:36:07,519 --> 00:36:31,360
Esta es la fórmula del error relativo y el criterio de aceptación de dicho error relativo es un 2% como máximo, es decir, que cuando yo realice el cálculo de la exactitud de mis 10 determinaciones para poderlo aceptar como norma general,

171
00:36:31,360 --> 00:36:43,199
Insisto que luego ya cada laboratorio, en función de aquello que estéis validando o aquello que estéis midiendo, el laboratorio determinará el criterio de aceptación o rechazo.

172
00:36:43,199 --> 00:37:03,559
Yo os doy aquí el valor genérico que admite la bibliografía y es un 2%. Entonces, cuando nosotros estemos calculando nuestra exactitud, si nuestro error relativo supera el 2%, pues este procedimiento no es aceptable.

173
00:37:03,559 --> 00:37:29,389
O sea, el valor de la exactitud no es aceptable. La exactitud se puede medir también mediante un método de referencia normalizado. Es decir, yo tengo mi método en el laboratorio y lo voy a comparar con un método que ya está normalizado.

174
00:37:29,389 --> 00:37:49,409
Entonces, yo realizo la medida según el método normalizado. ¿Y qué es lo que hago? Hago una evaluación de la exactitud, pero comparo dos métodos. El valor de la exactitud con el método de referencia y el valor de la exactitud con mi método.

175
00:37:49,409 --> 00:38:16,469
Y esto se lleva a cabo mediante un ensayo de significación. Los ensayos de significación se ven en el módulo de calidad. Es un ensayo en el que se compara la precisión de los dos métodos mediante un ensayo estadístico de Fisher y luego se puede comparar también la exactitud de esos dos métodos.

176
00:38:17,469 --> 00:38:30,889
Tener cuidado porque en el apartado anterior lo que hemos comparado son valores de unas mediciones con respecto a un valor dado en un material de referencia o un valor en una norma.

177
00:38:30,889 --> 00:38:48,889
Yo puedo comparar la exactitud comparando dos métodos y hay una tercera forma de medir la exactitud que se lleva a cabo en muestras fortificadas.

178
00:38:50,010 --> 00:38:59,030
Es decir, estos casos normalmente se llevan a cabo cuando no se conoce a ciencia cierta la concentración de analito que tengo en mi muestra.

179
00:38:59,030 --> 00:39:05,630
Entonces, lo que os estoy explicando aquí son las tres formas de evaluar la exactitud.

180
00:39:06,769 --> 00:39:08,510
Así que no nos liamos.

181
00:39:09,150 --> 00:39:26,619
Puedo comparar una serie de medidas con un valor dado por norma o tenemos, como os había dicho, la comparación con materiales de referencia certificados.

182
00:39:26,619 --> 00:39:41,820
La medida realizada con un método de referencia normalizado y esto se lleva a cabo con ensayos de significación y cuando voy a tratar con muestras fortificadas.

183
00:39:41,820 --> 00:40:06,059
¿Qué hacemos aquí? Aquí lo que hacemos es añadir a una serie de muestras, normalmente se realizan seis mediciones, cantidades conocidas del analito o el laboratorio os dice qué cantidades son o normalmente se suelen utilizar el 80, el 100 y el 120%.

184
00:40:06,059 --> 00:40:22,019
Y, normalmente, cuando ya hemos, digamos, de alguna manera adicionado esas cantidades conocidas de analito, se calcula el porcentaje de recuperación del método.

185
00:40:22,019 --> 00:40:32,820
Mirad, lo tenéis en la guía EURAKEM de validación de métodos, lo he puesto aquí en los contenidos.

186
00:40:32,820 --> 00:40:56,940
Este procedimiento de muestras adicionadas o fortificadas se suele aplicar a blancos de matriz y también a aquellos casos en los cuales no se conoce la concentración del analito o su concentración es muy pequeña.

187
00:40:56,940 --> 00:41:17,320
Entonces, se toman seis repeticiones de dichas muestras y lo que se va a evaluar es el tanto por ciento de recuperación,

188
00:41:17,320 --> 00:41:32,500
que es la fracción de la sustancia agregada a la muestra, es decir, la muestra fortificada antes del análisis al ser analizada y sin fortificar.

189
00:41:32,500 --> 00:41:57,699
Es decir, yo lo que cuantifico es la diferencia entre la concentración en la muestra fortificada menos la concentración inicial, es decir, en la muestra no fortificada, dividido por la concentración de fortificación y todo ello multiplicado por 100.

190
00:41:58,380 --> 00:42:22,699
También se puede realizar con respecto a valores de cantidad añadida en forma de masa. Lo que pasa es que la guía Euraken lo especifica en valores de concentración, pero también se puede añadir esa sustancia o ese analito a la muestra fortificada, en lugar de en concentración, se puede añadir en forma de masa.

191
00:42:22,699 --> 00:42:39,699
Entonces, lo que se hace es comparar las muestras que han sido fortificadas con las no fortificadas para ver un poco el rendimiento o la eficiencia de ese método analítico.

192
00:42:39,699 --> 00:42:49,539
En eso consiste el porcentaje de recuperación. Es verdad que es un parámetro un poco abstracto. Entiendo que cuesta trabajo entenderlo como porcentaje de recuperación.

193
00:42:50,099 --> 00:43:07,639
Lo que te permite es, de alguna manera, comparar lo que has conseguido determinar de analito antes de fortificar la muestra, después de fortificarla con la cantidad o la concentración de fortificación.

194
00:43:07,639 --> 00:43:18,860
Es una manera de medir ese rendimiento. Insisto que esto se suele aplicar en aquellos casos en los que no se conoce la concentración de analito o es muy pequeña.

195
00:43:21,969 --> 00:43:30,949
Cuando dices fortificar, ¿tú le agregas el analito o un soluto o algo así?

196
00:43:30,949 --> 00:43:52,429
Se le añade cantidades conocidas de analito. El analito es la sustancia que yo quiero determinar. El soluto es otra cosa. El analito es la sustancia, el compuesto o el elemento que yo voy a determinar.

197
00:43:52,429 --> 00:44:22,409
Es lo que se denomina analito. Entonces, se añade en cantidades que son conocidas. Esas cantidades pueden darse en forma de concentración. Se puede dar un 80% de la concentración de trabajo, se puede añadir un 100% de la concentración de trabajo o un 120% o bien el laboratorio te puede decir a esta muestra se le añaden 200 miligramos, a esta otra 250 miligramos y a esta otra 250 miligramos.

198
00:44:22,429 --> 00:44:28,030
esta otra o al matraz 1 se le añade esta cantidad, al matraz 2, al matraz 3. Lo que

199
00:44:28,030 --> 00:44:34,750
se le hacen son, perdonad, se añaden cantidades conocidas. Esas cantidades pueden expresarse

200
00:44:34,750 --> 00:44:46,550
en forma de concentración o en forma de masa. Y entonces lo que se compara es los valores

201
00:44:46,550 --> 00:44:54,550
que se obtienen en la medición del analito en la muestra que ha sido fortificada o adicionada

202
00:44:54,550 --> 00:45:03,949
en la muestra sin fortificar con respecto a la cantidad que yo he añadido. ¿Vale? A eso es a lo

203
00:45:03,949 --> 00:45:11,170
que me refiero. Yo no estoy hablando de soluto. El analito es la sustancia de interés. Entonces,

204
00:45:11,170 --> 00:45:28,170
¿Cuál es la regla de decisión aquí? La regla de decisión aquí se establece en reglas generales, entre el 98 y el 102%, el tanto por ciento de recuperación.

205
00:45:28,170 --> 00:45:51,869
Sin embargo, estándares como ISO, que es un estándar o una norma internacional, o AOAC, que es un organismo de normalización francés que tiene también mucho peso específico en el ámbito alimentario, estos estándares pueden fijar otros criterios de aceptación.

206
00:45:51,869 --> 00:45:57,750
Entonces, nosotros nos regimos por aquellos criterios que ya vienen determinados por nuestro laboratorio.

207
00:45:58,170 --> 00:46:05,389
Aquí os he puesto un ejemplo de una muestra que ha sido fortificada.

208
00:46:05,389 --> 00:46:22,389
Por ejemplo, se fortificó una muestra de carne de marisco a una concentración de cadmio de 15 miligramos por 100 miligramos y se analizó por fotometría de absorción atómica.

209
00:46:22,389 --> 00:46:49,849
Este es, digamos, la técnica instrumental que se va a utilizar en este método. Y se toman seis lecturas. En esas seis lecturas se calcula la concentración del analito en la muestra sin fortificar, sin adicionar.

210
00:46:49,849 --> 00:47:00,900
la concentración de fortificación, que veis que es 15 miligramos por 100, veis que es toda igual,

211
00:47:00,900 --> 00:47:10,559
y la concentración después de la fortificación. Y se aplica la fórmula en cada una de las muestras

212
00:47:10,559 --> 00:47:18,099
y vamos obteniendo estos porcentajes de recuperación para cada una de las muestras.

213
00:47:18,099 --> 00:47:28,920
Calculamos el valor promedio de todos los porcentajes obtenidos y nos encontramos en un 93,9%.

214
00:47:28,920 --> 00:47:43,300
Si nosotros lo comparamos con el valor de aceptación general, que hemos dicho que estaba comprendido entre el 98 y el 102%, está fuera de ese rango.

215
00:47:43,300 --> 00:48:00,099
Entonces, en este caso, se concluiría que el valor no es aceptable de acuerdo al criterio general y ya se procedería en función de lo que nos dictamine el PNT correspondiente o el laboratorio en función de lo que estemos realizando.

216
00:48:01,099 --> 00:48:06,599
Este es un ejemplo de las muestras fortificadas o adicionadas.

217
00:48:06,599 --> 00:48:31,980
¿Vale? Entonces, la exactitud, hago un pequeño resumen, se evalúa de tres formas. Con muestras adicionadas o fortificadas, comparando nuestro método con uno de referencia y aplicando un ensayo de significación, o bien con el error relativo que suele ser lo más habitual.

218
00:48:31,980 --> 00:48:59,239
¿Vale? El siguiente parámetro supremo que nos encontramos ¿Cuál es? La representatividad. ¿Qué es la representatividad? Pues la representatividad es esa característica o propiedad que tiene un método de darnos un resultado que sea coherente con el problema analítico planteado.

219
00:48:59,239 --> 00:49:24,519
Y aquí, en gran medida, juega un papel muy importante el procedimiento de muestreo. Todo el procedimiento de toma de muestras, desde el origen de la toma de muestras, su transporte al laboratorio, su conservación en el laboratorio, si el análisis no se realiza de manera inmediata.

220
00:49:24,519 --> 00:49:39,780
En todo ese procedimiento de muestreo juega un papel muy importante el parámetro de la representatividad. La evaluación de la representatividad no es fácil, es una evaluación complicada.

221
00:49:39,780 --> 00:49:56,800
¿Por qué? Pues porque el valor debe de ser representativo de una población de referencia, porque yo extraigo una muestra, pero esa muestra está referida a un conjunto muchísimo mayor que se denomina población.

222
00:49:56,800 --> 00:50:16,659
Entonces, para poder dar resultados coherentes, pues la población de referencia de la que yo extraigo esas muestras deben de permitir la comparación de valores de referencia de la muestra con los valores de referencia de la población.

223
00:50:16,659 --> 00:50:34,920
Y a veces los valores de referencia de la población no los tenemos. Pero la representatividad, aparte, también tiene incidencia o se pone de manifiesto en parámetros como la precisión y los límites de detección y cuantificación.

224
00:50:34,920 --> 00:50:41,860
Y esos sí los vamos a calcular a continuación con parámetros estadísticos.

225
00:50:43,539 --> 00:50:53,349
Una vez que hemos visto los parámetros supremos, vamos a pasar a los parámetros que son básicos.

226
00:50:54,610 --> 00:50:58,809
Y entre ellos destaca la precisión.

227
00:50:59,750 --> 00:51:01,570
¿A qué se refiere la precisión?

228
00:51:01,570 --> 00:51:22,489
Pues la precisión expresa como ese grado de coincidencia o de concordancia entre una serie de mediciones que se obtiene en múltiples muestreos de una muestra homogénea en unas determinadas condiciones.

229
00:51:22,489 --> 00:51:43,929
Entonces, vosotros pensad una cosa. Cuando yo hablo de condiciones, ¿a qué me puedo estar refiriendo? Pues me puedo estar refiriendo si se utiliza el mismo aparato de medida, si se realiza por el mismo operador, si se realiza en el mismo día o en días distintos.

230
00:51:43,929 --> 00:52:01,730
Entonces, en función de que esas condiciones sean unas o sean otras, la precisión se expresa en términos de repetibilidad, reproducibilidad o precisión intermedia.

231
00:52:01,730 --> 00:52:18,829
Aquí tenéis dos dibujitos. Antes de que os explique qué significa cada uno de estos tres conceptos, como veis, tanto en este caso como en este, nosotros tenemos una serie de medidas que es cada puntito negro.

232
00:52:19,829 --> 00:52:27,369
En este caso en el que yo tengo ahora mismo el puntero del ratón, todos los puntitos negros están muy próximos unos con otros.

233
00:52:28,170 --> 00:52:35,889
Cada puntito representa un valor de medición, entonces yo ahora mismo estoy viendo que esos puntitos están muy cercanos unos de otros,

234
00:52:35,889 --> 00:52:44,730
luego las mediciones que yo he obtenido no están muy dispersas, no están cada una en un sitio, sino que están muy cercanas,

235
00:52:44,730 --> 00:52:50,670
pero el valor exacto o el valor del centro está alejado.

236
00:52:51,630 --> 00:52:53,929
Aquí podemos decir que este método es preciso.

237
00:52:54,710 --> 00:52:54,989
¿Por qué?

238
00:52:54,989 --> 00:52:59,969
Porque tiene un grado de dispersión pequeño.

239
00:53:01,130 --> 00:53:05,030
Sin embargo, está alejado del centro, luego puede ser poco exacto.

240
00:53:05,769 --> 00:53:07,530
¿Qué le pasa a esta otra imagen?

241
00:53:08,469 --> 00:53:14,090
Sigue existiendo cercanía entre los valores, luego el método es exacto

242
00:53:14,090 --> 00:53:29,969
Y al mismo tiempo está también próximo, perdonad, el método es preciso porque todos los puntitos que representan una medición están muy próximos unos con otros y al mismo tiempo se encuentran también cercanos al valor real, el centro de la diana.

243
00:53:29,969 --> 00:53:49,349
Luego sería también un método exacto. Esto es un poco el concepto de precisión, concordancia o cercanía entre una serie de valores que yo he obtenido en un análisis, en un muestreo, etc.

244
00:53:50,309 --> 00:53:58,769
Entonces, una vez que ya tengo claro lo que es la precisión, ¿qué es la precisión en términos de repetibilidad?

245
00:53:58,769 --> 00:54:18,570
Es decir, que sea repetitivo. Pues en este caso, las condiciones se refieren a un intervalo corto de tiempo, es decir, se realiza el mismo día, por el mismo analista, en la misma muestra y con el mismo equipo.

246
00:54:19,349 --> 00:54:33,789
Entonces, la precisión en términos de repetibilidad, en este caso, pues mi método me arrojaría o mucha dispersión, variabilidad o poca, pero en términos de repetibilidad.

247
00:54:34,469 --> 00:54:44,829
Cuando yo hablo de reproducibilidad, es decir, se puede reproducir, ya estoy hablando de la precisión entre laboratorios.

248
00:54:44,829 --> 00:55:14,730
Y en este caso, la reproducibilidad se lleva a cabo cuando se realizan estudios interlaboratoriales o entre laboratorios que se diseñan para estandarizar metodología o precisión en comparaciones intralaboratorio en ensayos realizados por distinto analista.

249
00:55:14,829 --> 00:55:17,909
y o en condiciones diferentes.

250
00:55:18,489 --> 00:55:24,489
Normalmente la reproducibilidad está relacionada en estudios interlaboratorios,

251
00:55:25,170 --> 00:55:28,869
cuando se llevan a cabo en laboratorios diferentes.

252
00:55:28,869 --> 00:55:35,289
Y la precisión intermedia se obtiene dentro del mismo laboratorio,

253
00:55:35,409 --> 00:55:42,849
pero cambio los analistas, los equipos, los días distintos y mantengo la misma muestra.

254
00:55:42,849 --> 00:56:04,849
Estos son los tres términos de precisión. Y la precisión se cuantifica. ¿Se cuantifica con qué? Se cuantifica con un parámetro estadístico. Ese parámetro estadístico se denomina coeficiente de variación o desviación estándar relativa.

255
00:56:04,849 --> 00:56:14,989
relativa. El parámetro S que tenéis aquí es la desviación estándar, que se compara con el valor

256
00:56:14,989 --> 00:56:23,489
medio y se multiplica por 100. En cierto modo, la desviación estándar lo que nos mide, ¿qué es? Nos

257
00:56:23,489 --> 00:56:32,929
mide un grado de dispersión. Si un método es poco preciso, es decir, tiene mucha dispersión, su

258
00:56:32,929 --> 00:56:40,150
desviación estándar será elevada porque tiene mucha dispersión. Si un método es preciso, su desviación

259
00:56:40,150 --> 00:56:52,289
estándar es pequeña. Cuando yo comparo la desviación estándar con el valor medio, es decir, con la media

260
00:56:52,289 --> 00:57:01,510
a la cual convergen todas esas mediciones, obtengo el coeficiente de variación porcentual. Y la

261
00:57:01,510 --> 00:57:10,030
precisión de los métodos se expresan en función de este coeficiente. Se suelen utilizar al igual

262
00:57:10,030 --> 00:57:18,030
que en exactitud 10 réplicas o 10 mediciones como mínimo. ¿Cuál es la regla de decisión? La regla

263
00:57:18,030 --> 00:57:26,570
de decisión o regla de aceptación, digamos en términos de repetibilidad y de precisión intermedia

264
00:57:26,570 --> 00:57:41,610
menor o igual al 2%, igual que la exactitud. ¿Qué pasa a la reproducibilidad? Cuando yo ya estoy, digamos, realizando esta evaluación con laboratorios diferentes,

265
00:57:42,409 --> 00:57:54,489
pues aquí lo que se suelen utilizar son patrones o test que se van a repartir a los diferentes laboratorios, se realizan las mediciones y se calcula la precisión

266
00:57:54,489 --> 00:58:08,110
y los resultados se envían a un comité externo de homologación, que es el encargado de verificar la precisión de dichos resultados.

267
00:58:08,889 --> 00:58:27,369
Los siguientes parámetros que vamos a ver, parámetros básicos, pero parámetros estadísticos, son límites de detección y de cuantificación.

268
00:58:28,750 --> 00:58:54,110
Estos límites nos determinan la capacidad de análisis cualitativo y cuantitativo de un método analítico y es una aplicación directa e importante de la recta de regresión o de la recta de calibrado.

269
00:58:54,110 --> 00:58:59,269
La aplicación directa permite la determinación de dichos límites.

270
00:59:00,269 --> 00:59:06,690
Los límites de detección y de cuantificación, ¿qué nos van a definir?

271
00:59:07,130 --> 00:59:14,110
Aquella cantidad de analito que va a producir una señal significativa.

272
00:59:15,090 --> 00:59:22,170
Cuando hablo de señal, hablo de respuesta de un aparato o de un instrumento.

273
00:59:22,170 --> 00:59:35,010
Por ejemplo, un espectrofotómetro. Estoy refiriendo a eso, una señal significativa. Y están muy relacionados con la sensibilidad del método analítico.

274
00:59:36,730 --> 00:59:44,329
Mirad, la principal diferencia entre el límite de detección y el límite de cuantificación no lo dice su propia definición o su propio nombre.

275
00:59:44,329 --> 01:00:13,750
El límite de detección es la mínima concentración de analito en una muestra que se puede detectar con un nivel aceptable de confianza, pero no tiene que ser cuantificada.

276
01:00:13,750 --> 01:00:34,750
Es decir, es en la mínima concentración de analito que me va a producir una señal que sea también diferente de la señal del blanco. El límite de detección es necesario cuando se están realizando medidas de carácter cualitativo.

277
01:00:34,750 --> 01:00:51,750
El límite de cuantificación sí me permite determinar la mínima concentración de analitos que se puede cuantificar con un nivel aceptable de precisión y de exactitud.

278
01:00:51,750 --> 01:01:20,590
Y el nivel de cuantificación me permite poder seleccionar entre un método de cuantificación u otro. Entonces, el límite de detección es la mínima concentración de analito que se puede detectar y el límite de cuantificación la mínima concentración de analito en una muestra que se puede cuantificar ambas con niveles aceptables de confianza.

279
01:01:21,750 --> 01:01:36,889
Ahora, estos parámetros, ¿cómo se calculan? Pues estos parámetros se calculan a través de la pendiente de la recta de calibrado.

280
01:01:36,889 --> 01:01:57,849
Vale, a ver, aquí hago un pequeño inciso. Mirad, cuando nosotros estamos cuantificando o determinando un analito con un método instrumental, la concentración del analito y la señal que me va a dar el instrumento son dos variables.

281
01:01:57,849 --> 01:02:15,869
La señal del instrumento, que puede ser absorbancia, puede ser fluorescencia, por ejemplo, esa señal es una variable que está relacionada o que depende de la concentración.

282
01:02:15,869 --> 01:02:33,989
Entonces, esas dos variables, la señal variable dependiente y la concentración variable independiente, están relacionadas mediante una expresión matemática.

283
01:02:33,989 --> 01:02:40,789
Y esa expresión matemática es la ecuación de una recta. Por eso hablo de recta de calibrado.

284
01:02:40,789 --> 01:03:10,769
¿Vale? A eso es a lo que me refiero.

285
01:03:10,789 --> 01:03:15,710
habíamos dicho que era el límite de detección antes en la definición. El límite de detección

286
01:03:15,710 --> 01:03:23,670
es una concentración. Esa concentración, esa X, le corresponde una señal, le corresponde

287
01:03:23,670 --> 01:03:35,130
una Y. Entonces, aquí la señal del límite de detección es igual a la señal del blanco

288
01:03:35,130 --> 01:03:42,710
más tres veces la desviación estándar de la señal del blanco.

289
01:03:45,730 --> 01:03:50,150
Esto, para yo calcular la desviación estándar de la señal del blanco,

290
01:03:50,150 --> 01:03:55,989
tengo que realizar la medición del blanco una serie de veces

291
01:03:55,989 --> 01:03:58,989
para poder calcular su desviación estándar.

292
01:03:59,469 --> 01:04:00,789
¿Qué es el blanco?

293
01:04:00,789 --> 01:04:25,750
Pues el blanco es una solución particular que tiene todos los componentes de mi muestra menos el analito de interés o todos los componentes del medio químico idéntico al de los patrones pero con una concentración cero de analito.

294
01:04:25,750 --> 01:04:43,789
O sea, un blanco, para que nos entendamos, lo tiene todo menos el analito. La respuesta a un blanco en un instrumento se denomina ruido de fondo, es decir, un blanco.

295
01:04:43,789 --> 01:04:57,190
Si yo voy a determinar un analito y meto un blanco, el blanco no tiene analito. Lógicamente la respuesta del instrumento debería ser cero, ¿verdad? Porque no tiene analito, no me lo puede cuantificar.

296
01:04:57,190 --> 01:05:16,809
Pero a veces los instrumentos te dan una pequeña señal, una señal de respuesta al blanco. Esa pequeña señal que puede estar relacionada con la limpieza del instrumento o con una serie de parámetros también es lo que se denomina ruido de fondo.

297
01:05:16,809 --> 01:05:31,769
Y se suele corregir, normalmente los equipos suelen tener un botoncito donde se corrige la señal del blanco, es decir, se pone el blanco a cero, que es la que le correspondería, porque el blanco no tiene analito.

298
01:05:31,769 --> 01:05:51,690
Bien, esta fórmula de aquí no me define el límite de detección, me define la señal, me define la I. El límite de detección, esa concentración, que por eso lo remarco, concentración, viene definida por esta fórmula.

299
01:05:51,690 --> 01:06:06,190
Tres veces la desviación estándar del blanco partido por B. ¿B qué es? B es la pendiente de la recta de calibrado.

300
01:06:06,190 --> 01:06:19,449
Entiendo que tenemos unas nociones mínimas de qué es la ecuación matemática de una recta.

301
01:06:19,449 --> 01:06:33,369
Yo voy a hacer aquí un inciso antes de terminar la clase de recordatorio, pero yo no puedo explicaros en qué consiste la ecuación matemática de una recta y qué es la dependencia lineal de dos variables.

302
01:06:33,369 --> 01:06:49,369
Esto de alguna manera tenéis que saberlo porque estamos en un grado superior, aunque sea modalidad a distancia. Pero tenemos que saber cuándo dos variables que yo estoy midiendo en un laboratorio, que estoy determinando en un laboratorio, están relacionadas.

303
01:06:49,369 --> 01:07:19,349
Vale, voy a abrir.

304
01:07:19,369 --> 01:07:27,510
es la pendiente de la recta. Esta es una fórmula que viene dada por la UPAC, donde te fija

305
01:07:27,510 --> 01:07:33,889
la desviación estándar del blanco en el límite de detección afectada por 3 y en

306
01:07:33,889 --> 01:07:40,429
el límite de cuantificación afectada por 10 veces esa desviación estándar. Son criterios

307
01:07:40,429 --> 01:07:43,090
que ha establecido la IUPAC por convenio.

308
01:07:43,969 --> 01:07:44,250
¿De acuerdo?

309
01:07:44,269 --> 01:07:44,809
Vale, vale.

310
01:07:45,329 --> 01:07:47,630
Entonces, es un número.

311
01:07:48,530 --> 01:07:50,550
Sb es una desviación estándar

312
01:07:50,550 --> 01:07:54,730
y b es en la pendiente de la recta de calibrado.

313
01:07:55,969 --> 01:07:57,510
Voy a abrirme una ventana nueva.

314
01:07:58,050 --> 01:08:00,250
Bueno, perdonad, que quería hacer una cosa.

315
01:08:01,070 --> 01:08:02,989
Voy a abrirme LibreOffice.

316
01:08:03,190 --> 01:08:04,590
Decidme si lo veis,

317
01:08:05,250 --> 01:08:06,610
porque estoy compartiendo pantalla

318
01:08:06,610 --> 01:08:08,210
y no sé si lo vais a ver.

319
01:08:08,210 --> 01:08:11,960
A ver, donde los micros.

320
01:08:12,639 --> 01:08:37,880
A ver si me deja abrir el Word. Vale. ¿Lo veis? ¿Veis un documento en blanco? Sí. Vale. Entonces, cuando yo tengo una recta, inserta. Vale. Y lo utiliza la tangente para hallar.

321
01:08:37,880 --> 01:08:53,159
La tangente. Aquí no vamos a calcular el ángulo. La pendiente de una recta se especifica con la tangente, es cierto, pero se calcula de determinadas formas, por un incremento.

322
01:08:53,479 --> 01:08:58,260
Pero cuando tú hablas de tangente, ¿hablas de la tangente aplicada a un ángulo?

323
01:08:59,539 --> 01:08:59,899
Sí.

324
01:08:59,899 --> 01:09:19,060
La definición de pendiente, matemáticamente hablando, es la tangente del ángulo que forma una recta con el eje de abscisas, pero también se puede determinar por la variación de incrementos que se ve mejor en términos analíticos, cuando ya lo aplicamos a conceptos químicos.

325
01:09:19,060 --> 01:09:43,630
Yo voy a dibujaros aquí un eje de coordenadas. Aquí tenemos el eje X y el eje Y. Y aquí tenemos una recta.

326
01:09:43,630 --> 01:10:07,949
¿Vale? Entonces, la ecuación de la recta siempre, matemáticamente hablando, es I es igual a, normalmente en química se suele poner A más, si encuentro el signo más aquí, más BX.

327
01:10:07,949 --> 01:10:27,470
Y en matemáticas, pero las dos fórmulas son equivalentes. En matemáticas se suele poner como A más MX, ¿vale? Entonces, ¿qué es A?

328
01:10:27,470 --> 01:10:51,779
A, si yo esta recta me la traigo hacia aquí, por ejemplo, ¿vale? Cuando si X es igual a cero, B por cero sería cero, ¿vale? Y es igual a A.

329
01:10:52,779 --> 01:11:02,100
Entonces A es lo que se llama ordenada en el origen y B es lo que se llama pendiente de la recta.

330
01:11:02,199 --> 01:11:08,840
La pendiente de la recta viene definido por este ángulo que forma con el eje de abscisas.

331
01:11:08,840 --> 01:11:16,979
Se suele calcular por la tangente de este ángulo, pero también se puede calcular por valores de incremento.

332
01:11:16,979 --> 01:11:35,479
Nosotros, cuando hablamos de pendiente, vamos a referirla al término de sensibilidad, no vamos a utilizar el valor de la tangente, porque la ecuación de la recta la vais a calcular con la calculadora científica o con la hoja Excel en el modelo de regresión, ¿vale?

333
01:11:35,479 --> 01:11:42,100
Entonces, vosotros no vais a calcular como en condiciones normales cuando se estudia matemáticas la pendiente.

334
01:11:43,899 --> 01:11:53,100
Aquí, lo que yo os quería decir es que si yo en el eje X represento la concentración de mi analito y en el eje Y la señal de mi instrumento,

335
01:11:53,100 --> 01:12:08,420
Instrumento, pues la I de la fórmula, esta I, se refiere a los valores que mi instrumento me va dando a medida que yo le voy metiendo patrones de concentración.

336
01:12:08,760 --> 01:12:18,039
Y esos valores, cuando yo los represente gráficamente y los ajuste por mínimos cuadrados, debo de obtener una recta.

337
01:12:18,039 --> 01:12:20,239
Y esa recta se llama recta de calibrado.

338
01:12:20,239 --> 01:12:36,779
¿Vale? Entonces, el valor de B es justo el valor de la pendiente de esa recta que nosotros calcularemos con nuestra calculadora científica o bien con nuestra hoja Excel.

339
01:12:36,779 --> 01:12:58,359
Porque esta recta nosotros la vamos a aproximar por un método matemático que se llama de mínimos cuadrados, porque estamos asumiendo que la relación entre la concentración y la señal es una relación lineal, es una relación directa o inversa pero lineal, responde a una recta.

340
01:12:58,359 --> 01:13:07,800
No tiene, no todas las relaciones son lineales, las hay cuadráticas y las hay también logarítmicas, ¿vale? Y lo vamos a dejar aquí.