1
00:00:00,000 --> 00:00:04,360
calibrado el tipo de calibrado más sencillo y el que utilizamos cuando

2
00:00:04,360 --> 00:00:09,480
tenemos un caso en casos ideales en el que no tenemos interferencia de la

3
00:00:09,480 --> 00:00:15,820
matriz y podemos por bueno para muestras que sean sencillas es el calibrado que

4
00:00:15,820 --> 00:00:19,199
elegimos porque pues porque es el más sencillo el que nos requiere preparar

5
00:00:19,199 --> 00:00:24,300
menos por menos disoluciones y si no tenemos

6
00:00:24,300 --> 00:00:28,280
efecto matriz y nos da un buen resultado no tenemos la necesidad de utilizar

7
00:00:28,280 --> 00:00:42,000
otro. Vamos a recapitular un poco con lo que era el calibrado. ¿Qué es un calibrado?

8
00:00:42,100 --> 00:00:51,280
Nosotros tenemos nuestro eje de coordenadas en el que tenemos una serie de valores de

9
00:00:51,280 --> 00:00:59,280
concentración en el eje de las X, esto va a ser la concentración, y una señal correspondiente

10
00:00:59,280 --> 00:01:06,120
a esas concentraciones que vamos a representar en el eje de las Y. Estamos hablando de patrón

11
00:01:06,120 --> 00:01:20,469
externo. Vamos a ponerlo aquí para acordarnos que estamos hablando de patrón externo. Entonces,

12
00:01:20,469 --> 00:01:40,790
Entonces, ¿cómo era nuestro procedimiento para hacer un calibrado por patrón externo? Nosotros tenemos una serie de disoluciones de las cuales vamos a medir una señal. Entonces, tenemos unas disoluciones que lo importante es que tengan concentraciones conocidas, que son nuestros patrones.

13
00:01:40,790 --> 00:02:00,629
¿Cómo sabemos su concentración? Porque las preparamos nosotros. Por ejemplo, si nosotros estamos haciendo disoluciones de cloruro de sodio, yo voy a tener una concentración 1 y voy a preparar una disolución que no tenga nada de cloruro de sodio, 0 gramos por litro.

14
00:02:00,629 --> 00:02:11,009
Después voy a hacer una siguiente disolución que tendrá una concentración 2, que serán 0,5 gramos por cada litro.

15
00:02:11,569 --> 00:02:13,150
Estas disoluciones las preparo yo.

16
00:02:13,550 --> 00:02:20,349
Yo estoy en el laboratorio y tengo mis matraces, las preparo con una exactitud perfectamente conocida.

17
00:02:21,229 --> 00:02:27,310
Aquí tengo mi siguiente disolución y la preparo de 1 gramo por litro.

18
00:02:27,310 --> 00:02:38,449
Y tengo la siguiente de 1,5 y hago una última disolución de 2 gramos partido por litro.

19
00:02:38,949 --> 00:02:49,490
Y esto lo importante es que son disoluciones que yo he preparado y que estas concentraciones son concentraciones verdaderas, las concentraciones que yo he preparado en el laboratorio.

20
00:02:49,490 --> 00:02:56,629
¿Qué hago con ellas? Pues para cada una de estas disoluciones voy a medir la señal con un determinado método

21
00:02:56,629 --> 00:03:03,509
¿Vale? Que puede ser, pues puede ser, puedo medirlo con potenciómetría, puedo medir con métodos espectroscópicos

22
00:03:03,509 --> 00:03:10,289
Lo importante es que yo, para cada una de estas disoluciones voy a medir y voy a obtener un resultado

23
00:03:10,289 --> 00:03:19,250
¿Vale? ¿Qué voy a hacer después? Voy a representar gráficamente las concentraciones en el eje de las X

24
00:03:19,250 --> 00:03:26,069
en las X y las señales en el eje de las Y, siempre, ¿vale?

25
00:03:26,069 --> 00:03:31,229
La concentración es el eje de las X y la señal es el eje de las Y,

26
00:03:31,349 --> 00:03:34,009
que es dependiente de la concentración, ¿vale?

27
00:03:34,569 --> 00:03:38,009
Entonces yo cojo y mi concentración 0 estaría aquí, ¿no?

28
00:03:38,250 --> 00:03:38,889
En el 0.

29
00:03:39,530 --> 00:03:43,469
Mi concentración 1, que son 0,5, pues bueno, vamos a imaginarnos

30
00:03:43,469 --> 00:03:48,990
que nuestra escala que está por aquí, 0,5, 1, 1,5

31
00:03:48,990 --> 00:03:55,449
y dos más o menos, ¿no? Ahora nuestras señales, yo lo que hago es coger mi instrumento, medir

32
00:03:55,449 --> 00:04:00,389
y anotar lo que me dé, ¿vale? Esto lo sé perfectamente porque lo he preparado yo y

33
00:04:00,389 --> 00:04:07,370
la señal que mido la anoto y para cada una de estos matraces que tenga yo con concentraciones

34
00:04:07,370 --> 00:04:20,629
distintas, voy a tener una señal distinta. S1, S2, S3, S4 y S5. ¿Vale? Esto va a tener

35
00:04:20,629 --> 00:04:26,310
unos valores. Entonces, imaginaos que para mi concentración cero, pues no me da señal

36
00:04:26,310 --> 00:04:31,389
porque solo agua no tiene cloruro de sodio y no hay nada que esté interfiriendo y me

37
00:04:31,389 --> 00:04:44,060
da 0. Pues mi primer punto, que lo voy a poner de otro color, venga, verde, ok, vale, mi

38
00:04:44,060 --> 00:04:51,060
primer punto estará aquí, que será el de mi concentración 0 con mi señal 0, ¿vale?

39
00:04:51,160 --> 00:04:55,920
Lo hemos llamado C1, es la primera, que es la que tiene 0 gramos litro, y me da una señal

40
00:04:55,920 --> 00:05:00,439
que en este caso es 0, por ejemplo. Ahora, mi concentración 2 me puede dar, pues, una

41
00:05:00,439 --> 00:05:08,779
una señal, por ejemplo, por aquí. La siguiente me puede dar una señal por aquí. La siguiente

42
00:05:08,779 --> 00:05:15,720
por aquí. Y la siguiente por aquí. Y yo ya esto, viéndolo a ojo, sé que tiene forma

43
00:05:15,720 --> 00:05:24,120
de línea recta. Y sabemos que la ecuación de una recta es y, esta de aquí, es igual

44
00:05:24,120 --> 00:05:36,420
a b, que es la pendiente, ¿vale? Por x, que es esta de aquí, más a, que es la ordenada

45
00:05:36,420 --> 00:05:45,040
en el origen, ¿vale? Esta es la ecuación de una recta. ¿La pendiente qué es? Lo inclinado

46
00:05:45,040 --> 00:05:50,560
que está. O sea, si tengo mucha pendiente, si me cuesta mucho subir la cuesta, la pendiente

47
00:05:50,560 --> 00:06:03,000
es más grande. Si está más plano, si mi recta en vez de ir así fuese así, tendría menos pendiente.

48
00:06:04,199 --> 00:06:10,360
Entonces, ¿qué es lo que yo hago cuando hago una recta de calibrado? Lo que yo estoy haciendo es decir,

49
00:06:10,519 --> 00:06:16,220
yo sé que para esta concentración tengo esta señal, para esta concentración tengo esta señal,

50
00:06:16,220 --> 00:06:25,759
Para esta concentración tengo esta señal. Pues voy a hacer una ecuación matemática que me saque la línea recta que uniría todos estos puntos, ¿vale?

51
00:06:25,759 --> 00:06:34,220
Que no me los va a unir de manera exacta, exacta, exacta, ¿vale? Pero se va a aproximar mucho.

52
00:06:35,319 --> 00:06:41,779
Entonces, ¿cómo hago yo esto matemáticamente? Tenemos una serie de fórmulas que podemos utilizar, que son bastante farragosas.

53
00:06:41,779 --> 00:06:47,279
ahora las vemos que las vimos el otro día o podemos hacerlo lo hacemos habitualmente con

54
00:06:47,279 --> 00:06:53,019
la calculadora o si estamos trabajando con un ordenador con excel y lo que hacemos es

55
00:06:53,019 --> 00:06:59,480
calcular los parámetros de esta recta de calibrado lo que estamos haciendo es calcular esta vez de

56
00:06:59,480 --> 00:07:09,139
aquí y esta de aquí que consigo yo con eso vamos a verlo yo he hecho esta serie de disoluciones de

57
00:07:09,139 --> 00:07:12,680
las que sabía perfectamente la concentración y les he medido la señal

58
00:07:12,680 --> 00:07:19,279
y lo he anotado he obtenido una ecuación que me relaciona mi señal con mi

59
00:07:19,279 --> 00:07:24,139
concentración vale daos cuenta que ya tenemos una ecuación completa si la b y

60
00:07:24,139 --> 00:07:31,079
la a son dos valores podemos simplemente sustituir y sabiendo un valor de x

61
00:07:31,079 --> 00:07:35,819
podríamos saber el de y y viceversa porque es muy útil esto porque si yo

62
00:07:35,819 --> 00:07:40,899
Y ahora de repente, después de haber hecho esto en el laboratorio, con estos puntos que yo sé perfectamente,

63
00:07:41,379 --> 00:07:45,699
yo tengo una muestra que no sé muy bien qué tiene, tengo una muestra problema,

64
00:07:46,920 --> 00:07:54,519
yo puedo medir su señal, mido su señal y pongamos que me da esto de aquí, la señal.

65
00:07:55,519 --> 00:08:02,199
Pues yo puedo coger y hacer cruzar esa señal con mi recta

66
00:08:02,199 --> 00:08:09,759
Y en el punto en el que cruce sabré qué concentración tiene mi muestra problema.

67
00:08:10,560 --> 00:08:17,600
Se puede hacer gráficamente como acabo de hacer yo aquí ahora para que lo veamos, pero es tan sencillo como sustituir en la ecuación.

68
00:08:18,699 --> 00:08:29,829
Yo ahora tengo una señal que he medido para una muestra que no sé qué concentración tiene mi muestra problema.

69
00:08:30,610 --> 00:08:34,460
No sé qué concentración tiene. ¿Qué hago?

70
00:08:34,460 --> 00:08:36,659
medir la señal, porque eso siempre lo puedo

71
00:08:36,659 --> 00:08:38,799
hacer, ¿no? De la misma manera que he medido el resto

72
00:08:38,799 --> 00:08:39,940
yo cojo

73
00:08:39,940 --> 00:08:40,960
y

74
00:08:40,960 --> 00:08:44,379
mido la señal

75
00:08:44,379 --> 00:08:46,539
de esta muestra problema que yo tengo

76
00:08:46,539 --> 00:08:47,659
y me da un valor.

77
00:08:48,440 --> 00:08:49,220
Esto va a ser

78
00:08:49,220 --> 00:08:51,840
perdóname, a ver, texto

79
00:08:51,840 --> 00:08:53,960
no, texto no, herramientas, vale.

80
00:08:54,659 --> 00:08:56,220
Esto va a ser un valor

81
00:08:56,220 --> 00:08:58,440
¿de qué? De i, ¿no? Porque la señal

82
00:08:58,440 --> 00:09:00,220
la representábamos en el eje de la cis

83
00:09:00,220 --> 00:09:02,360
entonces voy a tener una i

84
00:09:02,360 --> 00:09:11,120
Y yo lo que quiero saber es mi X, ¿no? La concentración, la concentración que es el eje de las X.

85
00:09:11,580 --> 00:09:24,539
Pues si yo sé que Y es igual a BX más A y lo que quiero es saber cuánto es la X, despejo,

86
00:09:24,539 --> 00:09:33,019
y sé que X es igual a Y menos A dividido entre B.

87
00:09:34,340 --> 00:09:37,320
¿Este valor lo tengo? Sí, porque es la señal que he medido.

88
00:09:37,519 --> 00:09:44,659
¿Este lo tengo? Sí, porque tengo mi calibrado y he obtenido esa ecuación en la que he obtenido el valor de A y el valor de B.

89
00:09:46,620 --> 00:09:50,139
B lo tengo, lo he obtenido, pues ya solo tengo que despejar

90
00:09:50,139 --> 00:09:59,460
y una muestra problema de la que yo no sabía la concentración, midiendo su señal y utilizando mi recta de calibrado,

91
00:09:59,759 --> 00:10:04,559
puedo saber qué concentración tiene y para eso se utiliza el calibrado, ¿vale?

92
00:10:05,320 --> 00:10:15,100
Entonces, cosas importantes que tenemos que tener en cuenta, pues estoy así a ojo, he visto que parece una línea recta, ¿no?

93
00:10:15,100 --> 00:10:22,700
pero bueno, el ojo es traicionero, tenemos que evaluar matemáticamente si esa recta es lo suficientemente buena

94
00:10:22,700 --> 00:10:29,139
y eso lo hacemos con un parámetro que se llama r o r al cuadrado, ¿vale?

95
00:10:29,460 --> 00:10:36,340
r al cuadrado es elevar r al cuadrado y es un valor que me tiene que dar siempre muy cercano,

96
00:10:36,340 --> 00:10:48,259
El r al cuadrado muy cercano a 1 y el r muy cercano a menos 1 si mi pendiente es negativa o a 1 si mi pendiente es positiva.

97
00:10:48,500 --> 00:10:52,740
¿Qué significa muy cercano? 0,99.

98
00:10:56,899 --> 00:11:01,139
Idealmente 3 nueves de r al cuadrado es un ajuste muy bueno.

99
00:11:01,139 --> 00:11:14,779
Bueno, si R es 1, significa que es totalmente una línea recta, ¿vale? Que sería, pues si yo hago, por ejemplo, a ver si puedo hacer unas líneas medio rectas con esto, ¿vale?

100
00:11:14,779 --> 00:11:29,840
Si yo tengo que para 0, 0, para 1 es 1 mi señal, para 2 es 2, para 3 es 3, ¿vale?

101
00:11:29,840 --> 00:11:32,100
Imaginaos que esto está todo bien dibujado y a escala.

102
00:11:32,720 --> 00:11:35,000
Esto es una línea recta perfecta, ¿vale?

103
00:11:35,000 --> 00:11:58,539
Si yo uniese bien los puntos, esto sería perfectamente una línea recta. Si es perfectamente una línea recta, significa que la r es igual a 1. En este caso, r al cuadrado es igual a 1, r es igual a 1. ¿Por qué?

104
00:11:58,539 --> 00:12:14,399
Porque la pendiente es positiva. Sabemos que r al cuadrado siempre va a ser positivo porque si la r es positiva, 1 o 0,99 por 0,99 va a ser un número positivo y si es negativo, menos por menos más.

105
00:12:14,399 --> 00:12:37,299
Si yo tuviese los valores así, para 3, 0, tal, imaginaos, así y así, pues tendría una pendiente negativa,

106
00:12:37,299 --> 00:12:49,720
o sea que vaya así, pues mi r en este caso tendría que ser lo más cercana posible a menos 1 y la r al cuadrado menos por menos más pues a 1.

107
00:12:51,440 --> 00:12:58,019
Repito que lo que queremos son r cuadrados de cerca de 1, 0,99, 0,999.

108
00:12:58,019 --> 00:13:17,940
Si tenemos, por ejemplo, una recta de calibrado y nuestra R está más bien tirando al 0,9, 0,95, es una recta que no tiene un buen ajuste, ¿vale? Depende de qué aplicación es, pues bueno, pero para nivel analítico.

109
00:13:17,940 --> 00:13:20,779
Entonces, ¿qué nos puede pasar?

110
00:13:20,960 --> 00:13:22,299
Imaginaos que yo tengo

111
00:13:22,299 --> 00:13:25,480
Me voy a ir a esta de aquí

112
00:13:25,480 --> 00:13:33,399
Imaginaos que yo tengo mi recta

113
00:13:33,399 --> 00:13:36,419
A ver, es que quiero aprovechar el eje

114
00:13:36,419 --> 00:13:38,240
Pero bueno, da igual, lo hago otra vez

115
00:13:38,240 --> 00:13:41,960
A ver, vamos a hacer esto

116
00:13:41,960 --> 00:13:49,220
Y esto, así

117
00:13:49,220 --> 00:13:51,379
Y otra más

118
00:13:51,379 --> 00:14:21,799
Tenemos ya nuestro eje, ¿no? X y Y. Entonces, imaginaos que yo tengo esta serie de puntos, los represento y tengo un punto aquí, otro punto aquí, otro punto aquí, otro punto aquí, otro punto aquí y otro punto aquí.

119
00:14:21,799 --> 00:14:34,639
Yo esto si lo veo a ojo, ¿qué veo? Pues que este de aquí igual no está muy allá, ¿no? Me rompe un poco lo que es la línea recta.

120
00:14:35,460 --> 00:14:49,259
Si yo hago mi ecuación de la recta de calibrado y calculo mi r, mi r cuadrado, probablemente me dé un valor bajo, me dé un valor de 0,80 y pico, 0,90 y pico.

121
00:14:49,259 --> 00:15:11,320
¿Por qué? Pues porque este punto de aquí me está rompiendo mucho la ecuación de la recta, daos cuenta que si nosotros trazamos una línea recta, si este punto no estuviese, este punto de aquí, si yo este punto no lo tuviese, mi ecuación de la recta sería unir todos estos puntos, bueno, mejor hecho, pero así más o menos, ¿no?

122
00:15:11,919 --> 00:15:27,039
Teniendo ese punto de ahí, pues mi ajuste va a alejarse de cada uno de los puntos, ¿no? De estos primeros también. ¿Por qué? Porque al final lo que yo hago es ajustar por mínimos cuadrados.

123
00:15:27,039 --> 00:15:38,019
¿Eso qué significa? Que yo voy a hacer matemáticamente la línea recta, que minimice la distancia entre cada uno de los puntos y la recta, ¿vale?

124
00:15:38,340 --> 00:15:44,039
Entonces, si tengo un punto que se sale, me estropea un poco el ajuste.

125
00:15:45,039 --> 00:15:54,700
¿Qué tengo que hacer en esos casos? Pues si veo que es algo así, que yo lo represento y tengo un punto que se va claramente, elimino este punto, ¿vale?

126
00:15:55,299 --> 00:16:00,720
Elimino este punto y hago la recta de calibrado de nuevo sin contar ese punto.

127
00:16:01,120 --> 00:16:04,460
Ahora mi R cuadrado probablemente esté muy cerca de 1, ¿vale?

128
00:16:04,840 --> 00:16:12,220
¿Por qué es muy importante que yo represente los datos y no solo lo elimine atendiendo al R cuadrado?

129
00:16:12,899 --> 00:16:18,299
Pues porque puede pasar que yo tenga unos datos y que no me esté dando cuenta

130
00:16:18,299 --> 00:16:25,500
porque no tenga yo visión así, a simple vista, y a lo mejor yo tengo unos datos que son así.

131
00:16:26,179 --> 00:16:34,940
Pues este está aquí, este está aquí, este aquí, este aquí, este aquí, este aquí.

132
00:16:35,299 --> 00:16:38,639
Esto no es ni siquiera una línea recta, ¿vale?

133
00:16:38,740 --> 00:16:46,860
Yo lo que tengo que evaluar es si tengo una línea relativamente recta y hay un punto discordante, ¿vale?

134
00:16:46,860 --> 00:16:51,620
o ninguno, porque muchas veces si lo hemos hecho todo bien y nos ha salido bien todo

135
00:16:51,620 --> 00:16:56,799
nuestro ensayo, no vamos a tener que rechazar ningún punto. Pero si tenemos un R cuadrado

136
00:16:56,799 --> 00:17:04,920
que es bajo, tendremos que mirar a ver cuál es el punto discordante. Entonces, ¿cuál

137
00:17:04,920 --> 00:17:10,259
es el procedimiento para hacer nuestro calibrado por patrón externo? Pues lo que hacemos es

138
00:17:10,259 --> 00:17:15,799
lo que hemos dicho. Preparamos una serie de disoluciones, las ponemos en nuestros matraces

139
00:17:15,799 --> 00:17:19,579
y vamos haciendo una serie de disoluciones.

140
00:17:19,720 --> 00:17:25,339
La disolución 1, hacemos la 2, la 3, la 4, la 5, etc.

141
00:17:25,579 --> 00:17:27,680
Las que sean normalmente alrededor de 5.

142
00:17:28,339 --> 00:17:31,759
A cada una de ellas hacemos una medición de la señal

143
00:17:31,759 --> 00:17:37,740
y tenemos la señal 1, la 2, la 3, la 4, la 5.

144
00:17:38,740 --> 00:17:40,359
Lo representamos gráficamente.

145
00:17:41,039 --> 00:17:42,539
Ponemos estos puntos de aquí

146
00:17:42,539 --> 00:17:52,559
Y ahora calculamos los parámetros de la recta de Calimodo, que va a ser esa ecuación matemática que se ajusta a los datos experimentales.

147
00:17:53,059 --> 00:17:59,359
¿Cómo lo hacemos? Con la calculadora. Entonces tenemos que ponerla en modo regresión.

148
00:18:03,410 --> 00:18:12,950
En las calculadoras casi, o depende del modelo, pero lo tenéis directamente en modo reg, o las que son un poco más modernas te lo escribe entero.

149
00:18:12,950 --> 00:18:18,750
pero tenéis igual que buscabais el modo estadística ponerlo en modo regresión y nos da distintas opciones

150
00:18:18,750 --> 00:18:23,509
nosotros vamos a hacer una regresión lineal porque nosotros ajustamos a una línea recta

151
00:18:23,509 --> 00:18:32,230
podríamos ajustar por si fuese otro tipo de ecuación a una parábola podemos ajustar a una exponencial a lo que sea

152
00:18:32,230 --> 00:18:40,809
pero vamos a utilizar relaciones lineales así que ponemos modo regresión de regresión lineal

153
00:18:40,809 --> 00:18:59,509
Y ahora tenemos que meter nuestras parejas de valores, la concentración 1 con la señal 1, la concentración 2 con la señal 2, la concentración 3 con la señal 3 y así con todos los datos que tengamos.

154
00:18:59,509 --> 00:19:10,529
Y después le damos a calcular los parámetros de la recta de calibrado y nos tiene que dar A, B y R.

155
00:19:10,809 --> 00:19:29,329
En las calculadoras casi más clásicas, vosotros le dais a mode para elegir el modo, lo ponéis en modo regresión lineal y luego cuando queréis calcular estos parámetros,

156
00:19:29,329 --> 00:19:41,670
le dais a Shift, a la segunda tecla que activa la segunda función y en el caso de las calculadoras más antiguas como la FX82MS, que es la que tengo yo ahora mismo en la mano,

157
00:19:42,309 --> 00:19:52,869
le dais al 2 y ahí os vais moviendo y veis que tenéis la A, la B y la R. Nos da la R, entonces si nosotros queremos la R al cuadrado, pues elevamos ese valor al cuadrado y ya está.

158
00:19:52,869 --> 00:20:09,730
Las que son un poquito más modernas, en vez de decirte que si quieres la regresión lineal, te dice directamente, te da la ecuación de la recta, ¿no? Te dice y es igual a bx más a. Seleccionas esa opción y lo mismo, te da la a, la b y la r, ¿vale?

159
00:20:09,730 --> 00:20:27,150
Ya tenemos nuestra recta de calibrado. ¿Ahora qué tenemos que hacer? Tenemos que coger nuestra muestra problema y medirle la señal, ¿vale? Y vamos a tener un valor de señal, un valor de Y y vamos a tener la B porque ya la hemos calculado y la A.

160
00:20:27,150 --> 00:20:35,349
Ahora ya podemos despejar la X y saber cuál es la concentración de esa muestra problema de la que no sabíamos la concentración.

161
00:20:36,630 --> 00:20:41,470
Y aquí, os lo dije el otro día pero lo repito, tenemos que tener un par de cosas importantes en cuenta.

162
00:20:41,990 --> 00:20:49,450
La primera, yo he hecho mi recta de calibrado entre esta concentración de aquí y esta concentración de aquí.

163
00:20:49,450 --> 00:20:59,009
¿Vale? Esto de aquí es el rango de concentraciones en el que yo he hecho mi recta de calibrado.

164
00:20:59,609 --> 00:21:03,710
¿Qué pasa si yo mido una señal y la señal me da por aquí?

165
00:21:04,450 --> 00:21:09,309
Que yo, por mucho que quiera chocar, mi recta no ha llegado hasta aquí.

166
00:21:09,750 --> 00:21:11,829
¿Que yo puedo imaginarme que va a continuar?

167
00:21:12,369 --> 00:21:13,930
Me lo puedo imaginar, pero no lo sé.

168
00:21:13,930 --> 00:21:24,690
Porque a lo mejor mi recta hace así y luego de repente hace así, ¿vale?

169
00:21:24,849 --> 00:21:32,990
Entonces, yo solamente puedo interpolar si está dentro de mi recta de calibrado.

170
00:21:33,289 --> 00:21:38,509
Entonces, imaginaos que yo tengo mi muestra problema, mido la señal y me da esta de aquí.

171
00:21:38,509 --> 00:21:41,569
Mi recta ha terminado aquí. ¿Qué podría hacer?

172
00:21:41,569 --> 00:21:45,230
podría diluir mi muestra problema

173
00:21:45,230 --> 00:21:49,630
para que entonces la señal me diese en otro punto

174
00:21:49,630 --> 00:21:51,170
imaginaos que me da por aquí

175
00:21:51,170 --> 00:21:56,450
yo aquí ya sí que puedo hacerla chocar

176
00:21:56,450 --> 00:22:00,529
lo digo gráficamente pero lo hacemos siempre con la ecuación

177
00:22:00,529 --> 00:22:05,630
con mi recta de calibrada y podría calcular esta concentración

178
00:22:06,230 --> 00:22:09,329
¿vale? esto está bien, está perfectamente

179
00:22:09,329 --> 00:22:22,349
¿Qué pasa? Que yo ahora mismo he calculado la concentración de mi muestra diluida. Si yo quiero saber cuánto era la concentración de mi muestra original, tendré que revertir esa dilución, ¿no?

180
00:22:22,349 --> 00:22:40,069
Si yo, por ejemplo, he diluido a la mitad mi concentración de mi muestra problema, o sea, tenía 50 mililitros y lo he llevado a un volumen de 100 con agua destilada, esta concentración que me da aquí me está dando la concentración de lo diluido.

181
00:22:40,069 --> 00:22:57,170
O sea, me está dando la mitad. Lo tendré que multiplicar por dos para tener la concentración que tenía originalmente. ¿Vale? ¿Hasta aquí todo bien? Me voy al chat. No hay nada. Vale. Bueno.

182
00:22:57,170 --> 00:23:05,970
Entonces, el otro día al final de la clase estábamos acabando justo con un ejercicio

183
00:23:05,970 --> 00:23:10,549
que lo tengo aquí yo creo pegado, sí, vale

184
00:23:10,549 --> 00:23:16,589
Era un ejercicio que me decía que yo tengo una disolución madre

185
00:23:16,589 --> 00:23:20,589
O sea, una disolución, yo tengo mi... me lo voy a pegar de hecho en...

186
00:23:21,190 --> 00:23:22,230
Bueno, no lo hacemos aquí

187
00:23:22,230 --> 00:23:26,130
Tengo una disolución madre, o sea, tengo mi matraz con una disolución

188
00:23:26,130 --> 00:23:29,390
que tiene una concentración de 1.000 gramos por litro.

189
00:23:29,569 --> 00:23:32,109
Yo esta concentración me la sé, ¿vale?

190
00:23:32,150 --> 00:23:35,009
Porque he preparado yo la disolución.

191
00:23:35,509 --> 00:23:39,190
Y me dicen que me cojo matraces de 100 mililitros,

192
00:23:39,349 --> 00:23:42,049
pero voy a poner el ejercicio para que lo leamos lo primero,

193
00:23:43,910 --> 00:23:44,890
y si no me lo pego aquí.

194
00:23:44,890 --> 00:23:45,269
Venga.

195
00:23:48,549 --> 00:23:51,210
¿Cuál era? Esperad un segundo.

196
00:23:51,210 --> 00:24:06,319
me dice que un laboratorio debe cuantificar la concentración de etanol de una serie de muestras

197
00:24:06,319 --> 00:24:09,680
utilizando una curva de calibrado con un patrón externo, ¿vale?

198
00:24:09,700 --> 00:24:11,460
O sea, lo que hemos estado haciendo hasta ahora.

199
00:24:11,460 --> 00:24:18,880
Y que se prepara una disolución madre de etanol con una concentración de un miligramo por litro, ¿vale?

200
00:24:18,880 --> 00:24:26,720
y a partir de esta disolución madre se realizan diluciones en matraces de 100 mililitros

201
00:24:26,720 --> 00:24:33,839
agregando estos volúmenes que me están diciendo aquí y me piden una serie de preguntas.

202
00:24:33,839 --> 00:24:39,839
Así que esto me lo voy a llevar aquí, lo primero a la pizarra y vamos a pegarlo.

203
00:24:39,839 --> 00:24:57,240
me están diciendo que yo tengo una disolución madre de un miligramo por litro

204
00:24:57,240 --> 00:25:06,299
o sea yo tengo mi matraz aforado con una disolución que tiene una concentración de un miligramo partido por litro

205
00:25:06,299 --> 00:25:14,579
y ahora a partir de esta disolución yo voy cogiendo unos volúmenes y los voy llevando a matraces de 100 mililitros

206
00:25:14,579 --> 00:25:32,920
Entonces me hago, aquí cojo y cojo 2 mililitros de esta disolución y lo llevo con agua destilada a 100 mililitros y esta es mi disolución 1.

207
00:25:32,920 --> 00:25:45,740
Cojo 4 mililitros de esta disolución original, lo llevo a 100 mililitros, os he hecho mis 4 mililitros aquí y hasta 100 mililitros en raso con agua

208
00:25:46,740 --> 00:26:01,240
Y esta es mi disolución 2, ahora me cojo 6 mililitros, los he hecho en mi matraz, en raso con agua hasta 100 y tengo mi disolución 3

209
00:26:01,240 --> 00:26:25,119
Y hago lo mismo con 8 y con 10, ¿vale? Y tengo mi disolución 4 y mi disolución 5, ¿vale? Todas tienen 100 mililitros de volumen final, de volumen total, pero cada una va a tener una concentración porque he echado de mi disolución madre distintas cantidades.

210
00:26:25,119 --> 00:26:39,059
Entonces, lo primero que me pide es que calcule la concentración de cada uno de mis estándares, porque yo lo que estoy haciendo ahora es preparar mis disoluciones patrón para luego medir la señal y tener mi recta de calibrado, ¿vale?

211
00:26:39,259 --> 00:26:50,220
Entonces, ¿cómo calculo la concentración? Concentración 1 por volumen 1 es igual a concentración 2 por volumen 2, ¿vale? Esto, ¿os acordáis?

212
00:26:50,220 --> 00:26:55,519
nos da un poco igual a que llamemos uno y a que llamemos dos

213
00:26:55,519 --> 00:26:57,500
siempre que una sea la inicial y otra la final

214
00:26:57,500 --> 00:26:58,420
¿vale? entonces

215
00:26:58,420 --> 00:27:00,460
concentración inicial

216
00:27:00,460 --> 00:27:01,680
vamos a poner aquí

217
00:27:01,680 --> 00:27:03,440
concentración inicial

218
00:27:03,440 --> 00:27:04,819
un miligramo por litro

219
00:27:04,819 --> 00:27:06,279
el volumen inicial

220
00:27:06,279 --> 00:27:09,299
pues dos mililitros en el primer caso

221
00:27:09,299 --> 00:27:10,839
concentración dos

222
00:27:10,839 --> 00:27:12,240
lo que queremos saber ¿no?

223
00:27:12,240 --> 00:27:14,200
porque queremos saber la concentración

224
00:27:14,200 --> 00:27:15,420
de estas de aquí

225
00:27:15,420 --> 00:27:19,099
si queréis para no liarnos vamos a poner una I y una F

226
00:27:19,099 --> 00:27:22,279
Para no liarnos con unos y doses en los dos lados, ¿vale?

227
00:27:23,019 --> 00:27:25,759
Concentración inicial y concentración final, ¿vale?

228
00:27:27,000 --> 00:27:31,599
Concentración inicial, la de mi disolución inicial, la de mi disolución madre.

229
00:27:32,380 --> 00:27:34,119
Volumen inicial, el que he añadido.

230
00:27:35,180 --> 00:27:40,460
Concentración final, la que quiero saber, porque quiero saber qué concentración tiene este matraz.

231
00:27:41,019 --> 00:27:45,579
Y volumen final, 100 mililitros, que es el matraz que he utilizado.

232
00:27:45,579 --> 00:27:48,700
Si no me equivoco, ¿no? Pone 100, sí, 100 mililitros.

233
00:27:49,099 --> 00:28:11,099
Entonces, esto siempre, siempre, siempre, bueno, hacedlo como queráis. Yo os recomiendo que os hagáis el dibujo e identifiquéis inicial y final para no liarnos. Entonces, la concentración inicial siempre va a ser la misma y normalmente el volumen final también porque se suelen preparar todos los patrones en matraces del mismo tamaño.

234
00:28:11,099 --> 00:28:18,579
Pero bueno, lo vais viendo. El caso que yo lo que quiero saber es la concentración final de cada uno de estos, pues despejo.

235
00:28:19,680 --> 00:28:29,779
Concentración final es igual a concentración inicial por volumen inicial dividido entre volumen final.

236
00:28:29,779 --> 00:28:47,259
O sea, un miligramo partido por litro por el volumen que haya añadido aquí dos mililitros, aquí cuatro, aquí seis, ocho y diez, y dividido entre cien mililitros.

237
00:28:48,099 --> 00:28:51,359
Este volumen en mililitros, ¿vale? Para que esto se me vaya con esto.

238
00:28:52,619 --> 00:28:59,759
Primer caso, un miligramo por litro por dos mililitros dividido entre cien mililitros.

239
00:28:59,779 --> 00:29:13,460
O sea, hago 1 por 2 entre 100, ¿qué me queda? 0,02 miligramos partido por litro, ¿vale? Este se me va con este.

240
00:29:14,779 --> 00:29:26,619
El siguiente, un miligramo por litro de la inicial por 4 mililitros, que es lo que he añadido, dividido entre los 100 mililitros totales.

241
00:29:26,619 --> 00:29:50,480
Pues el doble, ¿no? 0,04 miligramos partido por litro. Esta es la concentración 1, esta es la concentración 2 y calcularé la concentración 3 de la misma manera, la 4 y la 5, ¿vale?

242
00:29:50,480 --> 00:30:06,440
que es lo que me pide la primera parte del ejercicio. Ahora me dice, suponer que las señales instrumentales, o sea, yo he medido esas disoluciones y mis señales son 0,15, 0,31, 0,45, 0,63 y 0,75.

243
00:30:06,440 --> 00:30:30,759
Esto me lo dan como dato, o sea que yo he calculado mi concentración 1, que era 0,02 en miligramos por litro, y a esto le corresponde una señal de 0,15, porque me lo dan como dato, porque lo he medido yo, he preparado los patrones y los mido.

244
00:30:30,759 --> 00:30:52,660
Esto siempre lo puedo saber. Ahora, mi siguiente, que son 0,04 miligramos por litro, tiene una señal de 0,31 y la siguiente tiene una señal de 0,45, la siguiente de 0,63 y la última de 0,75, ¿vale?

245
00:30:52,660 --> 00:31:11,259
Entonces, me dice graficar la señal instrumental frente a la concentración. ¿Qué es lo que tengo que hacer? Hacerme mi eje de coordenadas y representar lo que me da en concentración.

246
00:31:11,259 --> 00:31:35,220
Me hago mi escala, ¿vale? Pues lo puedo hacer entre que cada una de las líneas de esta sea 0,02, ¿no? Pues 0,02 se corresponde con 0,15, esto lo tendré que hacer a escala, ¿vale? 0,04 con 0,31 y voy representando todos los datos que he calculado, ¿vale?

247
00:31:35,220 --> 00:31:41,980
Y veré que me sale aproximadamente, vamos, a ojo, una línea recta.

248
00:31:42,619 --> 00:31:46,220
Lo siguiente que me dice, determinar la ecuación de la recta de calibrado.

249
00:31:47,000 --> 00:31:47,799
¿Qué tengo que hacer?

250
00:31:48,339 --> 00:31:51,640
Meter en mi calculadora estas parejas de datos.

251
00:31:51,900 --> 00:31:54,220
Mi primera concentración con mi primera señal.

252
00:31:54,420 --> 00:31:56,259
Segunda concentración, segunda señal.

253
00:31:56,579 --> 00:31:58,759
Tercera concentración, tercera señal.

254
00:31:58,759 --> 00:32:16,839
Y obtendré una ecuación que es y es igual a bx más a. Lo que tengo que calcular es la b y la a, que me las van a decir la calculadora, y tengo que comprobar cuánto es mi r cuadrado.

255
00:32:16,839 --> 00:32:25,920
Y por último, lo voy a hacer ahora yo todo con Excel, pero para que veáis cómo ir haciéndolo a mano

256
00:32:25,920 --> 00:32:35,319
Y lo último me dice, con una señal de 0,52 calcular la concentración en una muestra desconocida

257
00:32:35,319 --> 00:32:45,440
Pues yo lo que voy a hacer es sustituir 0,52 en la ecuación que he calculado

258
00:32:45,440 --> 00:32:49,359
imaginaos que mi 0,52 es por aquí

259
00:32:49,359 --> 00:32:52,839
pues lo que voy a hacer es matemáticamente con mi ecuación

260
00:32:52,839 --> 00:32:56,460
es como si interpolase así en la recta

261
00:32:56,460 --> 00:32:58,779
y me va a dar una concentración

262
00:32:58,779 --> 00:33:00,740
que es la concentración problema

263
00:33:00,740 --> 00:33:02,740
la concentración que yo no sé

264
00:33:02,740 --> 00:33:06,740
cómo es esa disolución, qué concentración tiene

265
00:33:06,740 --> 00:33:08,500
pero si le mido la señal

266
00:33:08,500 --> 00:33:12,200
y lo meto en la recta de calibrado lo puedo saber

267
00:33:12,200 --> 00:33:14,740
entonces aquí están todos los datos

268
00:33:14,740 --> 00:33:40,819
La disolución madre, concentración por volumen inicial es igual a concentración final por volumen final, el volumen que he añadido de cada una de mi disolución madre para preparar mis patrones, esto de aquí es mi patrón 1 y patrón 2, 3, 4 y 5.

269
00:33:40,819 --> 00:34:08,659
Y ahora la señal que me la daban como dato, ¿no? No me acuerdo de cuáles eran, pero las vamos a coger. 015, 031, 045, 015, 031, 045, 063 y 075.

270
00:34:10,820 --> 00:34:19,139
63 y 0,75. Ahora, ¿qué tengo que representar? Esta concentración, que es la concentración

271
00:34:19,139 --> 00:34:25,219
de mis patrones en el eje de las X. Y esto de aquí, que es mi señal, o sea, cómo responde

272
00:34:25,219 --> 00:34:40,670
cada una de mis disoluciones a una medición en la 6. Pues lo voy a representar. Aquí

273
00:34:40,670 --> 00:34:48,230
lo tengo. Esto es la representación gráfica de estos patrones que yo he preparado y he

274
00:34:48,230 --> 00:34:57,250
medido. Y ahora voy a calcular matemáticamente, lo voy a calcular con Excel, que es lo mismo

275
00:34:57,250 --> 00:35:04,730
que si lo metiese en mi calculadora en el modo regresión y voy a insertar la línea

276
00:35:04,730 --> 00:35:11,750
recta, ¿vale? Si os dais cuenta, no es una recta perfecta, perfecta, perfecta. Si fuese

277
00:35:11,750 --> 00:35:17,610
perfecta, atravesaría por en medio cada uno de estos cuadrados y veis que aquí está

278
00:35:17,610 --> 00:35:22,469
un poquito más abajo, aquí está como un poquito más arriba de la mitad, aquí solo

279
00:35:22,469 --> 00:35:27,429
le pilla el último pico, aquí lo mismo, ¿vale? Porque no tenemos una línea exacta,

280
00:35:27,489 --> 00:35:31,909
exacta, exactamente recta. Lo importante es que tengamos una línea que se acerque mucho

281
00:35:31,909 --> 00:35:53,190
una recta. Y si os acordáis, eso lo sabemos evaluando la R. Entonces vamos a calcularla y me dice que mi R cuadrado es 0,997.

282
00:35:53,710 --> 00:36:04,269
Es un ajuste, está cerca de 1, es prácticamente una línea recta. Si fuese perfecto que todos los puntos estuviesen atravesados exactamente

283
00:36:04,269 --> 00:36:10,849
a la misma altura, un caso ideal sería una recta tal cual y la r cuadrada sería 1, porque

284
00:36:10,849 --> 00:36:18,269
lo que me está calculando es la distancia que hay de cada uno de estos puntos a la línea

285
00:36:18,269 --> 00:36:26,670
matemática que yo he calculado. Cuanto más se alejen estos puntos de la línea que les

286
00:36:26,670 --> 00:36:32,550
abarca a todos, pues más pequeña va a ser la r cuadrada, peor va a ser el ajuste y por

287
00:36:32,550 --> 00:36:39,389
Por lo tanto, menos puedo utilizar mi recta de calibrado porque no se ajusta exactamente una línea recta, ¿vale?

288
00:36:40,070 --> 00:36:57,110
Entonces, tengo mi R cuadrado, que la doy por OK, y tengo aquí la ecuación en la que me dice que I es igual a 7,6 por X más 0,002, ¿no?

289
00:36:57,110 --> 00:37:15,829
Prácticamente, 0,0019999989. ¿Qué es cada uno de los parámetros aquí? La Y está clara, la X está clara y ahora siempre lo que acompaña a la X, lo que la está multiplicando es la B, es la pendiente.

290
00:37:15,829 --> 00:37:45,969
¿Vale? Entonces, 7,6 es la B y 0,0019999 es la A, la ordenada en el origen. ¿Vale? Entonces, solo me queda el último punto que lo que me decían, a ver, me voy a copiar esto y esto fuera, lo que me pedían era que calculase para una muestra desconocida,

291
00:37:45,969 --> 00:38:08,269
Un matraz nuevo que yo tengo en el laboratorio cuya señal es 0,52, si no recuerdo mal, 0,52, ¿sí? Me dicen que qué concentración tiene. Yo tengo mi matraz, le puedo medir la señal, ¿vale? Porque eso lo puedo hacer siempre, pero no sé qué concentración tiene, pues lo calculo.

292
00:38:08,269 --> 00:38:33,469
Entonces, Y es igual a BX más A. Yo lo que quiero es X. X es igual a Y menos A, dividido todo ello entre la pendiente, ¿vale? Entre B. Es igual a Y menos A entre B. Así.

293
00:38:33,469 --> 00:39:02,139
Pues despejo, ¿no? Yo lo que quiero calcular es la x, pues tendré que despejar y 0.52 menos a 0.002 dividido entre b, 7,6, que es la pendiente, dividido entre 7,6.

294
00:39:02,139 --> 00:39:12,199
¿Cuánto me da? 0,068. Esta es la concentración de mi muestra problema, que mi muestra problema tiene una señal de 0,52.

295
00:39:12,199 --> 00:39:33,739
Entonces, vamos a ver si concentración 0,52 es igual a I, que es lo que hemos puesto, menos A dividido entre B, ¿vale?

296
00:39:33,739 --> 00:39:56,840
Y he calculado la concentración. Me decían que tenía una señal de 0,52. Aquí tengo 0,45 y 0,63. La señal estaría como aquí en medio, ¿verdad? Y me da que tengo una concentración de 0,068, que está también entre medias de estos dos valores. Así que todo pinta bien, ¿no? Tiene buena pinta.

297
00:39:56,840 --> 00:39:59,699
Entonces, este sería el ejercicio

298
00:39:59,699 --> 00:40:02,039
Ahora imaginaos que yo os digo

299
00:40:02,039 --> 00:40:03,719
Vale, pero es que antes de

300
00:40:03,719 --> 00:40:05,059
Para preparar esta muestra

301
00:40:05,059 --> 00:40:07,900
Que me ha dado una señal de 0,52

302
00:40:07,900 --> 00:40:10,099
Yo he cogido un mililitro

303
00:40:10,099 --> 00:40:11,920
Y lo he llevado

304
00:40:11,920 --> 00:40:13,920
A un matraz de 10 mililitros

305
00:40:13,920 --> 00:40:15,019
O sea, yo he cogido

306
00:40:15,019 --> 00:40:17,460
He cogido

307
00:40:17,460 --> 00:40:22,650
De mi muestra problema

308
00:40:22,650 --> 00:40:24,010
Mi muestra problema

309
00:40:24,010 --> 00:40:25,909
Que la tengo en

310
00:40:25,909 --> 00:40:28,269
En un vasito

311
00:40:28,269 --> 00:40:51,150
y no sé cuál es, ¿vale? He cogido de aquí un mililitro y lo he echado en un matraz aforado de 10 mililitros, he echado aquí este mililitro y el resto lo he rellenado con agua hasta 100, ¿vale?

312
00:40:52,130 --> 00:40:59,030
Imaginaos que me ha dado esta concentración que hemos visto, que es 0,068, ¿vale?

313
00:40:59,789 --> 00:41:05,349
Me ha dado una concentración de 0,068.

314
00:41:05,489 --> 00:41:07,449
Esto que he medido, ¿eh? Porque yo he medido aquí.

315
00:41:08,909 --> 00:41:11,510
¿Cuál será mi concentración de mi muestra problema?

316
00:41:12,829 --> 00:41:14,969
Tendré que revertir esa dilución, ¿no?

317
00:41:14,969 --> 00:41:20,730
Por 10 mililitros dividido entre un mililitro que he utilizado.

318
00:41:21,150 --> 00:41:30,590
Esto será 0,68 en las unidades, que no me acuerdo, creo que son miligramos litro los que tenemos.

319
00:41:34,510 --> 00:41:51,190
Sí, 0,68 miligramos partido por litro.

320
00:41:52,570 --> 00:41:58,760
¿Vale? ¿Hasta aquí todo bien? ¿Más o menos?

321
00:41:58,760 --> 00:42:11,059
Vale, pues me voy a volver a las diapositivas porque esto es lo que hemos estado viendo, ¿vale?

322
00:42:11,179 --> 00:42:27,170
Acordaos que esto de aquí son las fórmulas con las que nosotros podemos hacer el cálculo del ajuste por mínimos cuadrados, ¿vale?

323
00:42:27,170 --> 00:42:44,030
Pero recuerdo que lo hacemos con la calculadora, no se hace nunca en la práctica calcular el R cogiendo cada valor del eje de las X, restándole la media, multiplicándole por lo mismo pero con las señales, haciendo la suma de todo esto, dividiendo entre la raíz cuadrada.

324
00:42:44,030 --> 00:42:49,389
no se hace en la práctica, se hace todo con la calculadora. Tenemos que en nuestras ocasiones

325
00:42:49,389 --> 00:42:54,889
y es igual a a más bx, o bx más a, que es exactamente lo mismo, no nos da igual cambiar

326
00:42:54,889 --> 00:42:59,090
el orden. Lo que tenemos que tener siempre muy claro es que la b, que es la pendiente,

327
00:42:59,269 --> 00:43:03,949
es la que multiplica a la x. Y la a, que es la ordenada en el origen, es la que va sola.

328
00:43:03,949 --> 00:43:26,210
¿Vale? Entonces, vamos aquí. Tenemos una serie de patrones que hemos preparado, ¿vale? Si veis, tienen una concentración, los veis cada vez más oscuros porque este está cada vez más diluido, tiene una concentración más baja, ¿vale?

329
00:43:26,210 --> 00:43:46,389
Les medimos nuestra señal y hacemos la gráfica, hacemos el cálculo de la recta que uniría esos puntos y luego con las muestras que tenemos sustituimos, les medimos la señal y medimos en el eje de las íes para ver a qué concentración se corresponde, ¿vale? Lo que acabamos de hacer.

330
00:43:47,389 --> 00:43:53,110
Pasos. Lo primero, preparar las disoluciones estándar con concentraciones conocidas del analito.

331
00:43:53,650 --> 00:43:59,469
Si nosotros hacemos una recta de calibrado y no sabemos qué concentración tienen nuestros patrones, no la podemos hacer.

332
00:43:59,809 --> 00:44:02,650
Entonces, preparar las disoluciones.

333
00:44:03,429 --> 00:44:06,489
Siguiente, medir la señal de cada una de esas disoluciones.

334
00:44:06,730 --> 00:44:08,849
Y ya tenemos pares de valores X y Y.

335
00:44:09,829 --> 00:44:14,989
Graficar la señal de concentración y señal y ajustar la curva.

336
00:44:14,989 --> 00:44:24,769
que en nuestro caso va a ser siempre una línea recta, ¿vale? Evaluar cómo de buena es utilizando R cuadrado para verificar que es lineal,

337
00:44:25,110 --> 00:44:31,050
de repente yo lo hago con la calculadora, me da 0,8, automáticamente sé que algo está fatal, que eso no lo puedo utilizar, ¿vale?

338
00:44:31,349 --> 00:44:35,349
Entonces tendré que ver si algún punto se me va o que directamente no es una línea recta.

339
00:44:35,349 --> 00:44:50,489
Y luego lo último, cuando ya tenemos nuestra ecuación de la recta, le medimos la señal a nuestras muestras problema y sustituimos la señal que nos dé para calcular la concentración, ¿vale?

340
00:44:50,889 --> 00:44:58,010
Y eso es lo que hemos hecho. ¿Qué requisitos tienen que tener las muestras? Pues tienen que ser muestras ideales, ¿vale? Lo que hemos dicho.

341
00:44:58,010 --> 00:45:03,329
Tienen que tener, tanto las muestras como los patrones, una composición y matriz similares.

342
00:45:03,730 --> 00:45:14,769
Acordaos que el analito es lo que estamos analizando y la matriz es lo que está en la disolución, lo que, digamos, acompaña al analito.

343
00:45:14,929 --> 00:45:18,809
Entonces, para matrices complejas, este calibrado nos va a dar errores.

344
00:45:19,769 --> 00:45:21,710
El analito tiene que tener una respuesta lineal.

345
00:45:22,050 --> 00:45:26,030
Si yo quiero ajustar una línea recta y no se me ajusta, pues no me sirve.

346
00:45:26,030 --> 00:45:39,730
Y tiene que ser en el rango de concentración en el que yo esté trabajando. Lo que hemos dicho, si yo tengo miedo a una señal que me caería por fuera de esta línea recta, yo no sé luego cómo se va a comportar.

347
00:45:40,210 --> 00:45:51,449
Entonces no lo puedo utilizar. Y no tiene que haber interferencias significativas. Estos son los requisitos para el calibrado por patrón externo, que es el más sencillo de todos.

348
00:45:51,449 --> 00:46:05,690
Ahora, vamos al siguiente, que es el de adiciones estándar. Adiciones estándar lo utilizamos para mejorar la precisión cuando podemos tener interferencias de la matriz.

349
00:46:05,690 --> 00:46:23,090
Por lo que hemos dicho, cuando tenemos, por ejemplo, muestras que son más complejas, como muestras de sangre, muestras de alimentos, muestras de suelos, sí que es verdad que hay veces que en determinados tipos de muestras nos sirve con un patrón externo,

350
00:46:23,090 --> 00:46:36,090
pero si tenemos otros interferentes que nos van a afectar a la señal, vamos a tener que considerar un tipo distinto de calibrado que nos compense un poco estas variaciones que nos pueden dar el resto de elementos.

351
00:46:38,449 --> 00:46:49,909
¿Cómo hacemos un calibrado? Por adiciones estándar. Tenemos que tener también una serie de patrones, pero es diferente el procedimiento.

352
00:46:49,909 --> 00:47:16,170
Entonces, lo primero, preparamos nuestra muestra, tenemos nuestro matraz con nuestra muestra y le medimos la señal. Ahora, vamos a preparar una disolución madre, un estándar y, como preparábamos antes con el cloruro de sodio, lo vamos a preparar igual, pero en vez de medirlo solo, vamos a ir añadiendoselo al analito.

353
00:47:17,010 --> 00:47:26,650
Vamos a tener una concentración que va a ir creciendo de nuestro patrón y luego una concentración fija de la muestra.

354
00:47:27,269 --> 00:47:29,409
Ahora lo vemos con un gráfico que es más sencillo.

355
00:47:30,630 --> 00:47:41,230
Cada vez que vamos a medir con estos patrones que estamos preparando con las adiciones estándar, vamos a medir también la señal de cada una de ellas.

356
00:47:41,230 --> 00:47:46,550
vamos a seguir teniendo una serie de matraces en los que vamos a hacer una medición de la señal.

357
00:47:47,050 --> 00:47:54,409
Y vamos a hacer una gráfica de la señal que obtengamos frente a la concentración que hemos añadido de este analito,

358
00:47:54,969 --> 00:47:56,389
de este patrón, perdón.

359
00:47:57,210 --> 00:48:05,969
Y luego vamos a hacer, en vez de sustituir el valor de la I por el valor de la muestra que medimos a posteriori,

360
00:48:05,969 --> 00:48:11,210
lo que vamos a hacer es igualar a cero la ecuación que nos dé, igualar la I a cero.

361
00:48:11,230 --> 00:48:28,829
Y de ahí vamos a sacar la concentración. Un poco lío, lo vemos más fácil. Vamos a tener una disolución de la muestra, esta es nuestra muestra problema, nosotros no sabemos qué concentración tiene, sabemos qué analito es, pero no sabemos qué concentración tiene.

362
00:48:28,829 --> 00:48:42,789
Y vamos a preparar una disolución madre, una disolución patrón, como la que teníamos antes en el ejercicio anterior, que era un miligramo litro de cloruro de sodio, de NAC, de sal común.

363
00:48:42,789 --> 00:48:46,849
teníamos un litro de esa disolución y lo que hacíamos era

364
00:48:46,849 --> 00:48:51,630
de esa disolución madre ir diluyéndola

365
00:48:51,630 --> 00:48:55,170
pues en un matraz echábamos dos mililitros y llevábamos a cien

366
00:48:55,170 --> 00:48:59,309
en otro cuatro y llevábamos a cien, en otro seis y llevábamos a cien

367
00:48:59,309 --> 00:49:03,809
y medíamos la concentración, la señal de cada uno

368
00:49:03,809 --> 00:49:07,849
de esos matraces, aquí lo que vamos a hacer es no los vamos a medir

369
00:49:07,849 --> 00:49:11,570
por separado, vamos a ir echando a

370
00:49:11,570 --> 00:49:16,630
a un volumen siempre igual de la muestra.

371
00:49:17,269 --> 00:49:20,230
Entonces, yo tengo cuatro matraces vacíos, ¿vale?

372
00:49:20,670 --> 00:49:22,010
Mi muestra problema.

373
00:49:22,829 --> 00:49:27,210
He hecho en los cuatro el mismo volumen de la muestra, ¿vale?

374
00:49:27,769 --> 00:49:29,309
Esto no varía, el mismo.

375
00:49:29,769 --> 00:49:31,530
He hecho cinco mililitros, por ejemplo.

376
00:49:31,769 --> 00:49:35,289
Cinco mililitros, cinco mililitros, cinco mililitros y cinco mililitros.

377
00:49:35,289 --> 00:49:39,650
Y ahora, de la disolución madre que yo he añadido,

378
00:49:39,650 --> 00:50:02,269
Primero voy a echar en el primero nada, que he preparado, perdón, en el primero nada. En el segundo voy a echar 5 mililitros, en el tercero 10 y en el cuarto 15, ¿vale? Yo puedo calcular la concentración de esto que yo tengo aquí, ¿no? Porque tengo el volumen total y tengo los mililitros que he añadido, pues igual que hacía antes, ¿vale?

379
00:50:02,269 --> 00:50:17,829
Entonces, voy a tener preparados un matraz que solo va a tener la muestra y siempre llenamos hasta arriba con agua, ¿vale? Otro que va a tener la muestra y una concentración conocida de mi patrón.

380
00:50:17,829 --> 00:50:42,849
El siguiente lo mismo con una concentración conocida mayor, el siguiente con una concentración conocida mayor y así podríamos seguir, ¿vale? ¿Qué hacemos? Medir la señal de cada uno de ellos y hacer una gráfica de la concentración de patrón que yo he añadido frente a la señal que me dé, ¿vale?

381
00:50:42,849 --> 00:50:58,789
Y me va a dar una recta que no va a empezar en cero, va a empezar más arriba, porque daos cuenta que aquí ya tengo muestra. ¿Cómo sé la concentración que tengo en mi muestra problema?

382
00:50:58,789 --> 00:51:08,630
igualando a cero, igualando el y es igual a bx más a, o sea, yo tengo una ecuación de la recta de calibrado,

383
00:51:08,630 --> 00:51:21,949
y igualo esa y a cero, y obtengo el valor de x, que es lo mismo que el cruce de mi recta si la extendiese con el eje de las x,

384
00:51:21,949 --> 00:51:40,530
¿Vale? Pero mucho más sencillo, bueno, más sencillo, como lo hacemos habitualmente, yo tengo, he obtenido, esta es mi, a ver, imaginaos que esto está recto, ¿vale?

385
00:51:40,530 --> 00:51:53,449
Entonces tengo aquí mi recta de calibrado por adiciones estándar y tengo que I es igual a BX más A.

386
00:51:54,409 --> 00:51:56,610
¿Cómo sé yo la concentración que tenía en la muestra?

387
00:51:57,489 --> 00:51:59,989
Tengo que saber X y sé que I es igual a cero.

388
00:51:59,989 --> 00:52:14,690
Entonces, despejo, 0 es igual a BX más A, o sea que X es igual a partido por B, se pone en valor absoluto, ¿vale?

389
00:52:15,409 --> 00:52:23,630
Entonces, esto sería esto cruzando y me da esta concentración, que es la concentración de la muestra problema.

390
00:52:23,630 --> 00:52:30,949
Este no es tan visual como patrón externo, pero es igual de fácil, ¿vale?

391
00:52:33,210 --> 00:52:47,989
Entonces, lo que tenemos que tener en cuenta es eso, que en vez de hacer una disolución patrón, hacer nuestros patrones y medir la señal y luego medir la señal de la muestra, lo hago todo junto.

392
00:52:47,989 --> 00:53:10,829
Hago mis patrones, a cada uno de los patrones le echo el mismo volumen de la muestra y después la ecuación que obtengo de la misma manera con la calculadora y es igual a BX más A, donde la X es esta concentración de aquí, la amarilla.

393
00:53:10,829 --> 00:53:17,269
la B es la pendiente y la A la ordenada en el origen

394
00:53:17,269 --> 00:53:19,750
con esa ecuación que yo obtengo

395
00:53:19,750 --> 00:53:23,269
la igualo a cero, hago que I es igual a cero

396
00:53:23,269 --> 00:53:26,329
igual a BX más A y de ahí saco la X

397
00:53:26,329 --> 00:53:30,030
que es la concentración de mi muestra problema

398
00:53:30,030 --> 00:53:33,050
haremos ejercicios de esto

399
00:53:33,050 --> 00:53:33,869
de todas formas

400
00:53:33,869 --> 00:53:38,789
¿qué aplicaciones tiene? lo que hemos dicho, muestras más complejas

401
00:53:38,789 --> 00:53:46,929
como suelos, alimentos, agua, sangre, donde los componentes de la matriz, o sea, de todo lo que no es nuestro analito,

402
00:53:47,769 --> 00:53:53,420
pueden afectar a la señal del analito, a la señal que obtenemos.

403
00:53:56,039 --> 00:54:05,079
Entonces, bueno, no sé si vamos a presentar también patrón interno, no sé si nos dará tiempo a terminarlo,

404
00:54:05,079 --> 00:54:18,400
pero bueno, lo dejamos planteado y así a ver si el próximo día os conectáis más y hacemos ejercicios, que prefiero que estéis más conectados.

405
00:54:18,639 --> 00:54:27,880
Bueno, patrón interno. ¿Qué pasos necesitamos para hacer un calibrado por patrón interno?

406
00:54:27,880 --> 00:54:36,280
Nos recapitulamos, patrón externo, el más fácil, tenemos una serie de disoluciones que nosotros preparamos de concentración creciente.

407
00:54:37,800 --> 00:54:50,340
Adiciones estándar, lo mismo, pero en vez de medir esas disoluciones patrón que hemos creado solas, las medimos añadiendoles una cantidad de la muestra que es igual en todas ellas.

408
00:54:50,340 --> 00:55:03,739
Con patrón interno lo que vamos a hacer es utilizar otra sustancia, además de la que queremos medir, otro analito, similar a nuestro analito, que tiene que cumplir unos requisitos.

409
00:55:03,920 --> 00:55:16,639
Tiene que comportarse de una manera similar y tiene que darnos una señal que esté un poco diferenciada para poder distinguir cuál es la señal del patrón interno y cuál es la señal de nuestro analito.

410
00:55:16,639 --> 00:55:28,699
¿Vale? Entonces, ¿cómo hacemos este calibrado? Pasos. Primero, tenemos que seleccionar un patrón interno que sea adecuado al análisis que vamos a hacer.

411
00:55:28,699 --> 00:55:40,360
Pues tenemos que, imaginaos, yo que sé, pues vamos a analizar potasio, pues tenemos un patrón interno que se comporte de manera similar, pero nos dé una señal distinta, sodio, por ejemplo.

412
00:55:40,360 --> 00:55:45,960
Tiene que tener propiedades similares, pero distinguirse

413
00:55:45,960 --> 00:55:54,900
Ahora, añadimos el patrón interno a todas las muestras problema que tengamos

414
00:55:54,900 --> 00:55:56,960
Y a todos los patrones que preparemos

415
00:55:56,960 --> 00:55:58,219
¿Vale? Ahora lo vemos bien

416
00:55:58,219 --> 00:56:02,800
Medimos la señal en cada uno de estos matraces que tengamos

417
00:56:02,800 --> 00:56:07,179
Medimos la señal tanto del analito como del patrón interno

418
00:56:07,179 --> 00:56:27,760
Y después lo que vamos a hacer gráficamente es la relación de señales, o sea, la señal del analito dividida entre la señal del patrón interno frente a la concentración del analito dividida entre la concentración del patrón interno, ¿vale?

419
00:56:27,760 --> 00:56:45,460
Y eso es lo que vamos a llevar como x e y a nuestra calculadora o a nuestro Excel para hacer una línea recta y para calcular una recta de calibrado, una ecuación de la forma y es igual a bx más a, ¿vale? Más fácil con un dibujo.

420
00:56:45,460 --> 00:57:09,099
Tenemos nuestra disolución patrón y nuestro patrón interno, entonces del patrón interno siempre echamos la misma cantidad y de la disolución madre o intermedia echamos volúmenes crecientes,

421
00:57:09,099 --> 00:57:37,320
¿Vale? Parecido a lo que hemos hecho antes, pero daos cuenta que esto de aquí es un elemento nuevo, que si nosotros estamos midiendo litio, esto es potasio, por ejemplo. ¿Vale? Entonces, ¿cuándo se utiliza? Pues cuando hay variabilidad en el sistema de análisis. Por ejemplo, el patrón interno se utiliza muy, muy habitualmente en cromatografía. ¿Por qué? Porque cuando inyectamos la muestra es habitual que no sea muy reproducible, que no se comporte exactamente igual.

422
00:57:37,320 --> 00:58:04,820
¿Qué conseguimos teniendo un patrón interno? Que si realmente están afectando condiciones externas a mi analito, le están afectando por igual a este patrón que yo he metido, ¿vale? Entonces, haciendo la relación, yo puedo cuantificar y ajustar esas fluctuaciones que puede tener mi señal por problemas de reproducibilidad, ¿vale?

423
00:58:04,820 --> 00:58:07,820
Y también cuando tenemos interferencias de la matriz, etc.

424
00:58:09,440 --> 00:58:25,619
Entonces, patrón interno, lo que hemos dicho nosotros, imaginaos que tenemos, estamos analizando nicotina, por ejemplo, pues aquí lo que vamos a representar en las Is no es la señal de la nicotina,

425
00:58:25,619 --> 00:58:34,980
es la señal de la nicotina dividido entre la señal que me da la otra sustancia que yo he introducido como patrón interno.

426
00:58:35,380 --> 00:58:44,900
Y aquí lo mismo, la concentración dividida entre la concentración del patrón interno o no, porque realmente como es una constante lo puedo hacer después.

427
00:58:44,900 --> 00:58:48,519
Esto el próximo día con ejercicios vemos todas las maneras que hay de hacerlo.

428
00:58:49,519 --> 00:58:57,519
Pero lo que quiero que os quede claro hoy es eso, que tenemos tres tipos de calibrado,

429
00:58:57,780 --> 00:59:04,340
que cada uno lo vamos a utilizar en función de la muestra que tengamos, la disponibilidad del equipo, etc.

430
00:59:04,340 --> 00:59:17,739
Y que siempre nuestro objetivo es saber la concentración de una muestra desconocida midiendo señales de patrones de concentración conocida.

431
00:59:17,739 --> 00:59:32,400
Si el sistema es ideal, utilizamos patrón externo, que es lo más sencillo, y si tenemos fluctuaciones en el sistema o efecto de la matriz, utilizaremos patrón interno o adiciones estándar.

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00:59:33,239 --> 00:59:42,519
Esta es la teoría. El próximo día espero que hagamos ejercicios y os va a quedar mucho más claro.

433
00:59:42,960 --> 00:59:45,199
No sé si hasta ahora tenéis alguna duda.