1 00:00:00,000 --> 00:00:07,000 Bien, vamos a comenzar la unidad de trabajo 6, el tema 6, sobre las técnicas de PCR. 2 00:00:07,000 --> 00:00:14,000 Es uno de los tres grandes temas, quizá de los más complejos de todo el curso de Biología Molecular. 3 00:00:14,000 --> 00:00:17,000 El tema 6, el tema 7 y el tema 8 son los más difíciles. 4 00:00:17,000 --> 00:00:21,000 Entonces, con este primer tema vamos a ir despacio. 5 00:00:21,000 --> 00:00:27,000 Vamos a hacer bastantes actividades para que puedan quedar más o menos claras 6 00:00:27,000 --> 00:00:30,000 por lo menos las ideas clave de cada uno de los temas. 7 00:00:30,000 --> 00:00:35,000 Lo primero vamos a ver qué es esto de la reacción en cadena de la polimerasa, la PCR. 8 00:00:35,000 --> 00:00:40,000 Los que venís de bachillerato y habéis hecho Biología, algo os debe sonar. 9 00:00:40,000 --> 00:00:48,000 Desde hace bastantes meses, desde que empezó la pandemia, esta palabra de PCR se oye continuamente 10 00:00:48,000 --> 00:00:54,000 porque una de las aplicaciones que tiene la PCR es con fines diagnósticos. 11 00:00:54,000 --> 00:00:59,000 Entonces veremos en un segundo apartado las bases teóricas de la PCR, 12 00:00:59,000 --> 00:01:03,000 es decir, la PCR para que pueda funcionar y funcione bien. 13 00:01:03,000 --> 00:01:11,000 Teóricamente, cuáles son los cuatro puntos fundamentales que se necesitan tener siempre en cuenta. 14 00:01:11,000 --> 00:01:16,000 Por un lado los cebadores o los primers, las polimerasas termostables. 15 00:01:16,000 --> 00:01:19,000 Vamos a ver cómo es un ciclo básico de una PCR 16 00:01:19,000 --> 00:01:27,000 y cuáles son los productos de amplificación de una PCR o también los llamamos amplicones. 17 00:01:27,000 --> 00:01:30,000 Los productos de amplificación son amplicones. 18 00:01:30,000 --> 00:01:34,000 Entonces en esta primera clase veremos estos dos primeros puntos 19 00:01:34,000 --> 00:01:38,000 y dejaremos los tipos de PCR para las siguientes clases. 20 00:01:38,000 --> 00:01:42,000 La PCR estándar o convencional será la primera que veremos, 21 00:01:42,000 --> 00:01:48,000 que es la que más se utiliza de forma rutinaria en los laboratorios. 22 00:01:48,000 --> 00:01:52,000 No solamente de análisis clínico sino también de investigación 23 00:01:52,000 --> 00:01:57,000 e iremos viendo qué es una mezcla de reacción, cómo prepararla, 24 00:01:57,000 --> 00:02:01,000 cómo se preparan las muestras, cómo programamos un termociclador 25 00:02:01,000 --> 00:02:07,000 para poder realizar una PCR estándar y cómo podemos analizar los productos amplificados. 26 00:02:07,000 --> 00:02:15,000 Esta PCR estándar o convencional, si conseguimos los reactivos, la haremos en el laboratorio. 27 00:02:15,000 --> 00:02:20,000 Después veremos qué otras modalidades de PCR estándar podemos hacer. 28 00:02:20,000 --> 00:02:23,000 La PCR con inicio en caliente, para grandes fragmentos, 29 00:02:23,000 --> 00:02:28,000 qué tenemos que hacer para tener una PCR de alta fidelidad, etc. 30 00:02:28,000 --> 00:02:35,000 Además de esta PCR estándar o convencional hay otras técnicas de PCR que se utilizan también bastante, 31 00:02:35,000 --> 00:02:39,000 que es la PCR anidada o nested, 32 00:02:39,000 --> 00:02:46,000 la PCR múltiple y la PCR con transcripción inversa o RT-PCR. 33 00:02:46,000 --> 00:02:52,000 Y por último, en el último apartado veremos lo que llamamos PCR a tiempo real 34 00:02:52,000 --> 00:02:59,000 que se utiliza también muchísimo sobre todo cuando queremos amplificar y cuantificar 35 00:02:59,000 --> 00:03:03,000 la cantidad de amplicones y de DNA que teníamos de partida. 36 00:03:03,000 --> 00:03:10,000 Esta PCR a tiempo real no es tan rutinaria como la PCR convencional, 37 00:03:10,000 --> 00:03:15,000 puesto que los reactivos y el termociclador son caros. 38 00:03:15,000 --> 00:03:18,000 ¿De acuerdo? Pues vamos a empezar. 39 00:03:18,000 --> 00:03:24,000 La reacción en cadena de la polimerasa o PCR es una técnica de amplificación in vitro. 40 00:03:24,000 --> 00:03:29,000 Y esto es muy importante, es una técnica de amplificación de un DNA molde. 41 00:03:29,000 --> 00:03:36,000 De tal manera que de un DNA molde que puede proceder de un DNA cromosómico de una bacteria, 42 00:03:36,000 --> 00:03:42,000 de un cromosoma eucariota o de un cromosoma de una mitocondria, 43 00:03:42,000 --> 00:03:49,000 cualquier DNA molde, un fragmento de ese DNA molde lo vamos a poder amplificar. 44 00:03:49,000 --> 00:03:56,000 Amplificar significa que voy a hacer copias, copias de un fragmento pequeño dentro de ese DNA grande. 45 00:03:56,000 --> 00:04:04,000 Por tanto, es una técnica in vitro de amplificación de DNA que permite obtener millones de copias 46 00:04:04,000 --> 00:04:10,000 iguales a un fragmento concreto dentro de ese DNA molde. 47 00:04:10,000 --> 00:04:11,000 ¿De acuerdo? 48 00:04:11,000 --> 00:04:14,000 ¿Qué características tiene la PCR? 49 00:04:14,000 --> 00:04:16,000 Dos características fundamentales. 50 00:04:16,000 --> 00:04:20,000 Es tremendamente específica, tremendamente sensible. 51 00:04:20,000 --> 00:04:23,000 ¿De acuerdo? Ya las podéis apuntar. 52 00:04:23,000 --> 00:04:28,000 Tremendamente específica y tremendamente sensible. 53 00:04:28,000 --> 00:04:31,000 ¿Tremendamente sensible qué significa? 54 00:04:31,000 --> 00:04:38,000 Es una técnica que nos permite amplificar un fragmento concreto, 55 00:04:38,000 --> 00:04:43,000 aunque tengamos cantidades ínfimas de DNA molde. 56 00:04:43,000 --> 00:04:46,000 Cantidades pequeñísimas de DNA molde. 57 00:04:46,000 --> 00:04:54,000 Daos cuenta que se ha llegado a amplificar y a secuenciar el genoma completo del hombre de Neandertal 58 00:04:54,000 --> 00:05:01,000 a partir de muestras de DNA procedente de huesos fosilizados. 59 00:05:01,000 --> 00:05:07,000 Para que os hagáis una idea, la cantidad de DNA molde en esos huesos fosilizados es mínima 60 00:05:07,000 --> 00:05:11,000 y la calidad también debía ser pésima. 61 00:05:11,000 --> 00:05:15,000 Aún así, gracias a la técnica de PCR, como es muy sensible, 62 00:05:15,000 --> 00:05:22,000 se ha podido amplificar todo el DNA del genoma de Neandertal que ya está secuenciado. 63 00:05:22,000 --> 00:05:25,000 Por tanto, por un lado es muy sensible. 64 00:05:25,000 --> 00:05:31,000 Muy sensible significa que aunque tenga muy poquito DNA molde al principio, 65 00:05:31,000 --> 00:05:36,000 voy a ser capaz de amplificar el fragmento que quiero y es muy específica. 66 00:05:36,000 --> 00:05:43,000 Eso significa que aunque yo tenga un DNA cromosómico, un cromosoma completo eucariota, 67 00:05:43,000 --> 00:05:48,000 que tiene miles y miles y miles y miles de pares de bases, 68 00:05:48,000 --> 00:05:51,000 de todas esas miles y miles y miles de pares de bases, 69 00:05:51,000 --> 00:06:00,000 voy a ser capaz de amplificar única y exclusivamente, de forma específica, el fragmento que yo quiero. 70 00:06:00,000 --> 00:06:02,000 ¿De acuerdo? 71 00:06:02,000 --> 00:06:05,000 Por tanto, la PCR es una técnica muy poderosa. 72 00:06:05,000 --> 00:06:12,000 Tremendamente sensible, tremendamente específica y por eso se utiliza muchísimo en los laboratorios. 73 00:06:15,000 --> 00:06:20,000 La PCR permite hacer un montón de cosas en los laboratorios. Muchísimas. 74 00:06:20,000 --> 00:06:22,000 Aquí en el libro os pone estas tres. 75 00:06:22,000 --> 00:06:28,000 Permite amplificar varios fragmentos distintos en una única reacción. 76 00:06:28,000 --> 00:06:35,000 Es decir, en una única reacción de PCR puedo amplificar dos o tres fragmentos diferentes. 77 00:06:35,000 --> 00:06:37,000 Y esto lo vamos a ver más adelante. 78 00:06:37,000 --> 00:06:43,000 Podemos amplificar fragmentos de RNA. Ojo, de RNA, no de DNA. 79 00:06:43,000 --> 00:06:49,000 Podemos cuantificar la concentración de una molécula de DNA concreta en una célula. 80 00:06:49,000 --> 00:06:54,000 Es decir, cuántas copias tiene esa célula, etcétera, etcétera. 81 00:06:54,000 --> 00:06:56,000 Pero bueno, esto es un botón de muestra. 82 00:06:56,000 --> 00:07:03,000 Las aplicaciones que tiene la PCR y lo que nos permite realizar en el laboratorio 83 00:07:03,000 --> 00:07:08,000 van muchísimo más allá de estas tres simples... 84 00:07:08,000 --> 00:07:11,000 de estos tres ítems que pone aquí en el libro. 85 00:07:13,000 --> 00:07:19,000 ¿Qué ventajas tiene la PCR respecto a otras técnicas? 86 00:07:19,000 --> 00:07:21,000 Pues muchas. 87 00:07:21,000 --> 00:07:24,000 Por ejemplo, como técnica de amplificación, ya hemos dicho que la PCR 88 00:07:24,000 --> 00:07:30,000 nos permite amplificar un fragmento concreto y amplificar... 89 00:07:30,000 --> 00:07:37,000 acordaos que significa que de una copia puedo obtener mil millones de copias. 90 00:07:37,000 --> 00:07:43,000 Mil millones de copias, como ya veréis, se obtienen con 30 ciclos de PCR. 91 00:07:43,000 --> 00:07:45,000 ¿De acuerdo? Eso es... 92 00:07:47,000 --> 00:07:51,000 Por eso decimos que la PCR es una técnica de amplificación. 93 00:07:51,000 --> 00:07:54,000 ¿Hay otras técnicas de amplificación? Sí. 94 00:07:54,000 --> 00:07:56,000 Las técnicas de clonación. 95 00:07:56,000 --> 00:08:01,000 ¿Cuál es la gran ventaja de la PCR respecto a las técnicas de clonación 96 00:08:01,000 --> 00:08:03,000 que veremos en el tema siguiente? 97 00:08:03,000 --> 00:08:06,000 Que la PCR es tremendamente más rápida. 98 00:08:06,000 --> 00:08:11,000 En dos horitas, tres horas, ya tienes la amplificación completa. 99 00:08:11,000 --> 00:08:14,000 ¿Vale? Y estamos hablando de una PCR convencional. 100 00:08:16,000 --> 00:08:22,000 Mientras que en las técnicas de clonación necesitamos mínimo 24-48 horas. 101 00:08:22,000 --> 00:08:23,000 ¿De acuerdo? 102 00:08:24,000 --> 00:08:28,000 Como técnica de detección, si queremos detectar una secuencia concreta, 103 00:08:28,000 --> 00:08:32,000 la PCR también nos sirve para detectar. 104 00:08:32,000 --> 00:08:37,000 ¿Qué otras técnicas de detección de secuencias específicas tenemos? 105 00:08:37,000 --> 00:08:39,000 Las que ya habéis estudiado. 106 00:08:39,000 --> 00:08:42,000 En el tema 4, en el tema 5, que son las técnicas de hibridación. 107 00:08:42,000 --> 00:08:44,000 Respecto a las técnicas de hibridación, 108 00:08:44,000 --> 00:08:50,000 la PCR es muchísimo más específica que las técnicas de hibridación. 109 00:08:52,000 --> 00:08:56,000 Y además nos permite cuantificar. 110 00:08:57,000 --> 00:09:03,000 Cosa que las técnicas de detección por hibridación muchas veces es complicada la cuantificación. 111 00:09:04,000 --> 00:09:05,000 ¿De acuerdo? 112 00:09:06,000 --> 00:09:12,000 Estas son las dos principales ventajas que tiene la técnica de PCR 113 00:09:12,000 --> 00:09:15,000 respecto a otras técnicas de biología molecular. 114 00:09:15,000 --> 00:09:18,000 Y en cuanto a ejemplos de aplicaciones, pues son ejemplos. 115 00:09:18,000 --> 00:09:20,000 Os han puesto unos cuantos en el libro. 116 00:09:20,000 --> 00:09:22,000 Hay muchísimos más. 117 00:09:22,000 --> 00:09:26,000 Actualmente se está utilizando mucho la PCR con fines diagnósticos. 118 00:09:26,000 --> 00:09:27,000 ¿De acuerdo? 119 00:09:27,000 --> 00:09:29,000 Pero se pueden hacer estudios de mutagénesis. 120 00:09:29,000 --> 00:09:34,000 Es decir, con la PCR yo puedo introducir mutaciones. 121 00:09:34,000 --> 00:09:37,000 Concretas en una secuencia de DNA. 122 00:09:37,000 --> 00:09:39,000 Podemos hacer estudios de genotipado. 123 00:09:40,000 --> 00:09:42,000 Estudios filogenéticos. 124 00:09:42,000 --> 00:09:46,000 Es decir, de parentesco entre especies, etcétera, etcétera. 125 00:09:46,000 --> 00:09:48,000 Las aplicaciones son múltiples. 126 00:09:48,000 --> 00:09:51,000 Y cada día aparecen más aplicaciones. 127 00:09:51,000 --> 00:09:52,000 ¿De acuerdo? 128 00:09:54,000 --> 00:09:57,000 Una cosa muy importante que tenemos que tener en cuenta 129 00:09:58,000 --> 00:10:02,000 en la reacción de la PCR 130 00:10:02,000 --> 00:10:04,000 es que su principal ventaja, 131 00:10:04,000 --> 00:10:07,000 que hemos dicho que es muy sensible y muy específica, 132 00:10:07,000 --> 00:10:09,000 es su principal inconveniente. 133 00:10:10,000 --> 00:10:11,000 ¿Esto qué significa? 134 00:10:12,000 --> 00:10:15,000 Que el hecho de que sea tan sensible, 135 00:10:15,000 --> 00:10:17,000 tan, tan sensible, 136 00:10:17,000 --> 00:10:19,000 que ya hemos dicho que lo que significa es que 137 00:10:19,000 --> 00:10:23,000 aunque yo tenga una cantidad muy pequeña de un DNA de partida, 138 00:10:23,000 --> 00:10:25,000 voy a ser capaz de amplificarlo. 139 00:10:27,000 --> 00:10:31,000 Esta gran ventaja de ser una técnica muy sensible 140 00:10:31,000 --> 00:10:33,000 también es un inconveniente. 141 00:10:33,000 --> 00:10:34,000 ¿Por qué? 142 00:10:34,000 --> 00:10:39,000 Porque si se me contamina la mezcla de la reacción 143 00:10:39,000 --> 00:10:42,000 con un DNA que no es el de mi paciente 144 00:10:42,000 --> 00:10:46,000 o no es el DNA el que yo quiero estudiar, por ejemplo, 145 00:10:46,000 --> 00:10:50,000 es DNA de unas células que se me han desescamado de la piel. 146 00:10:51,000 --> 00:10:54,000 Por tanto, es mi DNA, no es el DNA del paciente. 147 00:10:54,000 --> 00:10:59,000 Aunque tenga cantidades ínfimas de ese DNA contaminante, 148 00:10:59,000 --> 00:11:01,000 también se va a amplificar. 149 00:11:03,000 --> 00:11:04,000 ¿Se entiende? 150 00:11:04,000 --> 00:11:06,000 Es decir, que esta sensibilidad, 151 00:11:06,000 --> 00:11:09,000 que es una gran ventaja de la técnica de la PCR, 152 00:11:09,000 --> 00:11:11,000 si no tenemos cuidado, 153 00:11:11,000 --> 00:11:14,000 puede ser un gran inconveniente siempre que haya contaminación. 154 00:11:14,000 --> 00:11:15,000 ¿De acuerdo? 155 00:11:15,000 --> 00:11:18,000 Porque aunque la contaminación sea con una cantidad muy pequeña 156 00:11:18,000 --> 00:11:20,000 de DNA contaminante, 157 00:11:20,000 --> 00:11:22,000 también lo vamos a amplificar 158 00:11:22,000 --> 00:11:24,000 y también lo vamos a detectar. 159 00:11:24,000 --> 00:11:28,000 Y esta contaminación que era ínfima se va a amplificar también. 160 00:11:29,000 --> 00:11:30,000 ¿De acuerdo? 161 00:11:30,000 --> 00:11:33,000 Esto es muy importante que lo tengamos siempre en cuenta. 162 00:11:33,000 --> 00:11:35,000 Ya veremos cómo hemos de trabajar 163 00:11:35,000 --> 00:11:38,000 para intentar minimizar la contaminación 164 00:11:38,000 --> 00:11:40,000 sin perder sensibilidad. 165 00:11:40,000 --> 00:11:41,000 ¿De acuerdo? 166 00:11:42,000 --> 00:11:43,000 Voy. 167 00:11:45,000 --> 00:11:46,000 Vale. 168 00:11:48,000 --> 00:11:53,000 La PCR la diseñó Cari Meulis en 1883. 169 00:11:53,000 --> 00:11:54,000 Y esto es muy importante, 170 00:11:54,000 --> 00:11:58,000 porque en 1883 se conocían muchas cosas 171 00:11:58,000 --> 00:12:01,000 del DNA, de la replicación, de la transcripción, 172 00:12:01,000 --> 00:12:05,000 de cómo funcionaba todo el dogma central de la biología molecular, 173 00:12:05,000 --> 00:12:07,000 pero muchas cosas, 174 00:12:07,000 --> 00:12:10,000 daos cuenta que es prácticamente hace 40 años, 175 00:12:10,000 --> 00:12:12,000 hace 37 años, 176 00:12:12,000 --> 00:12:17,000 que se diseñó y publicó Meulis la técnica de PCR. 177 00:12:17,000 --> 00:12:18,000 Se conocían muchas cosas, 178 00:12:18,000 --> 00:12:20,000 pero hay muchas cosas que conocemos ahora 179 00:12:20,000 --> 00:12:22,000 que antes no las conocíamos. 180 00:12:22,000 --> 00:12:23,000 Entonces vamos a hacer un ejercicio 181 00:12:23,000 --> 00:12:26,000 de intentar meternos en la cabeza de Meulis 182 00:12:28,000 --> 00:12:30,000 y a Meulis, en realidad, 183 00:12:30,000 --> 00:12:32,000 el único objetivo que él tenía, 184 00:12:34,000 --> 00:12:38,000 Meulis estuvo estudiando la replicación del DNA 185 00:12:38,000 --> 00:12:40,000 y dijo, esto que las células, 186 00:12:40,000 --> 00:12:42,000 esta replicación del DNA 187 00:12:42,000 --> 00:12:45,000 que hemos estudiado nosotros en el tema 2 188 00:12:46,000 --> 00:12:48,000 el trimestre pasado, 189 00:12:48,000 --> 00:12:51,000 esta replicación que hacen las células en vivo, 190 00:12:51,000 --> 00:12:55,000 ¿sería yo capaz de hacerlo in vitro, en un tubo? 191 00:12:55,000 --> 00:12:57,000 Es decir, si yo cogiese un tubo, 192 00:12:57,000 --> 00:12:59,000 le meto un DNA 193 00:12:59,000 --> 00:13:02,000 y meto todos los enzimas que utiliza 194 00:13:03,000 --> 00:13:05,000 la célula para replicar ese DNA, 195 00:13:06,000 --> 00:13:08,000 in vitro, en el tubo, 196 00:13:09,000 --> 00:13:12,000 ¿sería capaz de reproducir la replicación del DNA? 197 00:13:12,000 --> 00:13:14,000 ¿Ese DNA se podría replicar? 198 00:13:16,000 --> 00:13:19,000 Esta fue la hipótesis de partida de Meulis, 199 00:13:19,000 --> 00:13:22,000 él pensaba que sí, que se podría replicar, 200 00:13:22,000 --> 00:13:24,000 solamente tenía que dar 201 00:13:24,000 --> 00:13:26,000 con las condiciones idóneas, 202 00:13:26,000 --> 00:13:29,000 óptimas, para que se pudiese replicar en el tubo, 203 00:13:29,000 --> 00:13:31,000 in vitro. 204 00:13:31,000 --> 00:13:33,000 Y después de conseguirlo por primera vez, 205 00:13:33,000 --> 00:13:35,000 hizo un diseño repetitivo, 206 00:13:35,000 --> 00:13:37,000 es decir, 207 00:13:37,000 --> 00:13:40,000 la PCR se basa en un diseño repetitivo, 208 00:13:41,000 --> 00:13:44,000 es decir, repetir de forma secuencial, 209 00:13:44,000 --> 00:13:46,000 cíclica, 210 00:13:46,000 --> 00:13:48,000 una vez, un segundo ciclo, 211 00:13:48,000 --> 00:13:50,000 un tercer ciclo, 212 00:13:50,000 --> 00:13:52,000 ciclos de replicación del DNA. 213 00:13:52,000 --> 00:13:55,000 Por tanto, son repeticiones secuenciales 214 00:13:55,000 --> 00:13:58,000 de ciclos de replicación del DNA. 215 00:13:59,000 --> 00:14:02,000 Entonces, vamos a hacer un ejercicio 216 00:14:03,000 --> 00:14:05,000 que me parece que es 217 00:14:05,000 --> 00:14:07,000 muy saludable. 218 00:14:07,000 --> 00:14:09,000 Es decir, nosotros ya sabemos 219 00:14:09,000 --> 00:14:11,000 qué es lo que ocurre en la replicación en vivo. 220 00:14:11,000 --> 00:14:12,000 ¿De acuerdo? 221 00:14:12,000 --> 00:14:14,000 Ya lo hemos estudiado en el tema 2. 222 00:14:14,000 --> 00:14:16,000 Entonces, vais a hacer aquí un ejercicio, 223 00:14:16,000 --> 00:14:18,000 una lista, 224 00:14:18,000 --> 00:14:20,000 los estudiantes que... 225 00:14:21,000 --> 00:14:23,000 los estudiantes que queréis aprender de verdad 226 00:14:23,000 --> 00:14:25,000 y que sois mínimamente inteligentes, 227 00:14:25,000 --> 00:14:27,000 le daréis al pause del vídeo, 228 00:14:27,000 --> 00:14:29,000 vais a hacer el ejercicio que os digo 229 00:14:29,000 --> 00:14:30,000 y luego ya lo corregimos. 230 00:14:30,000 --> 00:14:31,000 ¿De acuerdo? 231 00:14:31,000 --> 00:14:33,000 Entonces, en vivo, 232 00:14:33,000 --> 00:14:34,000 lo que tendréis que hacer es 233 00:14:34,000 --> 00:14:35,000 os cogéis del tema 2 234 00:14:35,000 --> 00:14:36,000 y vais a poner aquí una lista 235 00:14:36,000 --> 00:14:39,000 de todos los elementos que son necesarios, 236 00:14:39,000 --> 00:14:41,000 toda la maquinaria celular necesaria, 237 00:14:41,000 --> 00:14:43,000 para que se pueda realizar 238 00:14:43,000 --> 00:14:45,000 la replicación del DNA en vivo, 239 00:14:45,000 --> 00:14:46,000 en la célula. 240 00:14:46,000 --> 00:14:48,000 ¿Qué enzimas utilizamos? 241 00:14:48,000 --> 00:14:50,000 ¿Y qué características y condiciones 242 00:14:50,000 --> 00:14:52,000 físico-químicas son necesarias 243 00:14:52,000 --> 00:14:54,000 para que el DNA replique dentro de la célula? 244 00:14:54,000 --> 00:14:56,000 Y una vez lo tengáis, 245 00:14:56,000 --> 00:14:58,000 vais a hacer el esfuerzo 246 00:14:58,000 --> 00:15:00,000 que hizo Mulis, 247 00:15:00,000 --> 00:15:02,000 de decir, esto es lo que yo sé 248 00:15:02,000 --> 00:15:04,000 que la célula necesita. 249 00:15:04,000 --> 00:15:06,000 De todo esto, 250 00:15:06,000 --> 00:15:08,000 ¿qué es lo que yo tendría que poner in vitro 251 00:15:08,000 --> 00:15:10,000 en mi tubo, 252 00:15:10,000 --> 00:15:11,000 en mi tubo de ensayo, 253 00:15:11,000 --> 00:15:13,000 para que esa replicación 254 00:15:13,000 --> 00:15:15,000 se produzca in vitro? 255 00:15:16,000 --> 00:15:18,000 Pues ahora le dais al pause, 256 00:15:18,000 --> 00:15:20,000 hacéis este pequeño ejercicio 257 00:15:20,000 --> 00:15:22,000 y ahora lo corregimos. 258 00:15:22,000 --> 00:15:24,000 ¿De acuerdo?