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00:00:00,180 --> 00:00:13,660
A continuación, vamos a ver los pasos que tenemos que seguir para congelar las células.

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00:00:14,580 --> 00:00:20,179
Lo primero que tenemos que hacer es comprobar el estado de las células antes de congelarlas.

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00:00:21,019 --> 00:00:25,300
Recordamos que es ideal tener una viabilidad superior al 85%.

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00:00:25,300 --> 00:00:28,379
podemos ver la viabilidad del microscopio

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00:00:28,379 --> 00:00:32,600
si las células por ejemplo parecen muy vacualizadas

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00:00:32,600 --> 00:00:35,240
si está contaminado por supuesto

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00:00:35,240 --> 00:00:37,960
por bacterias lo podemos ver si el medio está turbio

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00:00:37,960 --> 00:00:39,159
y también al microscopio

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00:00:39,159 --> 00:00:43,439
en definitiva chequear que hay un estado correcto y óptimo

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00:00:43,439 --> 00:00:44,600
para poder congelar

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00:00:44,600 --> 00:00:49,500
luego también tenemos que realizar un lavado previo con BSS

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00:00:49,500 --> 00:00:52,380
sin calcio y sin magnesio

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00:00:52,380 --> 00:00:53,880
hay que recordarlo también

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00:00:53,880 --> 00:01:01,619
quitar el medio gastado y hacer un lavado después realizaremos la tripsinización pondremos la

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00:01:01,619 --> 00:01:10,700
tripsina que nos indique el protocolo 0.05 015 o la que sea en la dilución que nos indiquen hay

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00:01:10,700 --> 00:01:15,879
que añadir tripsina o también podemos raspar las células directamente según las células con las

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00:01:15,879 --> 00:01:22,540
que estemos trabajando es muy importante aquí vigilar el tiempo de tripsinización y que no

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00:01:22,540 --> 00:01:31,439
sea demasiado porque eso va a influir directamente en la viabilidad celular después realizaríamos el

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00:01:31,439 --> 00:01:37,640
contaje lo suspenderíamos en un pequeño volumen contamos las células vivas en una cámara de

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00:01:37,640 --> 00:01:46,560
neubauer con trip and blue por último procederíamos ya a la congelación utilizaríamos un criotubo y

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00:01:46,560 --> 00:01:51,900
congelaríamos a menos 80 en un mister frost y hay que recordar que la solución

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00:01:51,900 --> 00:01:57,739
de congelación llevaba dimetilsulfóxido para evitar que las membranas se dañen

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00:01:57,739 --> 00:02:02,340
por la congelación del agua por la formación de cristales y también un alto

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00:02:02,340 --> 00:02:07,519
porcentaje de suero bovino fetal a continuación vamos a ver cómo

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00:02:07,519 --> 00:02:11,039
realizaríamos paso a paso este protocolo