1
00:00:01,899 --> 00:00:06,639
Vale, pues en este tema, cosas importantes.

2
00:00:08,599 --> 00:00:16,600
Bien, empezábamos con el corte, cómo se cortaban las... cómo se podía cortar el ADN.

3
00:00:17,420 --> 00:00:28,600
Entonces, importante aquí, hay una serie de enzimas que se llaman endonucleasas de restricción o enzimas de restricción que cortan el ADN en puntos determinados.

4
00:00:28,600 --> 00:00:40,659
determinado. Esos puntos se denominan sitios de restricción. Estas endonucleas, estas

5
00:00:40,659 --> 00:00:48,840
enzimas, se obtienen de bacterias o de células prokaryotas. Y acordaros que teníamos varios

6
00:00:48,840 --> 00:00:54,520
tipos. Teníamos las de tipo 1 y tipo 3 y las de tipo 2. Las que nos interesan a nosotros

7
00:00:54,520 --> 00:01:03,159
son las de tipo 2 porque son las que van a cortar de manera consistente, o sea, en el sitio donde a nosotros nos interesa.

8
00:01:03,159 --> 00:01:15,620
En cambio, las de tipo 1 y las de tipo 3 cortaban lejos del sitio de restricción, lejos de donde a nosotros nos interesa que se corte el ADN.

9
00:01:15,620 --> 00:01:29,540
Y ahora, las de tipo 2 necesitaban magnesio como cofactor. Acordaros que algunas enzimas necesitan de un cofactor para poder actuar y, bueno, que no necesitan energía.

10
00:01:29,540 --> 00:01:54,040
Ahora, estas endonucleasas, importante también, cortan en secuencias palindrómicas, acordaros que las secuencias palindrómicas eran aquellas que se leen igual la secuencia del 5' a 3' como la de la cadena complementaria también de 5' a 3'.

11
00:01:54,040 --> 00:02:00,819
Aquí tenemos adenina, timina, citosina, citosina, aquí A, T, C, C, D, ¿vale? Se leen igual.

12
00:02:02,900 --> 00:02:07,840
Entonces, las endonucleasas de restricción cortan secuencias palindróficas.

13
00:02:08,400 --> 00:02:13,080
Y acordaros que cada enzima de restricción cortaba una secuencia.

14
00:02:14,699 --> 00:02:20,379
Teníamos, por ejemplo, la ECO-R1, ¿vale? Que cortaba, pues bueno, ahora no me acuerdo qué secuencia cortaba,

15
00:02:20,379 --> 00:02:24,400
pero cada una corta en una secuencia determinada.

16
00:02:26,539 --> 00:02:31,400
Cosas importantes también, pues que una vez que la enzima corta,

17
00:02:32,139 --> 00:02:35,780
puede ser que se formen o extremos rumos o extremos cohesivos.

18
00:02:36,500 --> 00:02:42,219
Los extremos rumos son de este tipo, el corte es vertical y no quedan bases desapareadas.

19
00:02:42,780 --> 00:02:48,340
Y en cambio los extremos cohesivos, el corte es de este tipo y sí que quedan bases desapareadas

20
00:02:48,340 --> 00:02:54,319
y por eso se llaman también extremos pegajosos porque luego al quedar bases desapareadas

21
00:02:54,319 --> 00:02:59,620
luego va a ser fácil unir otra vez, puede ser con esta misma cadena o con otra cadena

22
00:02:59,620 --> 00:03:06,099
que se haya cortado con la misma enzima, como por ejemplo cuando se hace al cortar el ADN,

23
00:03:07,039 --> 00:03:09,500
cuando la técnica de ADN es recombinante.

24
00:03:11,539 --> 00:03:16,560
Entonces, importante de aquí, las enzimas cortan enlaces fosfodiéster, ¿vale?

25
00:03:16,560 --> 00:03:44,159
Aquí estamos cortando enlaces, por ejemplo, entre citosina y la guanina. Aquí estamos cortando enlaces fosfodiéster. Y luego había unas enzimas que se llaman las ADN ligasas. Bueno, aquí hablábamos un poco de cómo se nombraban estas enzimas, estas endonucleasas, de la bacteria de la que provenían, etc.

26
00:03:44,159 --> 00:03:51,599
y una vez que está cortado el ADN, pues ahora lo que se puede hacer es unirlo

27
00:03:51,599 --> 00:03:57,939
y veíamos que los extremos cohesivos eran fáciles de unir porque ya tenemos aquí bases desapareadas

28
00:03:57,939 --> 00:04:04,979
y en cambio si se quiere unir extremos romos es más complicado porque aquí no hay bases desapareadas

29
00:04:04,979 --> 00:04:10,240
y entonces lo que se hace es añadir una serie de nucleótidos para que se pueda unir bien

30
00:04:10,240 --> 00:04:17,019
Y ahora la unión va a ser un enlace, se va a formar un enlace fosfo-diéster.

31
00:04:21,829 --> 00:04:24,089
Entonces, esto sería el corte y la unión.

32
00:04:25,569 --> 00:04:27,449
Después teníamos la hibridación.

33
00:04:28,889 --> 00:04:37,329
La hibridación, acordaros, el objetivo de la hibridación es detectar si tenemos una secuencia de ADN determinada.

34
00:04:39,110 --> 00:04:40,889
¿En qué se basa esta técnica?

35
00:04:40,889 --> 00:05:08,649
Pues se basa en que como el ADN lo podemos desnaturalizar, es decir, abrimos las dos cadenas y ahora lo que hacemos es, en vez de que se unan estas mismas cadenas,

36
00:05:08,649 --> 00:05:14,790
que se han desnaturalizado, que hemos abierto, pues ahora lo que vamos a hacer es añadir una secuencia de ADN

37
00:05:14,790 --> 00:05:20,370
que sea complementaria a una de esas cadenas, a un fragmento de esas cadenas.

38
00:05:20,949 --> 00:05:29,889
Y además, esa secuencia de ADN que añadimos va a estar marcada, se llama sonda y está marcada con un fluoróforo, por ejemplo.

39
00:05:29,889 --> 00:05:46,129
Entonces cuando se una la cadena de ADN que teníamos con el fragmento de ADN que estamos añadiendo, si son complementarias se van a hibridar, se van a unir y eso lo vamos a poder detectar después.

40
00:05:46,129 --> 00:06:10,949
Y acordaros que teníamos varios tipos. Era la SAUDEN, que era con fragmentos de ADN. Luego teníamos la NORDEN, que era añadir ARN. Lo que hacíamos era hibridar fragmentos de ARN.

41
00:06:10,949 --> 00:06:31,649
ARN y aquí lo único, una diferencia aquí en la SAUDEN, primero teníamos que cortar el ADN y sin embargo en la NORDEN con el ARN no hace falta cortarlo porque es una cadena más corta, pero luego el procedimiento era el mismo.

42
00:06:31,649 --> 00:06:56,519
Y después teníamos la misma técnica pero que se hacía in situ, no hace falta extraer el ADN. Esto era la hibridación. Después teníamos la secuenciación, conocer los nucleótidos que forman el ADN y el orden de estos nucleótidos.

43
00:06:56,519 --> 00:07:04,600
Esto ha tenido mucha importancia para conocer el genoma humano, el proyecto del genoma humano.

44
00:07:05,680 --> 00:07:13,519
Y acordaros aquí, la técnica que se utiliza, la que es un poco más sencilla, es la técnica Sanger.

45
00:07:15,339 --> 00:07:25,879
Acordaros que aquí teníamos cuatro tubos y que, importante aquí, en cada uno de ellos poníamos un didesoxirribonucleico.

46
00:07:26,519 --> 00:07:40,839
Tridesoxinucleótido trifosfato, ¿vale? Bueno, da una adenina, acordaros que no tenía OHs y que por lo tanto no puede continuar copiándose la cadena.

47
00:07:40,839 --> 00:07:57,839
Y acordaros que luego se hacía una electroforesis y que a partir de la electroforesis se puede deducir cuál es la secuencia de nucleótidos del ADN que estamos analizando.

48
00:07:57,839 --> 00:08:24,839
Entonces, importante de aquí es lo que se utiliza, aparte de, o sea, es como copiar la cadena de ADN, lo que pasa, si eso se copia con la ADN polimerasa, necesitamos también un cebador, necesitamos también los cuatro nucleótidos, los de siempre, los normales, pero luego necesitamos otros cuatro nucleótidos que no tengan OH en la pentosa, en el grupo azúcar.

49
00:08:24,839 --> 00:08:37,399
Y en cada tubo de estos se añadía aquí la adenina sin la didesoxi, aquí la timina, la citosina, la guanina, en cada uno de ellos uno diferente.

50
00:08:38,740 --> 00:08:40,559
Esta es la técnica Sanford.

51
00:08:40,559 --> 00:09:01,740
Y luego teníamos ya unas técnicas más actuales de secuenciación, que ya eran con reactivos fluorescentes y ya no hacía falta poner cuatro tubos, en un mismo tubo ya se conseguía analizar.

52
00:09:01,740 --> 00:09:04,960
la de la técnica Sanger

53
00:09:04,960 --> 00:09:08,799
luego teníamos la PCR

54
00:09:08,799 --> 00:09:10,080
bueno, vamos a ver primero

55
00:09:10,080 --> 00:09:12,519
la clonación

56
00:09:12,519 --> 00:09:14,480
la del ADN recombinante

57
00:09:14,480 --> 00:09:15,580
y luego volvemos aquí

58
00:09:15,580 --> 00:09:19,620
vale, aquí

59
00:09:19,620 --> 00:09:25,519
la clonación, la técnica del ADN recombinante

60
00:09:25,519 --> 00:09:26,019
acordaros

61
00:09:26,019 --> 00:09:28,620
en esta técnica es una técnica

62
00:09:28,620 --> 00:09:30,460
de clonación celular

63
00:09:30,460 --> 00:09:32,279
es clonación celular porque

64
00:09:32,279 --> 00:09:34,419
estamos utilizando células

65
00:09:34,419 --> 00:09:36,320
en la PCR

66
00:09:36,320 --> 00:09:42,919
es una clonación a celular y ahora qué es lo que se pretende con esta técnica

67
00:09:42,919 --> 00:09:50,320
pues obtener grandes cantidades de un fragmento de adn que sabemos que

68
00:09:50,320 --> 00:09:55,580
codifica a una proteína que a nosotros nos interesa obtener mucha cantidad de

69
00:09:55,580 --> 00:10:02,320
esa proteína puede ser la insulina la hormona del crecimiento o cualquier otra

70
00:10:02,320 --> 00:10:10,379
proteína. Entonces, ¿cómo hacíamos? Lo que hacíamos era cortar el fragmento de ADN

71
00:10:10,379 --> 00:10:17,980
que nosotros sabemos que codifica esa proteína y utilizábamos un vector de clonación.

72
00:10:19,220 --> 00:10:24,379
¿Os acordáis? Lo que tenemos que cortar con las mismas endonucleasas de restricción.

73
00:10:24,379 --> 00:10:36,919
Y luego lo que hacíamos era unir estos dos fragmentos, el fragmento de ADN que habíamos cortado con nuestro vector de clonación.

74
00:10:38,500 --> 00:10:45,580
Uníamos y aquí ya tenemos el ADN recombinante, porque son los dos fragmentos de ADN.

75
00:10:46,200 --> 00:10:52,679
Y luego lo que hacíamos era insertar este ADN recombinante en una célula y hacer que creciera.

76
00:10:52,679 --> 00:11:10,240
Ahora, cosas importantes de aquí, pues cómo eran los vectores de clonación, cómo tenían que tener una secuencia para que se puedan replicar por sí mismos, cómo tenían que tener también alguna secuencia.

77
00:11:10,240 --> 00:11:35,070
Si os fijáis aquí en esta gráfica de la derecha, aquí teníamos también secuencias donde pueden cortar las endonucleasas. Por ejemplo, aquí cortaría la eco R1, aquí cortaría otra endonucleasa.

78
00:11:35,070 --> 00:11:40,649
Entonces tenemos diferentes secuencias donde pueden cortar las enzimas de restricción.

79
00:11:41,450 --> 00:11:53,809
Importante también, estos vectores tienen que tener una secuencia que nos sirva para luego identificar si el plasmio se ha introducido en la célula o no.

80
00:11:54,909 --> 00:12:01,350
Y esas secuencias normalmente son secuencias que tienen resistencia a antibióticos.

81
00:12:01,350 --> 00:12:07,649
O sea, son marcadores que son genes que dan resistencia a antibióticos.

82
00:12:09,409 --> 00:12:14,350
Bueno, normalmente el más típico vector de clonación son los plásmidos,

83
00:12:15,710 --> 00:12:21,649
luego teníamos los bacteriófagos, los cósmidos, los BAC, los JAK.

84
00:12:25,129 --> 00:12:31,269
Y ahora lo que hacíamos era introducir ese ADN recombinante en la célula hospedadora.

85
00:12:31,269 --> 00:12:35,789
Acordaros también que las células tenían que tener una serie de características.

86
00:12:37,250 --> 00:12:50,690
Y por último, tenemos que comprobar si esa célula hospedadora tiene el plasmido.

87
00:12:55,240 --> 00:13:01,919
Primero tenemos que identificar si esas células han adquirido el plasmido.

88
00:13:01,919 --> 00:13:25,820
¿Cómo se hace eso? Pues se pone el cultivo en un antibiótico. Ahora, si está el plásmido, como este plásmido tiene resistencia a los antibióticos, pues crecerán esas bacterias, pero si no tiene el plásmido, pues esas bacterias no van a crecer.

89
00:13:25,820 --> 00:13:47,470
A ver, voy a buscar a ver si eso está, si lo teníamos por aquí. Bueno, eso es, primero identificamos aquí, identificamos las bacterias que tengan el plásmido, entonces ponemos en antibiótico, pues solamente van a crecer esta de aquí de la izquierda, esta que tiene el plásmido.

90
00:13:47,470 --> 00:14:10,960
Y lo siguiente que tenemos que ver es que si esas bacterias, además de, o sea, si tienen el ADN recombinante y para ello había otra forma que era, vale, a ver dónde está esto, aquí.

91
00:14:10,960 --> 00:14:32,559
Entonces, para ver si la célula se ha modificado, o sea, si contiene el ADN recombinante, lo que hacíamos era romper aquí este gen en el plásmido, que este gen codifica a proteínas que tienen color azul.

92
00:14:32,559 --> 00:14:51,320
Por lo tanto, si introducimos aquí, si rompemos aquí esta secuencia, este gen, e introducimos aquí nuestro fragmento de ADN de interés, pues se va a romper este gen y ya no se nos van a formar células de color azul, sino que se nos van a formar células de color blanco.

93
00:14:51,320 --> 00:15:03,259
Entonces, primero identificar si la célula contiene el plásmido y segundo identificar si realmente tenemos el ADN recombinante o solamente tenemos el plásmido

94
00:15:03,259 --> 00:15:20,679
Y otra cosa aquí que se me ha olvidado deciros, cómo se transformaban las células, que podía ser por competencia natural, por competencia artificial o por electroporación

95
00:15:27,559 --> 00:15:52,059
Bueno, estos eran los hospedadores, los eucarióticos y algunas aplicaciones del ADN recuminante. Y ahora volvemos a la PCR.

96
00:15:52,059 --> 00:16:23,059
Bueno, la PCR. Importante lo que significa la sigla PCR, de reacción en cadena de la polimerasa. Importante también las etapas, la desnaturalización, es decir, que se rompen los puentes de hidrógeno entre las bases nitrogenadas.

97
00:16:23,059 --> 00:16:44,779
La hibridación, aquí se necesitan dos primers, estos dos primers son los que delimitan el fragmento que se va a copiar y ahora una vez que ya están los primers, la etapa de elongación, es decir, la ADN polimerasa empieza a copiar esas dos cadenas.

98
00:16:44,779 --> 00:17:06,400
Ahora, otra cosa importante. Estas tres etapas se repiten cíclicamente entre 20 y 40 veces. Acordaos de cuando pusimos en las prácticas y se van aumentando exponencialmente las cadenas de ADN.

99
00:17:06,400 --> 00:17:22,119
Y acordaros también de los componentes de la PCR. ¿Qué necesitamos? Pues el ADN que se quiere copiar. Bueno, importante, perdón, antes de esto, el objetivo de la PCR.

100
00:17:22,119 --> 00:17:44,319
El objetivo es obtener muchas copias de un fragmento de ADN partiendo de un mínimo. Aquí lo que os decía antes, aquí en este caso es una clonación acelular, porque aquí no tenemos ninguna célula, es una clonación acelular.

101
00:17:44,319 --> 00:18:06,200
Entonces, esos son los componentes que necesitamos. El ADN molde. Luego, la TAC polimerasa. Acordaros que antiguamente se utilizaba otra enzima pero que no resistía a los cambios de temperatura y en cambio está así. La TAC polimerasa resiste a los cambios de temperatura.

102
00:18:06,839 --> 00:18:09,819
Necesitamos eso, dos primers o cebadores.

103
00:18:11,319 --> 00:18:19,299
Los desoxinucleótidos, para que la ADN polimerasa vaya copiando y vaya cogiendo la adenina, la timina.

104
00:18:20,519 --> 00:18:25,039
También se necesita iones magnesio, dos más, para estimular a la enzima.

105
00:18:25,039 --> 00:18:30,359
Los iones magnesio actúan de cofactor, para que la enzima actúe.

106
00:18:30,359 --> 00:18:45,440
Y luego se necesita también que todo ello hacerlo en una disolución que sea amortiguadora, ¿vale? Porque acordaros que dependiendo del pH las proteínas se pueden desnaturalizar.

107
00:18:45,440 --> 00:18:48,720
Y por último se necesita el termociclador.

108
00:18:56,339 --> 00:19:13,980
Entonces, ¿problema de la PCR? Pues que, claro, es una técnica muy sensible, muy sensible que significa que con una mínima cantidad de muestra podemos obtener gran cantidad de copias de ADN.

109
00:19:13,980 --> 00:19:29,940
Pero claro, ¿cuál es el problema? Que si hay una pequeña contaminación, pues puede ser que se nos amplifique un fragmento de ADN que no nos interesa, o sea, que no es el que a nosotros nos interesa.

110
00:19:29,940 --> 00:19:49,660
Por lo tanto, una solución a este problema es la PCR en tiempo real o cuantitativa. Si os acordáis, en esta PCR lo que hacíamos era, los primers estaban marcados con un fluoróforo, es decir, son como una serie de sondas.

111
00:19:49,660 --> 00:19:57,980
y así podíamos ir analizando, cuantificando cómo se va amplificando el ADN

112
00:19:57,980 --> 00:20:05,759
y además así en la PCR normal teníamos que hacer después de la PCR

113
00:20:05,759 --> 00:20:11,359
se hace una electroforesis en gel de agarosa, pues aquí no es necesario hacer la electroforesis.

114
00:20:11,359 --> 00:20:28,980
Vale, y luego teníamos la transcriptasa inversa que es simplemente para que partimos del ADN.

115
00:20:29,759 --> 00:20:34,859
Entonces necesitamos encima que la transcriptasa inversa que sintetice el ADN complementario.

116
00:20:34,859 --> 00:20:46,990
Entonces, ahora quería poneros de la práctica que hicimos.

117
00:21:01,180 --> 00:21:11,289
Esto no está bien preparada la presentación, pero solamente es para repasar lo que hicimos en la práctica.

118
00:21:11,289 --> 00:21:21,529
Entonces, si os acordáis en la práctica que hicimos teníamos cuatro muestras de maíz y queríamos saber cuál era transgénico

119
00:21:21,529 --> 00:21:29,450
En el aula virtual tenéis el protocolo de la práctica que era de la marca de BioT

120
00:21:29,450 --> 00:21:36,230
Y ahí os explica, hay un poco de introducción de teoría de lo que son los transgénicos

121
00:21:36,230 --> 00:21:42,390
O sea, los compuestos transgénicos son aquellos a los que se ha introducido un gen diferente.

122
00:21:43,849 --> 00:21:51,930
Entonces, en esta práctica lo que nos interesaba era saber cuál de estas cuatro muestras de maíz, cuál era transgénico.

123
00:21:53,630 --> 00:21:58,509
¿Cómo hicimos la práctica? Pues en la primera etapa lo que hicimos fue extraer el ADN.

124
00:21:58,509 --> 00:22:16,250
En esta etapa, esto lo tenéis como se hizo en el protocolo, pero esto no lo tenéis que aprender, solamente eso, saber que extrajimos el, primero había que extraer el ADN, que esto fue lo que nos llevó un día entero.

125
00:22:16,250 --> 00:22:21,349
El siguiente paso que hicimos fue ya hacer la PCR

126
00:22:21,349 --> 00:22:25,769
Entonces en el kit que ya nos ofrecían en BioT

127
00:22:25,769 --> 00:22:30,849
Ya teníamos lo que se llama mix de la PCR

128
00:22:30,849 --> 00:22:36,670
Pues aquí en este mix ya teníamos todos los componentes que acabamos de ver

129
00:22:36,670 --> 00:22:39,230
Ahora los componentes para hacer la PCR

130
00:22:39,230 --> 00:22:43,049
Acordaros que poníamos en el Ependor

131
00:22:43,049 --> 00:22:45,549
Ependor que eran muy pequeños

132
00:22:45,549 --> 00:22:48,569
y que lo poníamos en el termociclador.

133
00:22:49,869 --> 00:22:57,890
Ahora, una cosa importante, aquí está, siempre estamos hablando que en la PCR tenemos dos primers,

134
00:22:57,970 --> 00:23:01,549
que esos dos primers van a amplificar un segmento de ADN.

135
00:23:02,349 --> 00:23:09,950
Pues aquí, en este caso, en esta práctica, lo que tenemos son cuatro primers.

136
00:23:10,930 --> 00:23:16,470
Dos primers van a amplificar regiones de maíz normal, regiones endógenas.

137
00:23:17,529 --> 00:23:24,130
Y ese fragmento, como luego vamos a hacer una electroforesis, pues nos debería aparecer a 226 pares de base.

138
00:23:25,230 --> 00:23:36,130
Y los otros dos primers nos van a amplificar genes foráneos, o sea, nos van a amplificar genes que nos están identificando que tenemos maíz transgénico.

139
00:23:36,130 --> 00:23:43,269
transgénico. Y ese gen foráneo va a ser un fragmento que va a aparecer a 184 pares

140
00:23:43,269 --> 00:23:50,230
de bases cuando hagamos la electroforesis. Entonces tenemos cuatro primers en el mismo

141
00:23:50,230 --> 00:23:58,930
ependor. Dos amplifican a maíz, un gen de maíz normal, endógeno, y otros dos primers

142
00:23:58,930 --> 00:24:03,809
Nos amplifican un gen de maíz transgénico foráneo.

143
00:24:05,960 --> 00:24:17,720
Entonces hicimos la PCR, bueno, pusimos el programa de temperaturas que nos indicaban para hacer las tres etapas

144
00:24:17,720 --> 00:24:23,119
y pusimos, me acuerdo, creo que 25 ciclos, no me acuerdo muy bien.

145
00:24:23,119 --> 00:24:50,720
Ahora, una vez terminada la PCR, lo que tenemos que analizar, tenemos que ver es si hemos amplificado el fragmento de ADN que a nosotros nos interesa y además con la electroforesis vamos a identificar en este caso si tenemos ADN transgénico o no, o sea, perdón, maíz transgénico o no.

146
00:24:50,720 --> 00:25:03,180
Por lo tanto, lo que hicimos luego fue hacer la electroforesis en gel de agarosa, pero para eso tuvimos primero que preparar el gel de agarosa.

147
00:25:04,440 --> 00:25:12,839
¿Os acordáis? El gel de agarosa lo preparamos disolviendo agarosa en una disolución tampón que se llama tampón TAE.

148
00:25:12,839 --> 00:25:35,240
T-A-E. Entonces, aquí acordaros que teníamos, o sea, había que ver qué tamaño eran nuestras cubetas. Hay diferentes tamaños de cubeta, tenemos 7x7, 7x10 y 15x11.

149
00:25:35,240 --> 00:25:44,619
La que nosotros teníamos era la de 7 por 10 y en esta cubierta caben 60 mililitros de disolución.

150
00:25:45,920 --> 00:25:52,220
Entonces, acordaros que teníamos que disolver la agarosa en el tampón TAE.

151
00:25:52,920 --> 00:25:59,460
Ahora, la disolución de agarosa que se prepara es al 3%.

152
00:25:59,460 --> 00:26:20,119
O sea, que si preparáramos 100 mililitros, pues tendríamos que pesar 3 gramos de agarosa. Pero como nosotros necesitamos 60 mililitros, pues si solo queremos 60 mililitros, tendríamos que calcular cuánta agarosa necesitamos para disolver en esos 60 mililitros.

153
00:26:20,119 --> 00:26:27,859
O sea, 3 gramos de agarosa en 100 mililitros, o sea, 3 gramos dividido entre 100 por 60 mililitros.

154
00:26:30,420 --> 00:26:35,559
¿Queremos preparar el doble? ¿Por qué queremos hacer dos geles?

155
00:26:35,660 --> 00:26:39,000
Pues serían 3 por 120 partido de 100.

156
00:26:39,700 --> 00:26:43,500
Y los gramos que nos salgan aquí serían los gramos que tenemos que disolver.

157
00:26:43,740 --> 00:26:50,000
Si os acordáis, los disolvíamos, no me acuerdo si utilizamos R. Meyer o una botella, no me acuerdo muy bien.

158
00:26:50,119 --> 00:27:02,940
y lo metíamos en el microondas, luego lo echábamos a la cubeta y colocábamos el peine para que se nos generara cuando se enfríe, que se nos queden los pocillos.

159
00:27:03,819 --> 00:27:06,740
En esos pocillos es donde ya introducíamos nuestra muestra.

160
00:27:06,740 --> 00:27:25,759
Ahora, antes que esto, para preparar, o sea, para disolver el gel de agarosa, perdón, la agarosa se disuelve en disolución tampón TAE, pero tenemos que disolverlo en disolución tampón TAE de 1 por, pero la que teníamos era de 50 por.

161
00:27:25,759 --> 00:27:43,380
Entonces tenemos que hacer los cálculos, esto es la concentración, teníamos que hacer los cálculos para preparar 1 por, entonces esto es por la relación de concentraciones, V1 por C1 igual a V2 por C2,

162
00:27:43,380 --> 00:28:05,039
Pues calculamos qué volumen tenemos que coger de la disolución de 50 por, de la que está más concentrada, o sea, 3 mililitros, tenemos que coger 3 mililitros de la disolución de 50 por y enrasar con agua hasta 150, porque son 150 mililitros los que preparamos en las prácticas.

163
00:28:05,039 --> 00:28:19,339
Si yo os digo, pues vamos a preparar 200 mililitros de disolución tampón TAE, 1 por, ¿cuál volumen tendrías que coger si tenemos de la concentración es 50 por?

164
00:28:19,339 --> 00:28:33,400
Pues sería aquí lo mismo, aquí pondríamos en vez de 150, pondríamos 200 por 1 dividido entre 50, bueno, el 10 a la menos 3 lo podríamos quitar.

165
00:28:35,039 --> 00:28:41,660
vale entonces esto sería eso para preparar el gel de agarosa

166
00:28:41,660 --> 00:28:50,180
y luego ya pondríamos la muestra en los pocillos y si os acordáis pusimos las

167
00:28:50,180 --> 00:28:55,299
cuatro muestras y luego pusimos los controles negativos

168
00:28:55,299 --> 00:29:01,359
y un control positivo no perdón esto está mal es era un control negativo y

169
00:29:01,359 --> 00:29:15,400
y dos positivos. Entonces, el control positivo era una disolución de ADN que lo daban ya en el kit y que es maíz normal.

170
00:29:16,220 --> 00:29:26,240
Y había otro control positivo, vale, esto es positivo, esto de aquí, otro control positivo en el que teníamos la disolución de ADN de maíz transgénico.

171
00:29:26,240 --> 00:29:47,829
Por lo tanto, si os acordáis, pinchábamos las muestras, aplicábamos el campo eléctrico, como el ADN tiene carga negativa se va a desplazar hacia el polo positivo y se van a separar unos fragmentos de ADN de otros por su masa molecular.

172
00:29:47,829 --> 00:30:17,690
Por lo tanto, bueno, aquí no tengo cómo daría en total, ¿no? Pero bueno, para que lo veáis un poco, el control negativo, pues, bueno, perdón, el control positivo, ¿no? Teníamos, a ver, sí, aquí el 2 y el 3 es lo mismo, es control positivo de ADN, o sea, de maíz normal, serían esta el 2 y el 3.

173
00:30:17,829 --> 00:30:38,079
Pues esta solamente nos tiene que dar un fragmento a 226 pares de bases, que es lo que hemos visto antes, que era el principio, aquí, ¿vale? Si es maíz normal nos tiene que salir a 226 y si es transgénico a 184.

174
00:30:38,079 --> 00:30:48,349
Por lo tanto, el maíz normal nos tiene que dar simplemente una banda a 226.

175
00:30:48,809 --> 00:30:56,049
Y el 4 y el 5, que son estos dos, nos van a salir dos bandas, la de 226 y la de 184.

176
00:30:58,230 --> 00:31:08,190
Y ahora, imaginaros que en esta de aquí, que hemos puesto maíz normal, nos hubiera salido otra banda.

177
00:31:09,190 --> 00:31:13,890
¿Qué nos está diciendo eso? Pues que algo ha fallado en la PCR, hemos debido hacer algo mal,

178
00:31:14,329 --> 00:31:17,289
porque no tiene por qué salir aquí otra banda de maíz transgénico.

179
00:31:18,609 --> 00:31:26,009
Ahora, imaginaros que aquí, en la que hemos puesto ADN transgénico, no nos sale esta banda, la de 184.

180
00:31:26,490 --> 00:31:34,789
¿Qué nos está indicando esto? Pues también que hemos hecho algo mal de la PCR, o la PCR, o la electroforesis.

181
00:31:34,789 --> 00:31:45,109
Algo ha salido mal, porque aquí no nos está dando banda de 184 de maíz transgénico. Por eso se hacen los controles.

182
00:31:45,109 --> 00:32:07,609
Y luego aquí he puesto esta otra que sería, esto ya son muestras y entonces aquí lo que nos están indicando que la 2, la 4, la 5 y la 7 son maíz transgénico porque nos aparecen dos bandas.

183
00:32:07,609 --> 00:32:11,650
esta sería 226 y esta 184

184
00:32:11,650 --> 00:32:16,349
y en cambio la 3 y la 6 es maíz normal

185
00:32:16,349 --> 00:32:19,430
porque solamente nos aparece una banda

186
00:32:19,430 --> 00:32:26,829
vale, bueno pues esto era lo que quería que vierais

187
00:32:26,829 --> 00:32:36,890
y vale, de esto

188
00:32:36,890 --> 00:32:39,609
de electroforesis en gel de poliaquilamida

189
00:32:39,609 --> 00:32:45,230
mirad también, creo que es en el tema, en la unidad 3

190
00:32:45,230 --> 00:32:49,589
viene también un ejercicio

191
00:32:49,589 --> 00:33:10,789
de, creo que es aquí en esta parte

192
00:33:10,789 --> 00:33:16,190
electrofrenesis

193
00:33:16,190 --> 00:33:20,150
electrofrenesis

194
00:33:20,150 --> 00:33:26,569
bueno, en las videoconferencias

195
00:33:26,569 --> 00:33:30,109
ya os expliqué como se hacía la electrofrenesis

196
00:33:30,109 --> 00:33:35,000
por aquí había un ejercicio

197
00:33:35,000 --> 00:33:36,960
para hacer

198
00:33:36,960 --> 00:33:57,640
pues ahora no lo encuentro

199
00:33:57,640 --> 00:33:58,839
a lo mejor era en el otro

200
00:33:58,839 --> 00:34:01,579
Profe, perdón, quería hacer

201
00:34:01,579 --> 00:34:03,599
una pregunta porque me puede conectar ahorita

202
00:34:03,599 --> 00:34:05,859
pero ya me toca volver a entrar a trabajar

203
00:34:05,859 --> 00:34:06,680
Sí, sí, dime

204
00:34:06,680 --> 00:34:07,440
De cara

205
00:34:07,440 --> 00:34:10,780
al examen como tal

206
00:34:10,780 --> 00:34:13,199
¿Cómo va a estar?

207
00:34:13,539 --> 00:34:15,019
¿Cómo va a ser el examen?

208
00:34:15,239 --> 00:34:17,760
¿Cómo se va a colocar

209
00:34:17,760 --> 00:34:19,860
la parte práctica? ¿Va a poner ejercicio?

210
00:34:20,039 --> 00:34:21,820
¿Cómo va a ser el examen como tal?

211
00:34:21,880 --> 00:34:22,400
Y perdone

212
00:34:22,400 --> 00:34:24,820
si lo comentó antes porque es que ahorita

213
00:34:24,820 --> 00:34:26,099
fue que me pude conectar

214
00:34:26,099 --> 00:34:28,440
el otro día yo creo que ya

215
00:34:28,440 --> 00:34:30,940
ya lo dije pero no pasa

216
00:34:30,940 --> 00:34:31,239
nada

217
00:34:31,239 --> 00:34:34,679
voy a poneros en el aula virtual

218
00:34:34,679 --> 00:34:35,780
a ver si puedo ir mañana

219
00:34:35,780 --> 00:34:39,059
os pongo por escrito

220
00:34:39,059 --> 00:34:41,019
como va a ser el examen

221
00:34:41,019 --> 00:34:42,920
pero os lo digo también

222
00:34:42,920 --> 00:34:43,960
en principio

223
00:34:43,960 --> 00:34:46,519
todavía no

224
00:34:46,519 --> 00:34:48,360
lo tengo terminado

225
00:34:48,360 --> 00:34:50,960
pero habrá 25

226
00:34:50,960 --> 00:34:53,019
alrededor, de 25

227
00:34:53,019 --> 00:34:55,199
más o menos, preguntas de test

228
00:34:55,199 --> 00:34:56,920
con 4 respuestas

229
00:34:56,920 --> 00:34:57,940
¿vale?

230
00:34:58,099 --> 00:35:00,960
cada 4 mal restan

231
00:35:00,960 --> 00:35:01,460
una bien

232
00:35:01,460 --> 00:35:07,000
puede que haya también alguna pregunta

233
00:35:07,000 --> 00:35:08,219
de verdadero o falso

234
00:35:08,219 --> 00:35:10,739
y puede que igual haya

235
00:35:10,739 --> 00:35:12,019
alguna pregunta también

236
00:35:12,019 --> 00:35:14,139
de escribir

237
00:35:14,139 --> 00:35:16,679
pero igual, simplemente igual

238
00:35:16,679 --> 00:35:18,360
rellenar una frase

239
00:35:18,360 --> 00:35:19,579
o algo

240
00:35:19,579 --> 00:35:22,599
o escribir una frase pero corta

241
00:35:22,599 --> 00:35:24,320
vale, entonces

242
00:35:24,320 --> 00:35:26,780
las preguntas de test

243
00:35:26,780 --> 00:35:28,579
y bueno, las de verdadero

244
00:35:28,579 --> 00:35:29,780
y falso en general

245
00:35:29,780 --> 00:35:32,199
miraros las

246
00:35:32,199 --> 00:35:34,360
autoevaluaciones que habéis hecho porque serán

247
00:35:34,360 --> 00:35:35,000
de ese estilo

248
00:35:35,000 --> 00:35:38,739
miraros también

249
00:35:38,739 --> 00:35:40,380
lo que os decía

250
00:35:40,380 --> 00:35:42,360
antes, en cada unidad

251
00:35:42,360 --> 00:35:44,280
de trabajo, a lo largo de cada

252
00:35:44,280 --> 00:35:46,440
documento vais teniendo

253
00:35:46,440 --> 00:35:47,880
ahí preguntas

254
00:35:47,880 --> 00:35:51,340
no sé si lo llaman autoevaluación, no sé cómo se llama

255
00:35:51,340 --> 00:35:54,599
pero ahí también tenéis cosillas, miraros eso también

256
00:35:54,599 --> 00:35:55,699
¿vale?

257
00:35:57,699 --> 00:36:00,280
¿qué más? luego va a haber

258
00:36:00,280 --> 00:36:02,380
problemas de

259
00:36:02,380 --> 00:36:06,380
la parte de replicación

260
00:36:06,380 --> 00:36:09,360
bueno, más bien de transcripción y de traducción

261
00:36:09,360 --> 00:36:12,039
aquellos problemas que hicimos

262
00:36:12,039 --> 00:36:14,480
pues de esos de

263
00:36:14,480 --> 00:36:24,280
Si tengo la cadena de ARN mensajero, una serie de nucleótidos, ¿qué proteínas se sintetizan?

264
00:36:25,380 --> 00:36:36,860
Yo os daría el código genético y vosotros tenéis que ir cada triplete, pues este metionina, tal, así, de ese estilo de los que hicimos.

265
00:36:36,860 --> 00:36:56,380
De esos ejercicios también había alguno que había algún dibujo que teníais que poner, había uno que era la transcripción o la traducción y teníais que poner cuáles eran los ribosomas, cuáles eran el ARN de transferencia, el aminoácido y eso.

266
00:36:56,380 --> 00:37:10,460
Miraros esos ejercicios. Y después, ¿habrá algún ejercicio que esté más relacionado con lo que se llama supuestos prácticos?

267
00:37:10,460 --> 00:37:18,699
Esos ejercicios, ¿qué puede ser? Pues puede ser una cromatografía en capa fina, por ejemplo

268
00:37:18,699 --> 00:37:23,860
Que eso lo vimos en prácticas y vimos también en la simulación

269
00:37:23,860 --> 00:37:30,260
En una de las videoconferencias hicimos una simulación con el programa este de Biomodel

270
00:37:30,260 --> 00:37:36,579
Puede ser que os pregunte algo también relacionado con la electroforesis en gel de poliacrilamida

271
00:37:36,579 --> 00:37:42,420
Que eso no hemos hecho prácticas, pero sí hicimos una simulación también con un biomóvil.

272
00:37:43,820 --> 00:37:59,960
Puede ser esto último que hemos visto de electroforesis en gel de agarosa, cómo preparar el gel, cómo preparar la disolución TAE, puede ser cómo se hace la PCR.

273
00:37:59,960 --> 00:38:04,000
y pues también podría ser

274
00:38:04,000 --> 00:38:06,099
quizá si os acordáis

275
00:38:06,099 --> 00:38:06,280
de

276
00:38:06,280 --> 00:38:09,380
en la técnica Sanger

277
00:38:09,380 --> 00:38:11,860
que también se pueden identificar

278
00:38:11,860 --> 00:38:13,719
la secuencia de aminoácidos

279
00:38:13,719 --> 00:38:15,260
que hicimos un problema

280
00:38:15,260 --> 00:38:17,539
podría ser eso también

281
00:38:17,539 --> 00:38:19,519
y

282
00:38:19,519 --> 00:38:23,739
pues ahora mismo

283
00:38:23,739 --> 00:38:25,900
no se me ocurre así

284
00:38:25,900 --> 00:38:29,329
así nada más

285
00:38:29,329 --> 00:38:30,349
eso sería

286
00:38:30,349 --> 00:38:33,829
más o menos el examen

287
00:38:33,829 --> 00:38:36,010
Vale, gracias

288
00:38:36,010 --> 00:38:46,449
Y luego

289
00:38:46,449 --> 00:38:49,050
lo que os decía también

290
00:38:49,050 --> 00:38:52,989
la parte, la primera

291
00:38:52,989 --> 00:38:55,010
que es de test y esa parte

292
00:38:55,010 --> 00:38:58,829
eso contará entre un 40 y un 60%

293
00:38:58,829 --> 00:39:00,130
eso todavía no lo tengo

294
00:39:00,130 --> 00:39:02,710
decidido

295
00:39:02,710 --> 00:39:06,889
y bueno, luego

296
00:39:06,889 --> 00:39:12,500
luego tenéis también los que habéis hecho las prácticas

297
00:39:12,500 --> 00:39:14,780
porque eso al final también cuenta

298
00:39:14,780 --> 00:39:22,389
siempre es para subir nota, nunca para bajar

299
00:39:22,389 --> 00:39:28,030
y pues eso más o menos

300
00:39:28,030 --> 00:39:30,090
sería el examen

301
00:39:30,090 --> 00:39:36,309
yo os pondría, os voy a poner también en el documento

302
00:39:36,309 --> 00:39:37,969
este, os voy a poner

303
00:39:37,969 --> 00:39:42,409
bueno, que tenéis que traer calculadora

304
00:39:42,409 --> 00:39:43,250
el DNI

305
00:39:43,250 --> 00:39:46,829
tenéis que ser puntuales

306
00:39:46,829 --> 00:39:47,530
¿vale?

307
00:39:49,690 --> 00:39:50,769
y bueno, antes de eso

308
00:39:50,769 --> 00:39:52,269
¿tenéis alguna duda de

309
00:39:52,269 --> 00:39:54,750
de esto

310
00:39:54,750 --> 00:39:57,090
de la parte de teoría

311
00:39:57,090 --> 00:39:58,909
de lo que hemos visto hoy?

312
00:40:01,860 --> 00:40:02,639
¿alguna otra duda?

313
00:40:02,940 --> 00:40:03,199
así de

314
00:40:03,199 --> 00:40:16,719
no, vale