1
00:00:23,539 --> 00:00:34,000
Pues, vamos a ver esta unidad de trabajo, que es la 5, que nos habla de toxicidad y mutagenicidad.

2
00:00:35,240 --> 00:00:38,299
Bueno, pues vamos a ver qué es esto.

3
00:00:41,539 --> 00:00:50,119
Vale, pues lo primero, un agente tóxico es aquel compuesto que tiene actividad tóxica y que está producida por un ser vivo

4
00:00:50,119 --> 00:00:57,179
y que además da lugar a intoxicaciones que pueden ser de carácter muy grave y de origen alimentario.

5
00:00:58,320 --> 00:01:05,340
Aquí se ha puesto el hongo este, la manita sphaloides, que es el hongo, bueno, se llama hongo de la muerte

6
00:01:05,340 --> 00:01:11,819
porque es el hongo más mortífero del mundo, que es responsable del 90% de las intoxicaciones relacionadas con setas.

7
00:01:13,180 --> 00:01:17,099
Tiene origen en Europa, pero ya se ha extendido por todo el mundo.

8
00:01:17,099 --> 00:01:27,099
Y este hongo lo que tiene es que contiene unas amatoxinas que lo que hacen es impedir que se sinteticen las proteínas.

9
00:01:31,609 --> 00:01:38,090
Los agentes tóxicos pueden ser de dos tipos según su origen.

10
00:01:38,849 --> 00:01:43,010
Pueden ser de origen natural y de origen antropogénico.

11
00:01:43,010 --> 00:01:50,549
Los de origen natural son por ejemplo los vegetales como lo que acabamos de ver.

12
00:01:51,989 --> 00:02:01,010
De origen animal puede ser por ejemplo la tetrodoxina del pez globo y también pueden ser microorganismos.

13
00:02:02,849 --> 00:02:12,129
Pueden ser bacterias, por ejemplo la toxina botulínica, pueden ser hongos filamentosos también que son los que producen micotoxinas.

14
00:02:13,009 --> 00:02:26,770
Estos serían los agentes tóxicos naturales. Y después tenemos los agentes tóxicos antropogénicos. Antropogénicos quiere decir que provienen de la acción del hombre.

15
00:02:28,229 --> 00:02:38,770
Y estos agentes tóxicos antropogénicos son contaminantes ambientales que tienen origen en la industria o también puede ser de origen agrícola.

16
00:02:38,770 --> 00:02:50,770
Entonces, pues tenemos, por ejemplo, los PCBs, que son los policlorobiferilos. Casi todos los compuestos que contienen cloro son de este tipo, agentes tóxicos.

17
00:02:50,770 --> 00:03:01,030
tóxicos. Y también tenemos los plaguicidas, los plaguicidas organoclorados, un ejemplo

18
00:03:01,030 --> 00:03:14,449
es este de aquí, que es este hexano que tiene 6 cloros, y este es el lindano. En este hay

19
00:03:14,449 --> 00:03:25,490
un caso, hubo un caso en Salén de Gallego, en Huesca, en un pueblecito de Huesca, donde

20
00:03:25,490 --> 00:03:32,710
había una industria en la que se sintetizaba este compuesto, el lindano, la industria cerró,

21
00:03:33,389 --> 00:03:42,870
pero claro, los suelos siguieron estando contaminados y este producto se fue pasando hacia las aguas

22
00:03:42,870 --> 00:03:54,930
hasta llegar a las aguas potables, lo que produjo efectos adversos a los ciudadanos de allí, que salen de Gallegos.

23
00:03:57,520 --> 00:04:05,939
Esto sería la división de los agentes tóxicos en función de su origen, naturales y antropogénicos.

24
00:04:05,939 --> 00:04:20,220
Ahora, un agente tóxico, no se puede decir que una sustancia tóxica sea tóxica de manera absoluta

25
00:04:20,220 --> 00:04:25,319
Sino que el efecto adverso va a depender de la concentración

26
00:04:25,319 --> 00:04:32,800
Puede ser que el agente tóxico esté a bajas concentraciones y entonces el efecto sea positivo

27
00:04:32,800 --> 00:04:38,920
o que esté a una alta concentración y el efecto va a ser negativo.

28
00:04:39,920 --> 00:04:44,079
Dependiendo del agente tóxico, pues tendrá una concentración u otra

29
00:04:44,079 --> 00:04:50,160
en la que va a tener efectos adversos o no.

30
00:04:52,560 --> 00:04:59,639
Entonces, bueno, la variación del efecto sobre, o sea, de la dosis sobre el efecto,

31
00:04:59,639 --> 00:05:07,399
pues es una variación sigmoidea de este tipo, entonces a bajas dosis el efecto es mínimo

32
00:05:07,399 --> 00:05:15,240
y el efecto va aumentando hasta que llega a una dosis determinada en que el efecto ya es máximo.

33
00:05:23,040 --> 00:05:25,879
Bueno, pues esos serían los agentes tóxicos.

34
00:05:26,959 --> 00:05:29,699
Y ahora tenemos los agentes mutagénicos.

35
00:05:29,699 --> 00:05:39,879
Los agentes mutagénicos son los que ejercen su toxicidad sobre el ADN y lo que hacen es cambiar la estructura del ADN.

36
00:05:40,379 --> 00:05:59,259
Lo característico de estos agentes es que no hay un umbral de concentración en el que digamos pues este tiene efectos adversos como al igual que en los agentes tóxicos, sino que aquí la respuesta es positiva o negativa, o sea es mutagénico o no es mutagénico.

37
00:06:01,139 --> 00:06:08,759
Y un ejemplo de agente mutagénico, ahí tenéis en el recuadro que pone para saber más,

38
00:06:09,439 --> 00:06:17,220
ahí tenéis un vídeo que os explica la alteración de la estructura del ADN debido a la radiación ultravioleta.

39
00:06:18,040 --> 00:06:25,459
Y bueno, así un poco resumido, lo que hace la luz ultravioleta es que cuando tenemos,

40
00:06:25,459 --> 00:06:38,860
esto sería la cadena de ADN y tenemos dos timinas, pues la luz ultravioleta lo que hace es generar enlaces covalentes entre dos timinas que estén consecutivas.

41
00:06:39,680 --> 00:06:44,439
¿Veis? Aquí tenemos dos timinas, pues genera enlaces covalentes entre estas dos timinas.

42
00:06:45,480 --> 00:06:54,379
Este efecto se puede corregir, hay unas enzimas que corrigen este efecto, pero esto es lo que produce la luz ultravioleta.

43
00:07:04,829 --> 00:07:22,110
En cuanto a tipos de compuestos mutagénicos, tenemos en función de su tamaño, pueden provocar mutaciones génicas o puntuales o mutaciones cromosómicas.

44
00:07:23,329 --> 00:07:27,370
Las que vamos a ver son las mutaciones génicas o puntuales.

45
00:07:27,370 --> 00:07:34,730
Vamos a centrarnos en estas. Mutaciones cromosómicas son mutaciones que ocurren en los cromosomas.

46
00:07:34,829 --> 00:07:40,410
Vamos a ver las génicas o puntuales.

47
00:07:42,089 --> 00:07:48,410
Estas mutaciones, hemos dicho que los agentes mutagénicos afectan a la estructura del ADN.

48
00:07:49,410 --> 00:08:01,670
Bueno, estas mutaciones son de pequeño tamaño, solo modifican a unos pocos pares de bases, son reversibles y pueden ocasionar cambios en los aminoácidos.

49
00:08:01,670 --> 00:08:20,470
Si os acordáis cuando estudiamos el dogma central de la biología molecular, veíamos que el ADN se replica, luego el ADN se transcribe a ARN mensajero y de ARN mensajero se traduce a proteínas.

50
00:08:20,470 --> 00:08:28,509
Y veíamos que cada tres nucleótidos, o sea, cada triplete, da lugar a un aminoácido.

51
00:08:29,310 --> 00:08:40,090
Bueno, pues vamos a ver cómo si cambiamos uno de los nucleótidos puede dar lugar a un cambio en aminoácidos y eso puede dar lugar a un cambio de proteína.

52
00:08:41,970 --> 00:08:46,230
Entonces, ¿qué posibilidades tenemos de cambio?

53
00:08:46,230 --> 00:08:58,450
Pues puede ser. Aquí tenemos una cadena normal de ADN, citosina, adenina, timina, citosina, adenina, timina, citosina, adenina, timina.

54
00:08:58,649 --> 00:09:00,149
Esta sería la cadena de ADN.

55
00:09:01,129 --> 00:09:06,409
¿Qué puede ocurrir? Puede ocurrir que una de las bases cambie.

56
00:09:07,169 --> 00:09:11,529
Es decir, aquí tenemos adenina, pues se ha convertido en citosina.

57
00:09:12,149 --> 00:09:13,710
Aquí ya se ha producido un cambio.

58
00:09:13,710 --> 00:09:21,730
Otra de las cosas que puede ocurrir es que haya una adición, que se adicione un nucleótido

59
00:09:21,730 --> 00:09:27,809
Aquí tenemos citosina, adenina, timina, citosina, adenina, igual que aquí

60
00:09:27,809 --> 00:09:36,730
Pero aquí ahora se han añadido dos guaninas, por lo que esto va a producir un cambio en los aminoácidos

61
00:09:36,730 --> 00:09:43,649
Y luego ya continúa, timina, citosina, adenina, timina, ya igual, pero aquí se han añadido

62
00:09:43,649 --> 00:09:55,250
dos guaninas. Y otra cosa que puede ocurrir es la supresión, que se suprima uno o más bases

63
00:09:55,250 --> 00:10:04,250
nitrogenadas. Por ejemplo, aquí se ha suprimido la adenina y la timina. Si os fijáis, aquí hay

64
00:10:04,250 --> 00:10:10,470
una citosina, que es esta de aquí, se ha suprimido estas dos, la adenina y la timina, y vuelve a haber

65
00:10:10,470 --> 00:10:20,919
otra vez una citosina, adenina y timina. Vamos a ver cómo pueden afectar estos cambios

66
00:10:20,919 --> 00:10:35,159
a la síntesis de proteínas. Bueno, aquí os he puesto el código genético. Si os acordáis,

67
00:10:35,159 --> 00:10:43,440
el código genético estaba degenerado y eso significaba que varios tripletes pueden dar

68
00:10:43,440 --> 00:10:52,259
lugar al mismo aminoácido. Por ejemplo, aquí si tenemos citosina, uracilo, uracilo, citosina,

69
00:10:52,320 --> 00:10:58,799
uracilo, citosina, da lugar a la leucina. O si tenemos citosina, uracilo, adenina, también

70
00:10:58,799 --> 00:11:00,919
y da lugar a la leucina.

71
00:11:02,860 --> 00:11:07,360
Ahora pues entonces, imaginaros que tenemos esta cadena de ADN,

72
00:11:08,059 --> 00:11:12,519
esta cadena de ADN en la que tenemos adenina, guanina, timina.

73
00:11:13,259 --> 00:11:16,240
Este triplete da lugar a la serina.

74
00:11:16,240 --> 00:11:23,240
Lo buscamos aquí, adenina, guanina, timina.

75
00:11:23,240 --> 00:11:31,779
Bueno, aquí nos faltaría

76
00:11:31,779 --> 00:11:32,720
¿Adenina o anina?

77
00:11:32,960 --> 00:11:34,159
Ah, bueno, claro, porque sería

78
00:11:34,159 --> 00:11:36,340
Adenina o anina sería uracil

79
00:11:36,340 --> 00:11:42,419
Vale, sí, porque esta es

80
00:11:42,419 --> 00:11:45,539
La cadena de ADN

81
00:11:45,539 --> 00:11:47,960
La que va de 3' a 5'

82
00:11:48,279 --> 00:11:49,759
Pero la de 5' a 3'

83
00:11:50,100 --> 00:11:52,000
Sería uracilo

84
00:11:52,000 --> 00:11:53,000
Citosina

85
00:11:53,000 --> 00:11:54,620
Adenina

86
00:11:54,620 --> 00:12:05,480
Vamos a ver, uracilo, citosina adenina y da lugar a la serina.

87
00:12:06,720 --> 00:12:09,639
Tenemos que buscar la cadena, la complementaria.

88
00:12:10,100 --> 00:12:14,279
Este es el ADN, la cadena de ADN original que va de 3' a 5',

89
00:12:14,279 --> 00:12:21,960
nosotros la que tenemos que buscar es la del ARN mensajero que va de 5' a 3' y que se da la complementaria a esta.

90
00:12:21,960 --> 00:12:39,980
La siguiente tenemos citosina, guanina, guanina, o sea que la complementaria será guanina, citosina, citosina, guanina, guanina, citosina, citosina, que da lugar al aminoácido alanina, y así sucesivamente.

91
00:12:39,980 --> 00:12:50,500
Este sería adenina, timina, guanina, o sea que sería la complementaria, sería uracilo, adenina, citosina, la UAC.

92
00:12:51,500 --> 00:13:00,539
UAC, UAC, UAC, tenemos aquí tirosina, esta es la tirosina y la siguiente pues sería la valina.

93
00:13:00,539 --> 00:13:16,639
Ahora, si cambiamos uno de los aminoácidos, cambiamos esta citosina y ponemos aquí, o sea, se ha producido una mutación y esta citosina se ha convertido en timina y esta adenina se ha convertido en guanina.

94
00:13:16,639 --> 00:13:26,419
¿Qué va a ocurrir? Pues bueno, los primeros tres nucleótidos, el primer triplete va a seguir igual, va a dar serina

95
00:13:26,419 --> 00:13:31,539
Pero ahora, el siguiente triplete, ¿qué pasa? Que tenemos timina, guanina, guanina

96
00:13:31,539 --> 00:13:37,299
Que el complementario sería adenina, citosina, citosina, o sea, ACC

97
00:13:37,299 --> 00:13:43,519
Vamos a buscar el ACC, ACC da lugar a treonina

98
00:13:43,519 --> 00:14:00,360
Por lo tanto, ya nos está cambiando este aminoácido, que antes era alanina. El siguiente triplete va a ser igual. Es ATG, pues va a dar lugar a la tirosina.

99
00:14:00,360 --> 00:14:20,840
Pero ahora, en el siguiente triplete ha habido otro cambio de un nucleótido. Tenemos citosina, guanina, timina. Pues el complementario será GCA. GCA da lugar a la alanina.

100
00:14:20,840 --> 00:14:29,919
Por lo tanto, esta proteína va a cambiar porque ahora vamos a tener serina, trionina, tirosina y alanina.

101
00:14:31,340 --> 00:14:44,779
Ahora, si estos cambios, como el código genético está degenerado, estos cambios podría ser que dieran lugar al mismo aminoácido, que dieran lugar a la alanina.

102
00:14:44,779 --> 00:15:12,080
Sí, imaginaros que se nos formara GCC, guanina, citosina, guanina, o sea que el original imaginaros que fuera guanina, citosina, uracilo y el que se nos genera, o sea hay un cambio, una mutación y se nos genera GCC, guanina, citosina, citosina, pues los dos darían lugar a la anina, por lo tanto no habría cambio en la proteína.

103
00:15:12,080 --> 00:15:30,960
Aquí tendríamos también alanina. Esa es una posibilidad. Y luego, aquí en el archivo también tenéis este otro ejemplo. Dice, si tenemos el siguiente fragmento de ADN que tiene una eliminación de la base indicada.

104
00:15:30,960 --> 00:15:34,700
Aquí no está pintado

105
00:15:34,700 --> 00:15:38,019
La que se divina es

106
00:15:38,019 --> 00:15:39,500
Tenemos

107
00:15:39,500 --> 00:15:40,740
EGA

108
00:15:40,740 --> 00:15:42,200
CGG

109
00:15:42,200 --> 00:15:45,139
Y luego es esta C

110
00:15:45,139 --> 00:15:49,460
Esta C es la que se ha

111
00:15:49,460 --> 00:15:50,820
Se ha eliminado

112
00:15:50,820 --> 00:15:53,740
Ha habido una mutación y se ha eliminado esta citosina

113
00:15:53,740 --> 00:15:55,379
Pues entonces

114
00:15:55,379 --> 00:15:56,720
Vamos a buscar lo mismo

115
00:15:56,720 --> 00:15:58,759
Vamos a buscar el complementario

116
00:15:58,759 --> 00:16:19,840
de la cadena complementaria, esta sería ARN, por lo tanto acordaros que tenemos que tener uracilo y pues sería, aquí tenemos TGA, pues el complementario sería ACU, el siguiente GCC, entonces así vamos buscando en el código genético,

117
00:16:19,840 --> 00:16:26,759
Vamos buscando cada triplete, vamos buscando qué aminoácido se obtiene.

118
00:16:27,539 --> 00:16:30,620
Entonces aquí tenemos licina, tirosina, lisina y valina.

119
00:16:31,740 --> 00:16:39,419
Ahora, si se produce una supresión de esta citosina, pues ya los aminoácidos siguientes van a cambiar.

120
00:16:40,320 --> 00:16:47,960
Ya aquí sí que tenemos el ACU, el primer triplete, el siguiente GCC, igual que en el anterior,

121
00:16:47,960 --> 00:17:04,839
Pero ahora ya el siguiente va a ser, como tenemos, este se ha eliminado la citosina, pues el siguiente va a ser GUU, o sea que ya nos ha cambiado y se nos ha formado otro aminoácido que es la valina.

122
00:17:04,839 --> 00:17:15,519
El siguiente, ya vamos a tener este triplete T-G-T, que el complementario es A-C-A, por lo tanto es treonina.

123
00:17:15,519 --> 00:17:33,859
Y el siguiente que teníamos, C-A-A, C-A-A es este, luego T-G-T es este, T-G-T-A-C-A.

124
00:17:33,859 --> 00:17:55,059
Y luego ya tendríamos TTC, o sea que sería adenina, adenina, guanina, que nos va a dar lugar a la lisina. Por lo tanto, esta mutación sí que va a dar lugar a una proteína diferente, porque se cambian los aminoácidos.

125
00:17:55,059 --> 00:18:23,130
Y una forma de analizar la capacidad mutagénica que tienen diferentes sustancias es mediante el test de AMES y este test lo desarrolló Bruce Ames y le dieron el premio Nobel por ello.

126
00:18:25,410 --> 00:18:30,170
Vamos a ver en qué consiste este test.

127
00:18:31,710 --> 00:18:42,990
Bueno, lo que se utiliza en este test son cepas de salmonella, salmonella tifimurium, son cepas de salmonella que están mutadas,

128
00:18:42,990 --> 00:18:52,970
están mutados su ADN, de tal forma que esta salmonella no puede sintetizar el aminoácido histidina.

129
00:18:52,970 --> 00:19:03,049
es una salmonella que tiene modificado su ADN y por lo tanto no puede sintetizar el aminoácido histirina

130
00:19:03,049 --> 00:19:10,809
por lo que si queremos que produzcan histirina tenemos que poner a estas cepas con histirina en el medio

131
00:19:10,809 --> 00:19:13,509
para que se puedan replicar y crecer

132
00:19:13,509 --> 00:19:36,750
Pero, si a estas cepas de salmonella les añadimos un compuesto que sea mutagénico, pues este compuesto mutagénico lo que puede hacer es que revierte al ADN que sí que puede, que tiene capacidad de sintetizar histidina.

133
00:19:36,750 --> 00:19:47,049
Entonces tenemos salmonella que tiene su ADN mutado, o sea que no puede producir histidina

134
00:19:47,049 --> 00:19:52,089
Y ahora si le añadimos un compuesto que es mutagénico

135
00:19:52,089 --> 00:19:58,710
Este compuesto mutagénico puede hacer que esta salmonella que revierta su mutación

136
00:19:58,710 --> 00:20:04,650
Y que sí que pueda sintetizar histidina, el aminoácido histidina

137
00:20:04,650 --> 00:20:24,019
Y así es como se ensaya si un compuesto tiene capacidad mutagénica. Entonces tenemos la salmonella que está modificada y este sería un ensayo de control.

138
00:20:24,019 --> 00:20:33,019
Y aquí tenemos también la salmonella modificada, o sea, el ADN que está mutado, que no puede sintetizar histidina.

139
00:20:34,559 --> 00:20:43,099
Ahora, a la de arriba le añadimos un mutágeno del que queremos probar si tiene capacidad mutagénica o no.

140
00:20:43,099 --> 00:20:52,500
y ponemos la salmonella, en este caso con el mutágeno, en una placa Petri

141
00:20:52,500 --> 00:20:57,000
y este sería el ensayo de control, el que no tiene mutágeno.

142
00:20:58,099 --> 00:21:00,220
Y lo ponemos en un medio que tiene histidina.

143
00:21:01,119 --> 00:21:02,660
Entonces, ¿qué pasa?

144
00:21:02,660 --> 00:21:15,160
que la salmonella va a crecer, pero una vez que se termine la histidina va a dejar de crecer,

145
00:21:17,180 --> 00:21:24,579
va a dejar de crecer a no ser que en este de aquí arriba que tiene el compuesto mutágeno

146
00:21:24,579 --> 00:21:31,740
y ese mutágeno ha revertido la mutación de la salmonella

147
00:21:31,740 --> 00:21:37,039
y entonces sí que puede, o sea, consigue que la salmonella crezca.

148
00:21:38,359 --> 00:21:43,099
Y en cambio aquí, aquí solamente tenemos la salmonella modificada.

149
00:21:44,359 --> 00:21:52,200
Como esa salmonella mutada, esa salmonella no puede sintetizar histidina, pues no puede crecer.

150
00:21:54,140 --> 00:21:56,799
Vale, os lo repito que es un poco complicado.

151
00:21:56,799 --> 00:22:04,799
En este de aquí arriba tenemos salmonella y tenemos mutágeno, el compuesto mutágeno.

152
00:22:06,539 --> 00:22:19,220
La salmonella que tenemos está mutada, tiene algún gen que hace que no pueda sintetizar histidina.

153
00:22:19,220 --> 00:22:24,720
Entonces, al añadir el mutágeno, el compuesto mutágeno

154
00:22:24,720 --> 00:22:34,240
Lo que ocurre es que el mutágeno hace que ese ADN, ese gen que hacía que no se pudiera producir histidina

155
00:22:34,240 --> 00:22:40,460
Cambia ese gen, revierte y consigue hacer crecer la salmonella

156
00:22:40,460 --> 00:22:45,940
Por lo tanto, este compuesto que hemos añadido aquí tiene capacidad mutagénica

157
00:22:45,940 --> 00:22:49,519
tiene capacidad de cambiar el ADN

158
00:22:49,519 --> 00:22:55,470
vale, pues este sería

159
00:22:55,470 --> 00:22:56,970
este tema, el tema 5

160
00:22:56,970 --> 00:22:59,690
no sé si tenéis alguna duda

161
00:22:59,690 --> 00:23:01,809
de este tema

162
00:23:01,809 --> 00:23:04,690
esto yo creo que es lo más complicado

163
00:23:04,690 --> 00:23:07,509
lo del test de AMOS

164
00:23:07,509 --> 00:23:13,349
vale, pues bueno

165
00:23:13,349 --> 00:23:15,490
ya habéis visto que este tema

166
00:23:15,490 --> 00:23:16,670
es cortito

167
00:23:16,670 --> 00:23:19,769
vamos ahora a

168
00:23:19,769 --> 00:23:24,230
vamos a ver ahora

169
00:23:24,230 --> 00:23:27,130
lo que os decía, el punto

170
00:23:27,130 --> 00:23:28,970
4

171
00:23:28,970 --> 00:23:30,950
del tema 2

172
00:23:30,950 --> 00:23:33,670
que se nos quedó

173
00:23:33,670 --> 00:23:34,410
por ver

174
00:23:34,410 --> 00:23:54,740
identificación de proteínas

175
00:23:54,740 --> 00:24:10,640
bueno pues

176
00:24:10,640 --> 00:24:12,079
vamos a ver este

177
00:24:12,079 --> 00:24:16,950
punto y así también

178
00:24:16,950 --> 00:24:18,670
hacemos un pequeño repaso

179
00:24:18,670 --> 00:24:20,069
de las proteínas

180
00:24:20,069 --> 00:24:22,849
si os acordáis las proteínas

181
00:24:22,849 --> 00:24:24,789
estaban formadas por aminoácidos

182
00:24:24,789 --> 00:24:26,730
y sus aminoácidos estaban unidos

183
00:24:26,730 --> 00:24:33,170
por enlaces peptídicos. Y teníamos varias estructuras primaria, secundaria, terciaria

184
00:24:33,170 --> 00:24:39,630
y algunas podían tener esta estructura cuaternaria. Vimos también cómo se podían extraer estas

185
00:24:39,630 --> 00:24:46,670
proteínas, las formas de extracción y vimos también cómo se podían cuantificar por

186
00:24:46,670 --> 00:24:52,849
el método de Lowry, Bradford, espectrofotométrico. Y luego vimos que estas proteínas también

187
00:24:52,849 --> 00:24:59,329
se podía fraccionar, si os acordáis diálisis, cromatografía, electroforesis. Pues hoy vamos

188
00:24:59,329 --> 00:25:09,230
a ver cómo se pueden identificar estas proteínas. Vale, entonces vamos a ver estos dos métodos,

189
00:25:09,309 --> 00:25:16,990
la técnica Malditoff y los ensayos inmunológicos. Vamos a empezar por la técnica Malditoff.

190
00:25:16,990 --> 00:25:35,130
Bueno, pues esta técnica se basa en la técnica de espectrometría de masas, que seguramente los que hayáis estudiado el módulo de análisis instrumental a lo mejor lo habéis estudiado ya.

191
00:25:35,130 --> 00:25:40,029
Esta técnica de espectrometría de masas, ¿en qué consiste?

192
00:25:40,170 --> 00:25:41,789
Así muy brevemente

193
00:25:41,789 --> 00:25:49,650
Lo que vamos a hacer es impactar a una molécula orgánica

194
00:25:49,650 --> 00:25:51,509
Que aquí la hemos representado como ABC

195
00:25:51,509 --> 00:25:55,410
La impactamos con un chorro de electrones

196
00:25:55,410 --> 00:26:00,809
Y lo que conseguimos es ionizar nuestra muestra, cargarla positivamente

197
00:26:00,809 --> 00:26:04,269
Y además esto se hace en fase gaseosa

198
00:26:04,269 --> 00:26:20,109
Entonces vamos a obtener iones a partir de moléculas orgánicas. Y además lo que se hace también es fragmentar esta molécula. La vamos a romper en partes, en trocitos y la vamos a fragmentar.

199
00:26:20,109 --> 00:26:33,049
Y ahora, los fragmentos que obtenemos, que serán iones, van a tener diferente masa y carga y se van a detectar estos iones.

200
00:26:34,410 --> 00:26:39,029
Entonces, aquí tenemos un espectro de masas.

201
00:26:39,950 --> 00:26:44,829
Aquí, por ejemplo, tendríamos esta molécula, que es el butano CH3, CH2, CH2, CH3.

202
00:26:44,829 --> 00:27:05,289
Lo que hacemos es impactar esta molécula con un chorro de electrones y además se fragmenta. Si os fijáis aquí tenemos un CH3 con carga positiva, aquí tenemos un CH3CH2 con carga positiva, aquí está toda la molécula con carga positiva.

203
00:27:05,289 --> 00:27:21,369
Entonces, obtenemos distintas fracciones, o sea, distintos iones con distinto tamaño, que luego se separan y lo que nos da es un espectro de masas de este tipo, con estas señales.

204
00:27:21,369 --> 00:27:28,349
Claro, esto lo podemos hacer para moléculas de este tipo, moléculas pequeñas

205
00:27:28,349 --> 00:27:34,450
Pero ahora, si queremos hacer esto mismo, pero analizar proteínas

206
00:27:34,450 --> 00:27:37,470
Proteínas ya sabemos que son macromoléculas

207
00:27:37,470 --> 00:27:42,150
Por lo tanto, imaginaros que aquí, si fragmentamos las proteínas

208
00:27:42,150 --> 00:27:47,230
Pues obtendríamos aquí un montón de señales que sería muy difícil identificar

209
00:27:47,230 --> 00:27:57,049
Pues para eso se elimina ese problema con esta técnica, la técnica MALDI-TOF.

210
00:27:58,369 --> 00:28:07,849
Estas siglas provienen del inglés y MALDI es de Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Mass Spectrometry.

211
00:28:07,849 --> 00:28:17,230
O sea, en español, espectrometría de masas de ionización, distorsión, láser asistida por matriz.

212
00:28:18,049 --> 00:28:21,150
Con esto es con lo que vamos a generar los iones.

213
00:28:21,930 --> 00:28:31,930
Y luego, ¿cómo analizamos los iones? Pues con el Time of Flight, T-O-F, con este sistema, con el TOF.

214
00:28:34,809 --> 00:28:38,410
Aquí os he puesto unos vídeos por si queréis echarles un vistazo.

215
00:28:39,930 --> 00:28:45,950
Vamos a ver entonces qué significa esto de ionización, desorción, láser, asistida por matriz.

216
00:28:48,940 --> 00:28:58,359
Lo que podemos conseguir con esta técnica es ionizar biomoléculas como péptidos y proteínas sin que se produzca la ruptura de los mismos.

217
00:28:59,180 --> 00:29:02,160
Además también se pueden ionizar moléculas no volátiles.

218
00:29:02,160 --> 00:29:13,799
Si os acordáis, hemos visto que en espectrometría de masas la técnica se hace en fase gas, pues con esta, con la malditoz, se pueden ionizar moléculas no volátiles.

219
00:29:15,000 --> 00:29:17,240
Vamos a ver cómo se logra esto.

220
00:29:19,240 --> 00:29:28,299
Lo que hacemos es poner, tenemos una placa, esta placa suele ser de poliestireno, y en esta placa tenemos muchos pocillos.

221
00:29:28,299 --> 00:29:31,759
Tenemos hasta 96 pocillos, suele ser 96.

222
00:29:32,160 --> 00:29:36,440
Aquí os he puesto como sería uno de estos pocillos.

223
00:29:37,819 --> 00:29:47,359
Bien, pues lo que vamos a hacer es, vamos a poner en uno de estos pocillos, vamos a poner una matriz, que aquí está representada en color violeta.

224
00:29:48,259 --> 00:29:57,319
Y vamos a mezclar esa matriz con nuestra proteína, con la muestra que nosotros queremos analizar, que sería esto de aquí en verde.

225
00:29:57,319 --> 00:30:01,019
la matriz es simplemente

226
00:30:01,019 --> 00:30:05,579
pensaba que lo tenía

227
00:30:05,579 --> 00:30:09,940
la matriz es simplemente un compuesto orgánico

228
00:30:09,940 --> 00:30:14,539
hay varios tipos de matrices

229
00:30:14,539 --> 00:30:18,180
pero es un compuesto orgánico

230
00:30:18,180 --> 00:30:22,960
y lo que se hace es añadir la matriz

231
00:30:22,960 --> 00:30:26,740
junto con nuestra muestra en estos pocillos

232
00:30:26,740 --> 00:30:33,420
y ahora lo que hacemos es hacer incidir en estos pocillos un rayo láser

233
00:30:33,420 --> 00:30:42,019
y con esto que vamos a conseguir que el sólido que tenemos en cada pocillo pase a fase gas,

234
00:30:42,019 --> 00:30:50,460
que esto sería la desorción, el sólido va a pasar a fase gas y obtendríamos esto de aquí.

235
00:30:50,460 --> 00:31:17,579
Y al mismo tiempo la matriz se va a cargar positivamente. Si veis aquí tenemos cargas positivas. Y ahora esta energía que adquiere la matriz la va a pasar a las moléculas de nuestra muestra, a estas verdes, y estas moléculas se van a ionizar, van a adquirir carga positiva.

236
00:31:17,579 --> 00:31:42,720
Lo veis aquí, cargas positivas. Y luego ya estos iones son los que vamos a analizar. Consiste en irradiar una muestra que está mezclada con una matriz. Al irradiar con un rayo láser, lo que ocurre es que la matriz y la muestra se desorben, o sea, se produce su desorción, pasan a fase gas.

237
00:31:42,720 --> 00:31:52,480
y la matriz se ioniza y a su vez esa energía que adquiere la transmite a nuestras moléculas en verde

238
00:31:52,480 --> 00:31:54,579
que también se van a ionizar.

239
00:31:55,400 --> 00:31:59,180
Y ahora lo que vamos a hacer es separar estos iones, estas cargas positivas

240
00:31:59,180 --> 00:32:03,680
y eso lo separamos con el analizador de tiempo de vuelo, el TOF.

241
00:32:05,200 --> 00:32:11,460
Y así brevemente lo que ocurre es que le vamos a aplicar a estas muestras,

242
00:32:11,460 --> 00:32:21,980
las que tenemos aquí de distinto tamaño, ionizadas, lo que hacemos es aplicarles un campo eléctrico

243
00:32:21,980 --> 00:32:27,420
y lo que hacen es, se van a ir moviendo hasta llegar al detector.

244
00:32:28,559 --> 00:32:34,299
Las de menor masa molecular se van a mover más rápidamente y van a llegar antes al detector

245
00:32:34,299 --> 00:32:40,819
y las de mayor masa molecular van a tardar más en llegar al detector y así es como se detectan.

246
00:32:40,819 --> 00:32:46,039
Por eso se llama tiempo de vuelo, porque van moviéndose por aquí hasta llegar al detector.

247
00:32:48,000 --> 00:32:54,339
Simplemente que os suene, analizador de tiempo de vuelo, time of flight.

248
00:32:58,539 --> 00:33:24,980
Aquí tenemos este vídeo, vamos a verlo un poquito, solamente un poquito para que veáis cómo es la técnica.

249
00:33:30,299 --> 00:33:40,500
Aquí tenemos la placa con los 96 pocillos, ya la estamos aplicando el láser.

250
00:33:48,680 --> 00:33:53,140
Las moléculas se ionizan y se vaporizan, pasan a fase gas.

251
00:33:53,140 --> 00:34:04,119
Se aplica un voltaje y entonces las moléculas se mueven hasta llegar al detector.

252
00:34:23,139 --> 00:34:45,630
Vale, pues hasta aquí, porque este ya es otro tipo.

253
00:34:48,110 --> 00:34:57,610
Pues esto sería la técnica Malditoz.

254
00:34:58,869 --> 00:35:02,570
Y ahora vamos a ver los ensayos inmunológicos.

255
00:35:02,570 --> 00:35:08,010
Vamos a ver cómo podemos detectar proteínas mediante estos ensayos inmunológicos.

256
00:35:08,889 --> 00:35:13,190
Entonces, antes de nada, vamos a hablar un poquito de, bueno, tenemos estas técnicas.

257
00:35:14,170 --> 00:35:21,730
La técnica ELISA y luego tenemos otros ensayos como el Western Blot, la hema glutinación y la glutinación en látex.

258
00:35:23,929 --> 00:35:26,650
Vamos a ver un poco lo que es el sistema inmunitario.

259
00:35:26,650 --> 00:35:40,570
Entonces, bueno, el sistema inmunitario proviene del vocablo romano que significa estar libre y es la capacidad que tenemos los seres vivos de no sufrir continuamente enfermedades.

260
00:35:40,570 --> 00:36:09,440
Es decir, que cuando enfermamos por algún virus, pues nuestro cuerpo genera anticuerpos que se llaman y esos anticuerpos lo que van a hacer es que si nos volvemos a contagiar otra vez con el mismo virus, esos anticuerpos son como un sistema de defensa que ya identifican ese virus y lo eliminan.

261
00:36:09,440 --> 00:36:16,019
Entonces, el sistema inmunitario lo que hace es eso, proteger al organismo de una serie de agentes infecciosos

262
00:36:16,019 --> 00:36:23,619
que pueden ser bacterias, hongos, parásitos o virus y que ocasionan diferentes enfermedades.

263
00:36:24,599 --> 00:36:30,619
Entonces, el organismo reconoce a estos componentes y inicia una serie de respuestas.

264
00:36:30,820 --> 00:36:34,159
Esta serie de respuestas son lo que llamamos los anticuerpos.

265
00:36:34,159 --> 00:36:51,219
Entonces, el sistema inmunitario, bueno, esto es un poco repetición, es un sistema de defensa y lo que está formado por la serie de mecanismos que protegen al organismo frente a agentes patógenos.

266
00:36:51,219 --> 00:37:04,219
A estos agentes patógenos los denominamos antígenos. Entonces, tenemos el agente patógeno, que es el antígeno, que es el que nos infecta, que puede ser una bacteria, un virus.

267
00:37:04,219 --> 00:37:22,219
Y luego tenemos el anticuerpo, que es el sistema de defensa, que son los compuestos que nuestro cuerpo genera para defenderse de estos antígenos. Antígeno y anticuerpo.

268
00:37:22,219 --> 00:37:36,260
Los antígenos se pueden, bueno, vamos a abrirlo aquí. Aquí os he puesto unos vídeos de este investigador, Alfredo Corel, que están muy bien. Por si tenéis tiempo y les echáis un vistazo.

269
00:37:36,260 --> 00:37:50,059
Entonces, antígeno lo representamos como AG y es aquel, cualquier sustancia que va a provocar una respuesta inmunitaria, es decir, que va a estimular la producción de anticuerpos.

270
00:37:50,840 --> 00:37:58,559
Son moléculas complejas y son normalmente proteínas o polisacáridas. Estos son los antígenos.

271
00:37:58,559 --> 00:38:20,980
Y luego los anticuerpos se llaman también inmunoglobulinas y son glucoproteínas. Si os acordáis cuando vimos las proteínas teníamos homoproteínas y teníamos heteroproteínas. Pues este es un caso de heteroproteínas. Son proteínas que están compuestas de proteína y de hidratos de carbono.

272
00:38:20,980 --> 00:38:29,280
Ahora, estos anticuerpos lo que hacen es, lo que ya os he dicho, identificar y neutralizar elementos extraños

273
00:38:29,280 --> 00:38:36,280
tales como bacterias, virus o parásitos y el anticuerpo lo que va a hacer es unirse al antígeno

274
00:38:36,920 --> 00:38:41,280
Ahora, esta unión antígeno-anticuerpo es específica

275
00:38:42,360 --> 00:38:45,659
Mirad, aquí en esta gráfica se ve muy bien

276
00:38:45,659 --> 00:38:48,780
Este sería un anticuerpo

277
00:38:48,780 --> 00:38:56,039
Los anticuerpos hemos dicho que son proteínas y los antígenos hemos dicho que pueden ser proteínas o polisacáridos.

278
00:38:57,079 --> 00:39:01,099
Estos son anticuerpos. Los anticuerpos están formados por cuatro cadenas.

279
00:39:01,440 --> 00:39:07,800
Dos cadenas largas de aminoácidos y dos cadenas más cortas de aminoácidos.

280
00:39:09,000 --> 00:39:14,679
Pues cada anticuerpo tiene aquí un fragmento que se llama epítopo

281
00:39:14,679 --> 00:39:36,920
Y que hace que la reacción antígeno-anticuerpo sea específica. Es decir, que hay un anticuerpo para cada antígeno. Si nos infectamos con el virus, la viruela, por ejemplo, hay un anticuerpo específico para ese virus.

282
00:39:36,920 --> 00:39:44,239
Si os fijáis aquí tenemos varios antígenos de distintos colores y con distintas formas

283
00:39:44,239 --> 00:39:53,639
Y solamente este es el que encaja aquí, el que reacciona, o sea, se uniría a este anticuerpo

284
00:39:53,639 --> 00:40:01,079
Por eso la reacción es específica

285
00:40:01,079 --> 00:40:07,320
Entonces, las técnicas inmunológicas se basan en esta especificidad de inmunidad antígeno-anticuerpo

286
00:40:07,320 --> 00:40:15,840
porque cuando el antígeno se une al anticuerpo se producen fenómenos que pueden ser una precipitación, una aglutinación,

287
00:40:16,659 --> 00:40:26,320
que son visualizables, que se pueden observar si el antígeno es específico de ese anticuerpo.

288
00:40:30,099 --> 00:40:33,199
Bien, pues vamos a ver esta técnica, la técnica ELISA.

289
00:40:33,199 --> 00:40:48,139
Esta técnica ELISA, ELISA viene del acrónimo también del inglés Enzyme Link Immunosorbent Assay. Es el ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas.

290
00:40:48,139 --> 00:40:51,320
pasáis ensayo

291
00:40:51,320 --> 00:40:52,960
en una absorción

292
00:40:52,960 --> 00:40:54,619
ligado a enzimas

293
00:40:54,619 --> 00:40:59,139
bueno, vamos a ver que

294
00:40:59,139 --> 00:41:01,880
significa, en que consiste

295
00:41:01,880 --> 00:41:03,000
esta técnica

296
00:41:03,000 --> 00:41:05,840
el equipo que se utiliza

297
00:41:05,840 --> 00:41:08,300
para esta técnica es un espectrofotómetro

298
00:41:08,300 --> 00:41:10,599
es un espectrofotómetro

299
00:41:10,599 --> 00:41:12,119
y aquí también tenemos

300
00:41:12,119 --> 00:41:13,639
una placa

301
00:41:13,639 --> 00:41:15,960
parecida a la técnica

302
00:41:15,960 --> 00:41:18,079
maldito, que tiene una serie

303
00:41:18,079 --> 00:41:19,320
de pocillos

304
00:41:20,280 --> 00:41:26,420
Entonces, un espectrofotómetro lo que va a medir es, por ejemplo, en este caso vamos a medir cambio de color.

305
00:41:29,489 --> 00:41:33,849
Esta sería la placa y aquí vemos los pocillos con distintos colores.

306
00:41:34,269 --> 00:41:36,849
Pues eso es lo que nos va a medir el espectrofotómetro.

307
00:41:38,170 --> 00:41:41,769
Vamos a ver cómo se producen estos diferentes colores.

308
00:41:41,769 --> 00:41:51,789
Entonces, bueno, la técnica consiste en que vamos a reaccionar el antígeno con el anticuerpo.

309
00:41:53,090 --> 00:41:58,769
Imaginaros que aquí en rojo tenemos un antígeno, ¿vale? El antígeno es el agente patógeno.

310
00:42:00,309 --> 00:42:06,510
Y le añadimos un anticuerpo que tiene esta forma de aquí, ¿vale? Añadimos un anticuerpo.

311
00:42:06,510 --> 00:42:14,090
Si el antígeno reacciona con el anticuerpo, pues se quedará unido.

312
00:42:15,489 --> 00:42:27,469
Ahora, le añadimos otro anticuerpo, que sería este de aquí, pero este anticuerpo tiene unido una enzima, que es esta de aquí en amarillo, esta enzima.

313
00:42:28,449 --> 00:42:36,210
Entonces, ahora ya tenemos el antígeno, el rojo, un anticuerpo y otro anticuerpo que está unido a una enzima.

314
00:42:36,210 --> 00:42:54,090
Esto de aquí en amarillo. Y ahora le añadimos un sustrato, que sería esto de aquí en blanco. Y este sustrato al unirse a la enzima, es un sustrato que reacciona con esta enzima que tenemos aquí, pues al unirse con esta enzima produce un cambio de color.

315
00:42:54,090 --> 00:42:58,050
Y esto es lo que vamos a detectar, este cambio de color.

316
00:43:01,210 --> 00:43:06,349
Ahora no nos va a dar tiempo, pero si eso, veis este vídeo que he puesto aquí.

317
00:43:07,489 --> 00:43:19,269
Entonces tenemos el antígeno en rojo, le añadimos un anticuerpo, le añadimos otro anticuerpo con una enzima, que es esta de aquí, de color amarillo, y le añadimos un sustrato.

318
00:43:19,269 --> 00:43:22,829
y este sustrato va a reaccionar con la enzima

319
00:43:22,829 --> 00:43:27,050
y se va a producir un cambio de color en la disolución que tenemos

320
00:43:27,050 --> 00:43:28,630
y eso es lo que vamos a medir.

321
00:43:31,989 --> 00:43:34,170
Entonces tenemos varios tipos de técnica ELISA.

322
00:43:34,429 --> 00:43:37,829
Tenemos el ELISA directo, el ELISA indirecto y el ELISA sandwich.

323
00:43:40,150 --> 00:43:42,309
El ELISA directo, este es el más sencillo.

324
00:43:42,309 --> 00:43:47,309
En este simplemente ponemos en los pocillos el antígeno

325
00:43:47,309 --> 00:43:51,289
y le añadimos anticuerpos que están marcados,

326
00:43:51,289 --> 00:44:10,289
Es decir, que anticuerpos con una enzima. Ahora, si le añadimos después el sustrato y observamos si hay presencia o no de antígenos, si la solución cambia de color, es que el anticuerpo es el específico de ese antígeno.

327
00:44:10,289 --> 00:44:29,949
¿Vale? En este caso hay que añadir también controles negativos, es decir, muestras que sabemos que no tienen el antígeno buscado y también se ponen controles positivos, muestras que sí sabemos con seguridad que tienen el antígeno buscado.

328
00:44:29,949 --> 00:44:34,389
Entonces este es el ELISA directo, que este es el más sencillo

329
00:44:34,389 --> 00:44:38,269
Después tenemos el ELISA indirecto

330
00:44:38,269 --> 00:44:42,789
El ELISA indirecto es el que os he explicado antes

331
00:44:42,789 --> 00:44:45,869
Tendríamos aquí el antígeno

332
00:44:45,869 --> 00:44:51,550
Esto de aquí es lavar para eliminar los antígenos que no se hayan quedado pegados al pocillo

333
00:44:51,550 --> 00:44:56,869
Le añadimos un anticuerpo específico para ese antígeno

334
00:44:56,869 --> 00:45:00,690
Lavamos también para eliminar los anticuerpos que nos hayan quedado pegados.

335
00:45:01,369 --> 00:45:07,530
Le añadimos otro anticuerpo. Este anticuerpo tiene una enzima, que es esta de aquí.

336
00:45:08,190 --> 00:45:13,369
Y ahora le añadimos un sustrato, que es el que va a reaccionar con esa enzima.

337
00:45:14,409 --> 00:45:19,789
Y si os fijáis hay un cambio de color. La disolución de azul ha pasado a amarilla.

338
00:45:19,789 --> 00:45:22,090
pues esto es lo que vamos a detectar.

339
00:45:22,829 --> 00:45:27,429
La mayor cantidad de antígeno, pues más color se producirá aquí.

340
00:45:27,789 --> 00:45:30,849
Y eso es lo que medimos en el espectrofotómetro.

341
00:45:33,320 --> 00:45:35,900
Y el siguiente que tenemos es el ELISA sandwich.

342
00:45:36,199 --> 00:45:39,780
Es parecido, lo que pasa que aquí en vez de poner antígeno,

343
00:45:40,059 --> 00:45:42,380
en el pocillo primero ponemos un anticuerpo.

344
00:45:43,539 --> 00:45:47,300
Ponemos el anticuerpo, le añadimos el antígeno, o sea, el agente patógeno,

345
00:45:47,300 --> 00:45:51,159
que va a reaccionar con ese anticuerpo.

346
00:45:51,300 --> 00:46:10,760
¿Qué tenemos? Lavamos y añadimos otro segundo anticuerpo que este tiene la enzima, tiene unida una enzima y lo mismo aquí añadimos un sustrato, pues cuando reaccione ese sustrato con esa enzima se va a producir un cambio de color.

347
00:46:10,760 --> 00:46:30,400
Si fuera que hemos añadido, o sea, que esta reacción no se produce, que ese anticuerpo no es específico de este antígeno, pues cuando lleguemos aquí no se va a observar cambio de color, porque este antígeno no se va a quedar unido al anticuerpo.

348
00:46:30,400 --> 00:46:52,059
Vale, entonces no observaremos cambio de color. Pues este es el ELISA sandwich. Tenemos ELISA directo, ELISA indirecto. Estos dos, el directo y el indirecto, son los que primero ponemos el antígeno y el ELISA sandwich son los que primero ponemos el anticuerpo.

349
00:46:52,059 --> 00:47:20,280
Entonces, esta técnica lisa, ¿para qué nos sirve? Pues podemos diagnosticar una infección por un virus, por ejemplo, podemos detectar una hormona, podemos detectar la presencia de drogas, podemos diagnosticar una infección, pero analizando los anticuerpos que se han creado.

350
00:47:20,280 --> 00:47:30,679
Cuando nosotros nos infectamos, generan anticuerpos en nuestro organismo, pues podemos analizar esos anticuerpos.

351
00:47:31,519 --> 00:47:40,579
Nosotros, por ejemplo, podemos haber pasado una enfermedad, pero de forma leve y a lo mejor no nos hemos dado cuenta.

352
00:47:40,579 --> 00:47:49,019
y al cabo de los años nos hacen un análisis, nos miran los anticuerpos y observan que nos dicen

353
00:47:49,019 --> 00:47:56,400
bueno pues si tú has pasado la hepatitis A por ejemplo, porque tienes anticuerpos de haber pasado la hepatitis A

354
00:47:56,400 --> 00:48:04,599
entonces lo que podemos diagnosticar son anticuerpos o diagnosticar directamente los antígenos

355
00:48:04,599 --> 00:48:09,719
pues los antígenos del virus del HIV, el virus de cólera, etc.

356
00:48:13,230 --> 00:48:35,570
Vale, y hay otros ensayos inmunológicos. Este sería el Western Blot. Si os acordáis, en ADN también vimos el Southern Blot y el Northern Blot. Si os acordáis, el Northern era para ARN. Pues este es parecido, lo que pasa que este es para proteínas y se llama Western Blot.

357
00:48:35,570 --> 00:48:58,750
Y lo que se hace es separar las proteínas mediante electroforesis, aquí sería electroforesis en gel de poliacrilamida, este sería el gel de poliacrilamida, ya hecha la electroforesis y lo que hacemos es pasar este ADN a una membrana de nitrocelulosa.

358
00:48:58,750 --> 00:49:19,989
Y ahora, con esta membrana de nitrocelulosa lo que hacemos es incubar este ADN que tenemos aquí con un anticuerpo y así podemos detectar si hay una reacción específica entre este antígeno que teníamos y el anticuerpo que hemos añadido.

359
00:49:21,449 --> 00:49:25,789
Esta sería otra forma de hacer el análisis inmunológico.

360
00:49:25,789 --> 00:49:56,260
Vale, pues esto sería este apartado del apartado 4 del tema 2, ¿vale? Vamos a ver ahora, bueno, no sé, ¿tenéis alguna duda de todo esto que os he contado? No.