1 00:00:02,740 --> 00:00:24,899 Vamos a comenzar con la última parte, las operaciones difusionales. En este apartado vamos a hablar de absorción, absorción y cromatografía. Vamos a empezar con la absorción, con B. Consiste en poner un gas en contacto, hay distintos tipos, pero básicamente vamos a hablar de la absorción de un gas en el seno de un líquido. 2 00:00:24,899 --> 00:00:52,960 ¿Vale? Entonces en este caso el absorbente es lo que llamamos el líquido, el que retiene el compuesto de interés y el absorbato será el gas. ¿Vale? Se hace pasar, básicamente lo que se hace pasar es una corriente gaseosa por el seno a través de un líquido y en función de ese líquido, pues uno o dos o el analito que sea, quedará retenido en ese líquido. ¿Vale? Quedará absorbido en ese líquido. 3 00:00:52,960 --> 00:00:57,640 en función de, y de esta forma lo puedo eliminar del gas, ¿vale? 4 00:00:58,020 --> 00:01:03,619 Entonces, en función del tipo de interacción que se produzca entre el absorbente y el absorbato, 5 00:01:03,759 --> 00:01:05,859 pues hablaremos de absorción física o química. 6 00:01:06,040 --> 00:01:07,799 Si se produce reacción química será química 7 00:01:07,799 --> 00:01:12,019 y si no se produce ningún tipo de reacción química, pues no será física, ¿vale? 8 00:01:12,019 --> 00:01:18,379 Y bueno, comentar también que la operación contraria es lo que llamamos desorción, ¿vale? 9 00:01:18,379 --> 00:01:34,040 Este proceso de absorción de un gas en el seno de un líquido viene regido por la ecuación de Henry, ¿vale? En los apuntes viene expresado de esta forma, presión parcial del gas es igual a la constante de Henry por la fracción molar del gas en el líquido. 10 00:01:34,040 --> 00:01:59,159 Hay otra forma de expresar la ley de Henry, ¿vale? Que yo creo que es la más habitual, pero bueno, como en los apuntes viene esta, pues esta es la que vemos, ¿vale? Entonces, como os he dicho, es presión parcial del gas, que bueno, se puede expresar en atmósferas con milímetros de mercurio, ¿vale? En función de las unidades en las que usemos la presión parcial del gas, así serán las unidades de la constante de Henry, ¿vale? 11 00:01:59,159 --> 00:02:12,740 Y la presión parcial de gas es igual a la constante de Henry, viene determinada el gas y el líquido, el analito que yo vaya a absorber, y la fracción molar del gas, ¿vale? 12 00:02:12,740 --> 00:02:22,879 Que ya sabemos que la fracción molar es moles de gas dividido entre moles totales, ese mole total incluye moles de gas más moles de disolvente, ¿vale? 13 00:02:22,879 --> 00:02:29,879 Como en este caso la fracción molar son moles entre moles, es adimensional, 14 00:02:29,879 --> 00:02:34,780 el constante de Ferry que tiene las mismas unidades que la presión parcial del gas, 15 00:02:34,939 --> 00:02:38,800 que pueden ser atmósferas o milímetros de mercurio en la que queramos expresarlo, ¿vale? 16 00:02:39,599 --> 00:02:45,819 Ya os digo que hay otra forma de expresar esta ecuación, pero que es concentración del gas en el líquido 17 00:02:45,819 --> 00:02:48,039 es igual a la constante de Ferry por la presión parcial del gas, 18 00:02:48,280 --> 00:02:52,240 pero como la que viene aquí en el tema es esta, pues esta es la que vemos, ¿vale? 19 00:02:55,340 --> 00:03:04,780 Hay un ejercicio en el tema que nos pide calcular en miligramos litro la solubilidad del agua del oxígeno, bueno, en una condición de una atmósfera y 25 grados centígrados, ¿vale? 20 00:03:06,060 --> 00:03:13,259 Básicamente se trata de despejar y sustituir los datos en la ecuación, ¿vale? 21 00:03:13,259 --> 00:03:18,659 La mayor dificultad que tiene es darse cuenta que como los gases tienen poca solubilidad en los líquidos, ¿vale? 22 00:03:18,659 --> 00:03:21,939 darnos cuenta de que 23 00:03:21,939 --> 00:03:24,099 cuando calculamos la fracción molar 24 00:03:24,099 --> 00:03:26,000 del oxígeno, del gas, que es moles 25 00:03:26,000 --> 00:03:28,020 de soluto, moles de oxígeno, partido 26 00:03:28,020 --> 00:03:29,580 entre moles de oxígeno más moles de agua 27 00:03:29,580 --> 00:03:32,319 lo que se hace es una aproximación 28 00:03:32,319 --> 00:03:34,199 en que la suma 29 00:03:34,199 --> 00:03:35,860 de los moles de oxígeno más los moles de agua 30 00:03:35,860 --> 00:03:38,139 es prácticamente igual a los 31 00:03:38,139 --> 00:03:40,159 moles de agua únicamente, ¿vale? porque asumimos 32 00:03:40,159 --> 00:03:41,280 que la disolución del 33 00:03:41,280 --> 00:03:43,939 del oxígeno en el agua es 34 00:03:43,939 --> 00:03:46,000 muy pequeña, ¿vale? 35 00:03:51,280 --> 00:03:52,379 entonces eso es lo 36 00:03:52,379 --> 00:03:54,460 mayor dificultad, ¿vale? Una cosa 37 00:03:54,460 --> 00:03:56,419 que está mal en el ejercicio, para que nos demos cuenta 38 00:03:56,419 --> 00:03:58,219 y no nos rayemos, es que aquí 39 00:03:58,219 --> 00:03:59,979 cuando calculan los moles de agua 40 00:03:59,979 --> 00:04:02,259 aquí calculan los moles de agua 41 00:04:02,259 --> 00:04:04,259 ¿vale? Porque tiene un litro de agua, mil centímetros 42 00:04:04,259 --> 00:04:06,659 cúbicos, lo divido entre un litro, aplico el factor de la densidad 43 00:04:06,659 --> 00:04:08,319 y el peso molecular 44 00:04:08,319 --> 00:04:10,060 del agua, pero aquí pone 53 45 00:04:10,060 --> 00:04:12,060 55,39 moles de oxígeno 46 00:04:12,060 --> 00:04:14,319 estos son moles de agua, ¿vale? 47 00:04:15,240 --> 00:04:16,500 Esto está mal expresado 48 00:04:16,500 --> 00:04:18,000 aquí, y luego ya simplemente 49 00:04:18,000 --> 00:04:20,279 sustituir, ¿vale? Si nos damos cuenta 50 00:04:20,279 --> 00:04:23,579 cuando ya resolvemos el ejercicio y nos salen los moles de oxígeno 51 00:04:23,579 --> 00:04:25,980 vemos que es 1,26 por 10 a la menos 3 52 00:04:25,980 --> 00:04:29,300 es un número muy pequeño comparado con los 55,39 53 00:04:29,300 --> 00:04:31,360 por eso esta aproximación que hace aquí 54 00:04:31,360 --> 00:04:33,300 vemos que es correcta 55 00:04:33,300 --> 00:04:38,620 lo miráis y si tenéis alguna duda me preguntáis el próximo día 56 00:04:38,620 --> 00:04:42,920 vamos a seguir ahora con la absorción 57 00:04:42,920 --> 00:04:45,199 la absorción es un fenómeno superficial 58 00:04:45,199 --> 00:04:49,279 en la que el analito de interés o los analitos de interés 59 00:04:49,279 --> 00:04:57,660 quedan retenidos, bueno, estos anaditos están dispersos en una fase fluida, en un líquido o un gas 60 00:04:57,660 --> 00:05:01,399 y quedan retenidos en una fase sólida, absorbente, ¿vale? 61 00:05:01,420 --> 00:05:06,980 En este caso el absorbente es el sólido y el absorbato es ese líquido o ese gas, ¿vale? 62 00:05:06,980 --> 00:05:12,759 La sustancia que está en ese líquido o ese gas y queremos retener en el absorbente que es un sólido, ¿vale? 63 00:05:15,209 --> 00:05:22,569 Cuando hablamos de este tipo de, cuando hablamos de absorbentes, hay una serie de características que son importantes, son relativas a ellos, ¿vale? 64 00:05:22,949 --> 00:05:27,790 Uno es la selectividad y otro es la superficie específica que tenga ese absorbente, ¿vale? 65 00:05:27,949 --> 00:05:35,050 El absorbente puede ser selectivo de una única sustancia, un único compuesto en concreto o un grupo de compuestos, ¿vale? 66 00:05:35,050 --> 00:05:43,069 A veces nos interesa que solo sea capaz de retener un ácido en concreto o a veces que nos interesa que sea capaz de retener todos los compuestos que tengan el grupo funcional ácido 67 00:05:43,069 --> 00:06:03,269 O el grupo funcional, alcohol, o el que sea, me da igual, ¿vale? Pero bueno, quiere decir que es una característica de los absorbentes, ¿vale? Y lo que digo, gran superficie, porque como lo que queremos es retener el absorbente, en la superficie del absorbente, cuanto más superficie tenga, mayor capacidad de absorción va a tener, ¿vale? 68 00:06:03,269 --> 00:06:11,569 y generalmente se expresa esa capacidad de absorción como gramos absorbidos por 100 gramos de absorbente, ¿vale? 69 00:06:11,990 --> 00:06:18,709 Y otra cosa que nos interesa o que es característico de los absorbentes es, no es que sea característico de ellos, 70 00:06:18,829 --> 00:06:24,290 pero bueno, nos interesa que tengan, o sea, los hay que se pueden regenerar y los hay que no, ¿vale? 71 00:06:24,350 --> 00:06:25,430 Ahora lo veremos a continuación. 72 00:06:26,870 --> 00:06:31,430 Entonces, bueno, nos interesa que tengan buena capacidad de regeneración porque eso implica que puedan utilizar ese absorbente 73 00:06:31,430 --> 00:06:38,430 muchísimas veces. Esto es lo que pasaba cuando hablábamos del desecador con el gel de sílice 74 00:06:38,430 --> 00:06:44,509 que retenía por absorción el agua, pero luego yo caliento ese gel de sílice y desorbo 75 00:06:44,509 --> 00:06:50,509 el agua. Entonces lo puedo volver a utilizar. Dependiendo del absorbente, unos se pueden 76 00:06:50,509 --> 00:06:56,230 regenerar y otros no se pueden regenerar. Pero bueno, pues interesa que sí, porque 77 00:06:56,230 --> 00:06:59,910 lo puedo utilizar varias veces. Es más económico usar uno que puedo regenerar que no uno que 78 00:06:59,910 --> 00:07:01,810 no puedo regenerar, ¿vale? Porque si lo puedo 79 00:07:01,810 --> 00:07:03,670 regenerar lo utilizaré n veces 80 00:07:03,670 --> 00:07:05,069 y si no, pues solo uno. 81 00:07:06,589 --> 00:07:07,990 ¿Vale? Bueno, en función 82 00:07:07,990 --> 00:07:09,629 del tipo de interacciones que se producen 83 00:07:09,629 --> 00:07:11,730 entre el absorbente y el absorbato, pues hay 84 00:07:11,730 --> 00:07:13,649 distintos tipos de absorción, ¿vale? 85 00:07:13,990 --> 00:07:15,350 Puede ser por intercambio iónico, 86 00:07:15,850 --> 00:07:17,189 ¿vale? Que se produce un intercambio de iones 87 00:07:17,189 --> 00:07:19,730 entre iones que están retenidos en el absorbente 88 00:07:19,730 --> 00:07:21,730 y iones que forman parte de ese 89 00:07:21,730 --> 00:07:23,529 absorbato, 90 00:07:23,949 --> 00:07:25,389 ¿vale? Se produce un intercambio entre ellos. 91 00:07:26,970 --> 00:07:27,649 Esto es lo que ocurre 92 00:07:27,649 --> 00:07:29,550 cuando se produce el abrandamiento 93 00:07:29,550 --> 00:07:35,209 del agua, ¿vale? Cuando estoy limpiando el agua. Otro tipo de interacciones que se producen 94 00:07:35,209 --> 00:07:40,009 es, o que se pueden producir entre el absorbente y el absorbato son fuerzas de Van der Waal 95 00:07:40,009 --> 00:07:46,389 o fisisorción, ¿vale? Son fuerzas débiles. En este caso, bueno, en estos dos casos, los 96 00:07:46,389 --> 00:07:51,769 absorbentes son regenerables, ¿vale? Y también puede ser que se produzca una absorción química 97 00:07:51,769 --> 00:07:56,230 o fisisorción entre el absorbente y el absorbato, ¿vale? En este caso, el enlace que se produce 98 00:07:56,230 --> 00:07:57,870 es fuerte y estos absorbentes 99 00:07:57,870 --> 00:07:59,910 no son regenerables, ¿vale? 100 00:08:00,110 --> 00:08:01,730 Les doy disculpas porque aquí me he comido la U 101 00:08:01,730 --> 00:08:03,769 a falta de fotografía, ¿vale? 102 00:08:04,050 --> 00:08:06,149 Bueno, en este 103 00:08:06,149 --> 00:08:08,569 caso, sobre todo en el caso de 104 00:08:08,569 --> 00:08:09,990 absorción por fuerzas de Van der Waal 105 00:08:09,990 --> 00:08:10,889 o fisisorción, 106 00:08:12,089 --> 00:08:12,410 se puede 107 00:08:12,410 --> 00:08:16,290 el absorbato, o sea, el absorbente 108 00:08:16,290 --> 00:08:17,490 puede tener 109 00:08:17,490 --> 00:08:20,189 varias capas de absorbato, ¿vale? 110 00:08:21,129 --> 00:08:22,170 Mientras que en el caso de la 111 00:08:22,170 --> 00:08:23,389 quimisorción solo se 112 00:08:23,389 --> 00:08:28,790 Realmente solo se tiene una única capa de absorbato, ¿vale? 113 00:08:30,170 --> 00:08:34,710 Y eso, monocapa, multicapa, generable, no regenerable, ¿vale? 114 00:08:35,330 --> 00:08:41,210 Como comentario, simplemente decir que muchas veces se producen los tres fenómenos 115 00:08:41,210 --> 00:08:43,909 cuando se lleva a cabo un proceso de absorción, ¿vale? 116 00:08:44,289 --> 00:08:48,809 O sea, en función del absorbente, del absorbato, pues tendrá en mayor medida uno u otro, 117 00:08:48,950 --> 00:08:52,230 pero muchas veces se dan lugar los tres a la vez, ¿vale? 118 00:08:52,230 --> 00:08:59,789 O sea, no es que uno sea exclusivo del otro, ¿vale?, o excluyente del otro, ¿vale?, sino que muchas veces aparecen los tres a la vez, ¿vale? 119 00:09:01,210 --> 00:09:12,029 Bueno, hay distintos tipos de absorbentes, carbones activos, tiras de colorantes, ceres activos, como el gel de sílice, que comentábamos cuando los desecadores, pues miraros un poquito las características que tiene cada uno de ellos, ¿vale? 120 00:09:13,490 --> 00:09:16,950 Y luego vamos a comentar, vamos a hablar de la cromatografía, ¿vale? 121 00:09:16,950 --> 00:09:33,529 Entonces, los que hayáis cogido análisis instrumental, pues esto lo tenéis ya machacado, ¿vale? Porque esto en realidad se da sobre todo, o sea, aquí damos unos conceptos básicos y luego habláis de la cromatografía en profundidad en análisis instrumental. 122 00:09:33,529 --> 00:09:54,610 Los que tengáis la asignatura de instrumental, esto ya lo sabéis. La cromatografía es una técnica de separación de una mezcla de solutos basada en la diferente velocidad de desplazamiento de los componentes de la muestra al ser arrastrados por una fase móvil a través de una fase estacionaria. 123 00:09:54,610 --> 00:09:57,429 la fase móvil puede ser líquida o gaseosa 124 00:09:57,429 --> 00:10:00,269 y la fase estacionaria puede ser líquida o sólida 125 00:10:00,269 --> 00:10:03,529 en función de distintas combinaciones de los estados físicos 126 00:10:03,529 --> 00:10:04,830 de la fase móvil y la fase estacionaria 127 00:10:04,830 --> 00:10:06,970 tenemos distintos tipos de cromatografías 128 00:10:06,970 --> 00:10:12,429 porque básicamente la cromatografía lo que trata es 129 00:10:12,429 --> 00:10:14,529 yo tengo mi muestra disuelta 130 00:10:14,529 --> 00:10:16,809 en una fase líquida o gaseosa 131 00:10:16,809 --> 00:10:19,269 y lo que hago pasar es esa fase líquida o gaseosa 132 00:10:19,269 --> 00:10:21,190 a través de una fase estacionaria 133 00:10:21,190 --> 00:10:24,049 que esa fase estacionaria puede ser líquida o sólida 134 00:10:24,049 --> 00:10:42,690 En función de las interacciones que se producen entre los analitos y la fase estacionaria, esos analitos quedan más o menos retenidos en esa fase estacionaria. Serán más o menos arrastrados a través de esa fase móvil. 135 00:10:42,690 --> 00:10:46,909 Entonces, si yo tengo dos analitos y uno se mueve más rápido que otro 136 00:10:46,909 --> 00:10:48,789 consigo separarlos, ¿vale? 137 00:10:48,830 --> 00:10:51,370 Se trata de eso, a nivel así, como una idea muy general 138 00:10:51,370 --> 00:10:54,210 Yo tengo dos analitos en la fase móvil 139 00:10:54,210 --> 00:10:58,450 Como son retenidos en distinta magnitud por la fase estacionaria 140 00:10:58,450 --> 00:11:01,990 se mueven a distinta velocidad, se pueden separar 141 00:11:01,990 --> 00:11:02,309 ¿Vale? 142 00:11:03,830 --> 00:11:07,889 Entonces, como los tengo separados, ya los puedo identificar de forma más sencilla 143 00:11:07,889 --> 00:11:26,620 Entonces, bueno, la cromatografía se puede clasificar de distintas formas, ¿vale? Entonces, bueno, esta tablita, estudiarosla, nos dice cómo se, en función de distintos factores, cómo se clasifican las cromatografías, ¿vale? 144 00:11:26,620 --> 00:11:32,240 Dice, según se coloque en contacto la fase móvil y la fase estacionaria, pues será en columna o plana. 145 00:11:33,440 --> 00:11:38,720 Según el estado físico de la fase móvil y de la fase estacionaria, pues tengo distintos tipos. 146 00:11:39,200 --> 00:11:43,340 Entonces, líquido-líquido, líquido-sólido, gas-líquido y gas-sólido. 147 00:11:45,539 --> 00:11:50,679 Y luego, en función de los mecanismos, las interacciones que se producen entre la fase estacionaria y los analitos, 148 00:11:50,679 --> 00:11:53,299 que están inversos en esa fase líquida, 149 00:11:53,700 --> 00:11:55,279 pues tenemos cromatografía de absorción, 150 00:11:55,440 --> 00:11:56,840 de reparto, de intercambio iónico, 151 00:11:57,019 --> 00:11:58,200 de exclusión y de afinidad. 152 00:11:59,179 --> 00:12:02,539 Aquí viene una línea de cada uno de ellos. 153 00:12:03,840 --> 00:12:04,360 Absorción. 154 00:12:04,580 --> 00:12:06,600 El soluto es absorbido por la fase estacionaria 155 00:12:06,600 --> 00:12:08,720 debido a interacciones polares o de Van der Waals. 156 00:12:09,419 --> 00:12:10,179 Intercambio iónico. 157 00:12:10,720 --> 00:12:12,779 La fase estacionaria actúa como un intercambiador 158 00:12:12,779 --> 00:12:13,779 o cambiador de iones. 159 00:12:13,779 --> 00:12:16,100 Es decir, el soluto de la fase móvil es retenido 160 00:12:16,100 --> 00:12:17,919 porque se establecen fuerzas electrostáticas 161 00:12:17,919 --> 00:12:18,820 entre las dos fases. 162 00:12:19,480 --> 00:12:20,120 De exclusión. 163 00:12:20,679 --> 00:12:25,340 Aquí lo que ocurre es una separación en función del tamaño de las partículas, 164 00:12:25,639 --> 00:12:27,820 del tamaño de los poros que tiene esa fase estacionaria 165 00:12:27,820 --> 00:12:30,279 y del tamaño de las partículas que forman parte de la mezcla, 166 00:12:30,679 --> 00:12:33,320 de la cual yo quiero separar los componentes. 167 00:12:34,679 --> 00:12:38,559 De hecho, el soluto se reparte en la fase estacionaria por su solubilidad. 168 00:12:38,740 --> 00:12:41,139 Tiene distinta solubilidad entre la fase estacionaria y la fase móvil. 169 00:12:41,639 --> 00:12:45,220 Eso hace que los componentes de la muestra sean más o menos retenidos 170 00:12:45,220 --> 00:12:49,059 por la fase estacionaria y más o menos arrastrados por la fase móvil. 171 00:12:49,059 --> 00:12:50,600 Y así los separo. 172 00:12:50,679 --> 00:12:52,820 Y la cromatografía de afinidad. 173 00:12:53,340 --> 00:13:00,720 Aquí me ha quedado esto tapado, no sé muy bien porque cuando yo lo puse no estaba tapado, 174 00:13:01,120 --> 00:13:04,259 pero bueno, viene igual en el aula virtual, en los apuntes. 175 00:13:04,779 --> 00:13:10,220 Este es un tipo especial de absorción aplicado a la bioquímica en la que un sólido tiene enlazado un ligando. 176 00:13:10,220 --> 00:13:13,440 Entonces, en función de la interacción que se produzca entre el analito y ese ligando, 177 00:13:13,539 --> 00:13:16,559 se produce esa separación de los componentes de la muestra. 178 00:13:16,559 --> 00:13:27,679 Vamos a aprender los tipos de interacciones, los mecanismos que se producen entre los analitos y las fases estacionarias. 179 00:13:29,940 --> 00:13:34,220 Vamos a comentar un poquito de cromatorracía en capa fina y cromatorracía en columna. 180 00:13:34,860 --> 00:13:45,200 Dentro de la capa plana tenemos dos tipos, en papel y en capa fina. 181 00:13:45,200 --> 00:13:48,820 entonces, aquí yo os aconsejo que os veáis 182 00:13:48,820 --> 00:13:50,980 hay unos vídeos colgados en el tema 183 00:13:50,980 --> 00:13:51,679 y viene 184 00:13:51,679 --> 00:13:54,860 claro, se ve claramente, porque si no contarlo así 185 00:13:54,860 --> 00:13:56,240 sin tener un vídeo, pues es un poco 186 00:13:56,240 --> 00:13:58,340 complicado, ¿vale? 187 00:13:58,620 --> 00:14:00,639 pero bueno, lo comento 188 00:14:00,639 --> 00:14:02,600 y os miráis los vídeos, que es mucho más 189 00:14:02,600 --> 00:14:04,960 intuitivo, más aclaratorio 190 00:14:04,960 --> 00:14:05,340 ¿vale? 191 00:14:06,740 --> 00:14:08,700 en la cromatografía en capa plana 192 00:14:08,700 --> 00:14:10,820 ¿vale? la forma de, os habéis dicho 193 00:14:10,820 --> 00:14:12,720 que hay dos tipos, en papel y en placa 194 00:14:12,720 --> 00:14:14,460 ¿vale? 195 00:14:14,460 --> 00:14:31,000 La forma de operar es la misma, lo que cambia es el soporte en el que está la capa estacionaria, ¿vale? Pero la forma de llevar a cabo esa cromatografía es la misma. Entonces, vamos a comentar un poco, vamos a hablar un poco de los soportes y luego ya vemos cómo se lleva a cabo ese desarrollo de esa cromatografía, ¿vale? 196 00:14:31,000 --> 00:14:39,700 Entonces, la cromatografía sobre papel, la capa estacionaria, es un papel de filtro en el que tengo retenido agua, ¿vale? 197 00:14:39,700 --> 00:14:44,039 Que es el que va a actuar como separador de los componentes de la muestra, ¿vale? 198 00:14:45,960 --> 00:14:53,730 Y luego la fase móvil, pues puede ser un disolvente o una mezcla de disolventes en función de los analitos que yo quiera separar, ¿vale? 199 00:14:53,730 --> 00:15:09,480 Entonces, básicamente, aquí el mecanismo de separación es la distinta solubilidad de los distintos componentes en ese agua, ¿vale? 200 00:15:09,559 --> 00:15:12,299 Porque ese agua va a ser lo que llamamos fase móvil. 201 00:15:14,039 --> 00:15:17,840 Y, bueno, aquí vienen unas aplicaciones de la cromatografía en papel, ¿vale? 202 00:15:17,899 --> 00:15:20,000 Pues determinar el número de componentes de una muestra. 203 00:15:20,740 --> 00:15:24,559 Una cosa importante, la cromatografía en papel es una técnica cualitativa, ¿vale? 204 00:15:24,559 --> 00:15:27,340 no puedo saber cuánto tengo de cada componente. 205 00:15:28,100 --> 00:15:31,080 Sé si tengo dos, tres componentes y qué componente tengo, 206 00:15:31,740 --> 00:15:33,559 pero no sé cuánto tengo. 207 00:15:34,139 --> 00:15:35,080 ¿Vale? Importante. 208 00:15:36,720 --> 00:15:37,080 Entonces, bueno, 209 00:15:38,720 --> 00:15:42,139 pues aquí vienen unas aplicaciones de la cromatografía. 210 00:15:42,639 --> 00:15:44,440 Determinar el número de componentes de una muestra, 211 00:15:44,700 --> 00:15:47,220 comprobar la pureza, seguir la evolución de una reacción, 212 00:15:47,840 --> 00:15:50,519 determinar el disolvente más apropiado 213 00:15:50,519 --> 00:15:52,779 para llevar a cabo luego una cromatografía preparativa 214 00:15:52,779 --> 00:15:54,000 en columna o en placa 215 00:15:54,000 --> 00:15:56,580 y seguiré el proceso de una cromatorgrafía en columna. 216 00:15:57,179 --> 00:16:00,779 ¿Vale? Pues esto mirároslo también porque, bueno, me parece importante. 217 00:16:05,700 --> 00:16:09,259 Y en la cromatorgrafía en placa, ¿vale? 218 00:16:09,879 --> 00:16:14,159 Aquí tenemos el soporte del papel, aquí lo que tenemos es el soporte donde colocamos la fase estacionaria. 219 00:16:14,159 --> 00:16:20,179 Es, o bien, antes se usaba sobre todo un vidrio, ¿vale? 220 00:16:20,179 --> 00:16:22,700 un vidrio, como un cristal 221 00:16:22,700 --> 00:16:25,039 en el que yo colocaba 222 00:16:25,039 --> 00:16:27,159 yo preparaba la fase 223 00:16:27,159 --> 00:16:29,179 estacional y la dejaba allí, la colocaba y dejaba 224 00:16:29,179 --> 00:16:31,179 que se secase, ¿vale? Ahora la mayor 225 00:16:31,179 --> 00:16:33,279 parte de ellos, lo que más se usa 226 00:16:33,279 --> 00:16:34,080 sobre todo es 227 00:16:34,080 --> 00:16:37,259 la cromatografía 228 00:16:37,259 --> 00:16:39,340 en placa en la que el soporte es aluminio 229 00:16:39,340 --> 00:16:41,159 ¿vale? Es un papel de aluminio 230 00:16:41,159 --> 00:16:42,980 una chapita de aluminio finita 231 00:16:42,980 --> 00:16:45,360 en la que ya, y ya lo compro 232 00:16:45,360 --> 00:16:47,279 no se preparan, no es que sean 233 00:16:47,279 --> 00:16:49,179 cosas muy específicas en investigación, pero bueno 234 00:16:49,179 --> 00:16:52,019 Para el trabajo rutinario ya lo compras hecho, ¿vale? 235 00:16:52,220 --> 00:16:55,080 Entonces, inventes como una especie de cifra un folio, ¿vale? 236 00:16:55,120 --> 00:16:57,899 Solo que no es un folio de papel, sino que es un folio de aluminio, 237 00:16:58,360 --> 00:17:02,220 más resistente que el papel de aluminio este que usamos en la cocina 238 00:17:02,220 --> 00:17:07,460 y sobre el que hay una pequeña capa, una capa finita de absorbente, ¿vale? 239 00:17:08,039 --> 00:17:11,279 Entonces, ese absorbente, pues depende de los analitos que yo quiero separar, 240 00:17:11,339 --> 00:17:15,740 pues es de distintos materiales, gel de sílice, óxido de aluminio, tierra de atomeas, depende, ¿vale? 241 00:17:15,740 --> 00:17:24,940 Y luego, esto es la fase estacionaria y luego la fase móvil, que también llamamos fluyente, ¿vale? 242 00:17:24,940 --> 00:17:30,960 Fluyente y fase móvil son sinónimos en la cromatografía, pueden ser distintos disolventes orgánicos, 243 00:17:31,039 --> 00:17:34,839 que pueden ser los mismos que utilice en cromatografía de papel, ¿vale? 244 00:17:34,940 --> 00:17:43,019 Etes de petróleo, cicloxano, tolueno, etanol, metanol, acetona, puede ser uno o una mezcla de dos, tres disolventes, ¿vale? 245 00:17:43,019 --> 00:18:02,539 En función de lo que yo quiera separar, ¿vale? Entonces la diferencia entre uno y otro es simplemente el soporte en el que yo coloco la fase estacionaria, ¿vale? Vamos, lo que es la fase estacionaria en realidad. Pero la forma de llevar a cabo la cromatografía en capa plana es la misma, ¿vale? 246 00:18:02,539 --> 00:18:19,519 Bueno, aquí tengo otra diapositiva, ventajas de la cromatografía en capa fina respecto a la de papel. Es más eléctrica, de mayor resolución, es capaz de separar mejor los componentes de una muestra y tiene mayor velocidad de separación, ¿vale? Pero bueno, tampoco es el de mucho, en cualquiera de los dos casos. 247 00:18:19,519 --> 00:18:22,039 y bueno, vamos a comentar un poco 248 00:18:22,039 --> 00:18:23,599 el procedimiento, ¿vale? 249 00:18:23,660 --> 00:18:24,880 ya os he dicho que 250 00:18:24,880 --> 00:18:28,079 la croma, que la fase estacional 251 00:18:28,079 --> 00:18:29,980 era lo que nos, habitualmente 252 00:18:29,980 --> 00:18:31,720 lo que nos vende, si es en papel, pues es un papel 253 00:18:31,720 --> 00:18:33,460 de filtro, nos vale para hacerlo 254 00:18:33,460 --> 00:18:36,079 ¿vale? y si es en 255 00:18:36,079 --> 00:18:36,960 en capa 256 00:18:36,960 --> 00:18:40,079 en placa, perdón, pues simplemente 257 00:18:40,079 --> 00:18:41,779 es como si fuera un papel 258 00:18:41,779 --> 00:18:44,039 un folio, pero en vez de ser de folio, pues es lo que os he dicho 259 00:18:44,039 --> 00:18:45,680 del papel de aluminio 260 00:18:45,680 --> 00:18:46,740 con su 261 00:18:46,740 --> 00:18:49,960 cubierto, recubierto con una fina capa 262 00:18:49,960 --> 00:18:51,859 de la fase estacionaria, ¿vale? 263 00:18:51,920 --> 00:18:53,700 Entonces, tanto el papel de filtro como 264 00:18:53,700 --> 00:18:55,619 el de placa 265 00:18:55,619 --> 00:18:57,819 pues es una especie de folio y yo 266 00:18:57,819 --> 00:19:00,039 corto, lo puedo cortar fácilmente 267 00:19:00,039 --> 00:19:02,039 en caso de papel de filtro con las tijeras 268 00:19:02,039 --> 00:19:04,079 en el caso de la cromatografía 269 00:19:04,079 --> 00:19:05,519 en placa con un cúter 270 00:19:05,519 --> 00:19:07,380 ¿vale? Puedo cortar 271 00:19:07,380 --> 00:19:09,920 corto el tamaño de 272 00:19:09,920 --> 00:19:12,119 placa que yo necesite en función del número de muestras 273 00:19:12,119 --> 00:19:13,819 que yo quiero cromatografiar, ¿vale? 274 00:19:14,700 --> 00:19:16,220 Una cosa, bueno 275 00:19:16,220 --> 00:19:18,279 ya digo que creo que hay un bit, viene hasta el vídeo 276 00:19:18,279 --> 00:19:19,579 os lo veis, ¿vale? 277 00:19:20,579 --> 00:19:21,980 generalmente cuando yo voy a cortar el 278 00:19:21,980 --> 00:19:23,460 tamaño que necesito para hacer 279 00:19:23,460 --> 00:19:25,740 el cromatograma 280 00:19:25,740 --> 00:19:28,480 y lo corto con el cúter, lo corto por la parte 281 00:19:28,480 --> 00:19:30,420 del aluminio, no por la parte del 282 00:19:30,420 --> 00:19:32,859 de la fase estacionaria 283 00:19:32,859 --> 00:19:33,339 ¿vale? 284 00:19:34,619 --> 00:19:36,559 bueno, dicho esto, yo corto 285 00:19:36,559 --> 00:19:38,400 el sitio que yo necesite en función 286 00:19:38,400 --> 00:19:39,720 del número de muestras que yo quiera 287 00:19:39,720 --> 00:19:42,420 cromatografiar, separar los 288 00:19:42,420 --> 00:19:44,259 componentes, ¿vale? en este caso aquí 289 00:19:44,259 --> 00:19:46,140 tengo tres, ¿vale? yo he cortado esta plaquita 290 00:19:46,140 --> 00:19:49,180 y he colocado tres muestras, ¿vale? 291 00:19:50,160 --> 00:19:53,180 Primero lo que se hace, yo una vez que he cortado el tamaño de placa 292 00:19:53,180 --> 00:19:55,900 que necesito en función de las muestras que yo quiero separar, ¿vale? 293 00:19:56,240 --> 00:20:02,119 Lo que hago es marcar con un lápiz una línea más o menos a un centímetro del borde, ¿vale? 294 00:20:02,700 --> 00:20:04,740 Con lápiz, no con rotulador, con lápiz. 295 00:20:05,700 --> 00:20:09,799 Y sobre esa línea es donde yo deposito las muestras que yo quiero separar. 296 00:20:09,799 --> 00:20:14,180 Las puedo depositar simplemente con una pipeta Pasteur, una gotita o con un tubito capilar. 297 00:20:14,180 --> 00:20:17,039 es una gota, es una cantidad mínima lo que se necesita, ¿vale? 298 00:20:17,140 --> 00:20:19,519 En este caso, pues he depositado tres muestras, 299 00:20:19,619 --> 00:20:22,640 dice aplicación de las muestras, tres muestras, ¿vale? 300 00:20:23,680 --> 00:20:26,819 En esa línea, que yo he marcado con papel, con lápiz, perdón. 301 00:20:28,019 --> 00:20:30,779 Luego lo que tengo que hacer es introducir mi placa 302 00:20:30,779 --> 00:20:35,519 dentro de mi fase móvil, ¿vale? 303 00:20:35,539 --> 00:20:37,200 Ese disolvente, esas mezclas de disolvente 304 00:20:37,200 --> 00:20:39,140 que yo voy a utilizar para separar los componentes. 305 00:20:39,799 --> 00:20:42,019 El disolvente tiene que quedarme siempre por debajo 306 00:20:42,019 --> 00:20:44,259 de la zona de aplicación 307 00:20:44,259 --> 00:20:46,299 de las muestras. Si lo coloco por encima 308 00:20:46,299 --> 00:20:48,220 lo que voy a hacer es disolver las muestras 309 00:20:48,220 --> 00:20:50,160 en el disolvente orgánico, en la fase 310 00:20:50,160 --> 00:20:52,299 móvil. ¿Vale? Y entonces me van a quedar 311 00:20:52,299 --> 00:20:53,900 aquí estas 312 00:20:53,900 --> 00:20:56,220 muestras disueltas en la fase 313 00:20:56,220 --> 00:20:58,259 móvil. No es lo que yo quiero. Lo que yo quiero es separar 314 00:20:58,259 --> 00:21:00,200 los componentes que forman parte de las muestras. 315 00:21:00,339 --> 00:21:01,980 Entonces, siempre el disolvente, 316 00:21:02,099 --> 00:21:04,460 la fase móvil, por debajo 317 00:21:04,460 --> 00:21:06,220 de la zona de aplicación de las muestras. 318 00:21:06,819 --> 00:21:07,019 ¿Vale? 319 00:21:08,359 --> 00:21:10,259 Lo que vamos a introducir, esto es una cubeta, 320 00:21:10,259 --> 00:21:12,900 hay casas comerciales que te venden las cubetas 321 00:21:12,900 --> 00:21:13,960 y si no, bueno, pues cualquier 322 00:21:13,960 --> 00:21:16,420 frasco de vidrio nos sirve 323 00:21:16,420 --> 00:21:19,119 digo de vidrio porque tiene que ser 324 00:21:19,119 --> 00:21:21,259 algo transparente para que yo pueda ver qué es lo que está sucediendo 325 00:21:21,259 --> 00:21:22,799 en la placa 326 00:21:22,799 --> 00:21:25,640 para ver el desarrollo de ese cromatograma 327 00:21:25,640 --> 00:21:27,079 ¿vale? entonces bueno, yo he aplicado 328 00:21:27,079 --> 00:21:28,819 las muestras, las he identificado 329 00:21:28,819 --> 00:21:29,839 tengo que saber lo que pongo en el 330 00:21:29,839 --> 00:21:33,099 saber que tengo en un vaso 331 00:21:33,099 --> 00:21:34,460 de precipitados, tengo que saber 332 00:21:34,460 --> 00:21:36,920 que la muestra 1, o sea, o esto 333 00:21:36,920 --> 00:21:38,940 y sé que la 1 procede de la muestra 334 00:21:38,940 --> 00:21:41,319 no sé, lo que sea, la 2 de lo que sea 335 00:21:41,319 --> 00:21:42,980 y la 3 de lo que sea, ¿vale? 336 00:21:43,339 --> 00:21:43,779 identificada 337 00:21:43,779 --> 00:21:46,720 y yo con un lápiz 338 00:21:46,720 --> 00:21:49,460 coloco, introduzco mi muestra 339 00:21:49,460 --> 00:21:50,619 mi placa 340 00:21:50,619 --> 00:21:53,319 en la cubeta, ¿vale? 341 00:21:53,460 --> 00:21:54,480 aquí hay cubeta de vidrio 342 00:21:54,480 --> 00:21:57,339 con matográfica, pero ya digo, una cubeta o simplemente 343 00:21:57,339 --> 00:21:59,259 un poco de cristal, si lo hacemos en plan 344 00:21:59,259 --> 00:22:01,180 cutre, la introduzco 345 00:22:01,180 --> 00:22:03,119 y entonces ¿qué pasa? que ahora por 346 00:22:03,119 --> 00:22:05,119 capilaridad, la fase móvil 347 00:22:05,119 --> 00:22:07,000 va a ir ascendiendo a través de la fase 348 00:22:07,000 --> 00:22:08,579 estacionaria. ¿Y qué va a ocurrir? 349 00:22:08,700 --> 00:22:10,799 En su arrastre, al ir subiendo, va a ir 350 00:22:10,799 --> 00:22:13,079 arrastrando los componentes 351 00:22:13,079 --> 00:22:13,640 de la muestra. 352 00:22:14,720 --> 00:22:16,799 En función de si son más solubles en la 353 00:22:16,799 --> 00:22:19,019 fase móvil o en la 354 00:22:19,019 --> 00:22:19,880 fase estacionaria. 355 00:22:20,880 --> 00:22:22,660 Generalmente la fase estacionaria es polar 356 00:22:22,660 --> 00:22:24,460 y los disolventes son apolares. 357 00:22:25,640 --> 00:22:27,220 Si los dos componentes de la muestra 358 00:22:27,220 --> 00:22:28,740 son componentes... 359 00:22:28,740 --> 00:22:30,400 Vamos a suponer que tengo dos componentes. 360 00:22:30,400 --> 00:22:32,140 Uno que es muy polar y otro que es 361 00:22:32,140 --> 00:22:34,440 apolar. La fase estacionaria 362 00:22:34,440 --> 00:22:36,160 suele ser 363 00:22:36,160 --> 00:22:38,299 polares, va a quedar más retenido 364 00:22:38,299 --> 00:22:40,539 el componente polar 365 00:22:40,539 --> 00:22:41,599 mientras que la polar 366 00:22:41,599 --> 00:22:44,400 va a ser menos retenido, con lo cual 367 00:22:44,400 --> 00:22:46,099 va a avanzar más 368 00:22:46,099 --> 00:22:47,839 al ir subiendo 369 00:22:47,839 --> 00:22:49,960 al avanzar la fase móvil 370 00:22:49,960 --> 00:22:51,599 ¿vale? con lo cual 371 00:22:51,599 --> 00:22:54,059 aquí si vemos en este caso 372 00:22:54,059 --> 00:22:54,460 que ya está 373 00:22:54,460 --> 00:22:58,099 la cromografía ya desarrollada 374 00:22:58,099 --> 00:23:00,000 ¿vale? aquí yo he aplicado, esto lo pone 375 00:23:00,000 --> 00:23:00,599 para papel, ¿no? 376 00:23:01,700 --> 00:23:03,579 la fase móvil que vemos que está por debajo 377 00:23:03,579 --> 00:23:06,140 de la línea en la que yo he aplicado mi muestra 378 00:23:06,140 --> 00:23:08,980 Es un puntito 379 00:23:08,980 --> 00:23:11,480 Cuando ha subido la fase móvil 380 00:23:11,480 --> 00:23:13,680 Por capilaridad, esto azul oscurito 381 00:23:13,680 --> 00:23:15,119 Es la fase móvil 382 00:23:15,119 --> 00:23:16,640 Que ha ido subiendo, entonces al ir subiendo 383 00:23:16,640 --> 00:23:19,220 La polaridad de los componentes de la muestra 384 00:23:19,220 --> 00:23:21,359 Y la polaridad de la fase estacional 385 00:23:21,359 --> 00:23:22,660 Y la polaridad de la fase móvil 386 00:23:22,660 --> 00:23:23,779 Se van separando 387 00:23:23,779 --> 00:23:27,519 En distintos componentes 388 00:23:27,519 --> 00:23:28,119 ¿Veis? Aquí pone 389 00:23:28,119 --> 00:23:30,579 Componentes separados, 1, 2, 3, 4 390 00:23:30,579 --> 00:23:31,779 Bueno, aquí parece que hay otros 5 391 00:23:31,779 --> 00:23:35,200 Entonces así yo los tengo 392 00:23:35,200 --> 00:23:36,700 los he separado porque 393 00:23:36,700 --> 00:23:39,440 se ven arrastrados por la fase móvil 394 00:23:39,440 --> 00:23:40,539 en una diferente 395 00:23:40,539 --> 00:23:42,160 en una distinta magnitud 396 00:23:42,160 --> 00:23:43,799 vale 397 00:23:43,799 --> 00:23:46,640 los he podido separar 398 00:23:46,640 --> 00:23:48,599 el cromatograma termina 399 00:23:48,599 --> 00:23:49,240 si aquí 400 00:23:49,240 --> 00:23:52,400 veis esto es una 401 00:23:52,400 --> 00:23:54,500 el papel llega hasta aquí arriba 402 00:23:54,500 --> 00:23:57,539 yo no dejo que la fase móvil 403 00:23:57,539 --> 00:23:58,859 siga hasta arriba 404 00:23:58,859 --> 00:24:00,960 sino que cuando me quede como un centímetro 405 00:24:00,960 --> 00:24:02,000 o así pues ya corto 406 00:24:02,000 --> 00:24:04,559 y considero que ya está separado todos los componentes 407 00:24:04,559 --> 00:24:06,799 corto la cromatografía 408 00:24:06,799 --> 00:24:08,880 a ver, también depende de los componentes 409 00:24:08,880 --> 00:24:10,319 que tenga, separar, a veces que con 410 00:24:10,319 --> 00:24:12,240 un trocito de papel de 411 00:24:12,240 --> 00:24:14,420 6 centímetros es suficiente, a veces 412 00:24:14,420 --> 00:24:16,319 tengo que poner 10, pues depende de los 413 00:24:16,319 --> 00:24:18,059 componentes que tenga que separar 414 00:24:18,059 --> 00:24:20,460 pero vamos, lo que quiero decir es que generalmente 415 00:24:20,460 --> 00:24:22,319 la fase móvil no se deja que suba hasta arriba 416 00:24:22,319 --> 00:24:24,500 sino que lo termino antes 417 00:24:24,500 --> 00:24:26,359 ¿vale? esto sería igual 418 00:24:26,359 --> 00:24:28,519 aquí pone cromatografía de papel, pero sería igual 419 00:24:28,519 --> 00:24:30,500 en papel que en capa 420 00:24:30,500 --> 00:24:31,779 fina, es lo mismo 421 00:24:31,779 --> 00:24:34,339 ¿vale? igualmente lo corto, pongo 422 00:24:34,339 --> 00:24:36,299 la muestra, o sea, marco la línea, pongo 423 00:24:36,299 --> 00:24:38,240 la muestra, lo meto en la cubeta, 424 00:24:38,519 --> 00:24:40,099 dejo que se desarrolle, por eso tiene que ser algo 425 00:24:40,099 --> 00:24:42,079 transparente, ¿vale?, de vidrio, para que yo vea 426 00:24:42,079 --> 00:24:44,200 si veo que se me están separando 427 00:24:44,200 --> 00:24:46,259 los componentes y veo cuando ya quiero terminar 428 00:24:46,259 --> 00:24:47,640 la cromatografía, ¿vale? 429 00:24:49,640 --> 00:24:50,000 Entonces, 430 00:24:50,920 --> 00:24:54,420 en función de la fase móvil y la fase 431 00:24:54,420 --> 00:24:56,380 estacionaria, ¿vale?, los 432 00:24:56,380 --> 00:24:58,380 componentes de la muestra tienen una cosa 433 00:24:58,380 --> 00:24:59,779 que se llama factor de retención, 434 00:25:00,039 --> 00:25:02,420 perdón, que es este, FR, 435 00:25:03,279 --> 00:25:04,079 RF, perdón, 436 00:25:04,339 --> 00:25:10,000 que es característico de un componente determinado en una muestra determinada 437 00:25:10,000 --> 00:25:14,700 con una fase estacionaria y una fase móvil determinada y a una determinada temperatura. 438 00:25:15,539 --> 00:25:22,599 Entonces este RF es distancia recorrida por el compuesto y distancia recorrida dividido entre distancia recorrida por el disolvente. 439 00:25:23,160 --> 00:25:31,960 Porque yo aquí he marcado esta línea con la muestra y luego con una regla lo que se hace es medir de aquí hasta aquí. 440 00:25:31,960 --> 00:25:35,039 es la distancia que ha recorrido el disolvente 441 00:25:35,039 --> 00:25:38,079 6,3 centímetros 442 00:25:38,079 --> 00:25:41,259 de aquí a aquí es la distancia que ha recorrido 443 00:25:41,259 --> 00:25:43,680 este componente, 5,8 444 00:25:43,680 --> 00:25:46,799 ese valor es característico 445 00:25:46,799 --> 00:25:49,680 de un determinado compuesto en una mezcla 446 00:25:49,680 --> 00:25:52,240 para una determinada fase estacionaria 447 00:25:52,240 --> 00:25:54,660 y una determinada fase móvil 448 00:25:54,660 --> 00:25:57,039 y es una 449 00:25:57,039 --> 00:26:01,259 constante 450 00:26:01,259 --> 00:26:03,559 para ese compuesto, ¿vale? Una característica. 451 00:26:03,940 --> 00:26:05,680 De todas maneras, esto lo que se hace habitualmente 452 00:26:05,680 --> 00:26:07,480 es, si yo creo que en esta muestra 453 00:26:07,480 --> 00:26:08,980 tengo, imaginaros, 454 00:26:10,200 --> 00:26:11,900 distintos aminoácidos, 455 00:26:11,900 --> 00:26:13,420 ¿vale? Y yo sé que tengo 456 00:26:13,420 --> 00:26:15,980 lisina, 457 00:26:16,559 --> 00:26:17,880 ¿vale? Pues yo lo que hago es 458 00:26:17,880 --> 00:26:20,160 igual que, o sea, aquí yo coloco mi muestra, 459 00:26:20,440 --> 00:26:21,640 mi gotita de muestra, y aquí coloco 460 00:26:21,640 --> 00:26:23,819 una gota de lisina, ¿vale? 461 00:26:24,220 --> 00:26:26,180 Si yo aquí tengo lisina, 462 00:26:26,240 --> 00:26:27,660 la lisina subirá hasta este punto. 463 00:26:28,180 --> 00:26:30,059 Si aquí tengo lisina, la lisina subirá 464 00:26:30,059 --> 00:26:30,599 hasta este punto. 465 00:26:31,259 --> 00:26:39,000 Entonces, como sé que la lisina, su RF es 3,8, si aquí es 3,8, tengo lisina. 466 00:26:39,720 --> 00:26:43,799 ¿Vale? Es una forma de determinar qué componentes tengo en una muestra. 467 00:26:44,940 --> 00:26:50,200 ¿Vale? Si tengo varios, pues lo que hago es aquí pinchar los que yo creo que puedo tener en esta mezcla. 468 00:26:51,140 --> 00:26:54,200 ¿Vale? Si este sube lo mismo que este, ese es el mismo compuesto. 469 00:26:54,920 --> 00:27:00,079 Si este tiene otra mancha que ha subido igual que la de aquí, es que tengo este compuesto. 470 00:27:00,500 --> 00:27:00,660 ¿Vale? 471 00:27:01,259 --> 00:27:17,700 No sé qué compuesto tengo, pero no sé cuánto tengo. A veces las manchas se ven a simple vista y otras veces tengo que observarlas con luz ultravioleta o añadir un reactivo. 472 00:27:17,700 --> 00:27:19,339 a veces se pulverizan 473 00:27:19,339 --> 00:27:21,759 con un fruflis de estos lo pulverizo 474 00:27:21,759 --> 00:27:24,259 para que sea coloreada 475 00:27:24,259 --> 00:27:26,019 la mancha, porque a veces no se ve el color 476 00:27:26,019 --> 00:27:28,500 entonces depende del tipo de muestra 477 00:27:28,500 --> 00:27:29,759 pues a veces hay que hacerlo 478 00:27:29,759 --> 00:27:31,920 con luz ultravioleta o añadir un reactivo 479 00:27:31,920 --> 00:27:34,220 pulverizarlo con un reactivo y entonces ya sí que lo veo 480 00:27:34,220 --> 00:27:36,220 a simple vista, a veces sí se ve a simple vista 481 00:27:36,220 --> 00:27:41,259 bueno, pues digo, esto es la cromatografía 482 00:27:41,259 --> 00:27:42,900 en capa fina y el desarrollo 483 00:27:42,900 --> 00:27:45,259 es el mismo, sea en papel o en placa 484 00:27:45,259 --> 00:27:46,079 vale 485 00:27:46,079 --> 00:27:49,339 ahora vamos a ver un poquito de la cromatografía en columna 486 00:27:49,339 --> 00:27:50,299 entonces en este caso 487 00:27:50,299 --> 00:27:52,720 aquí lo que ocurre simplemente es que la fase estacionera 488 00:27:52,720 --> 00:27:54,500 está colocada dentro de una columna 489 00:27:54,500 --> 00:27:56,839 de vidrio, como si fuera una especie de bureta 490 00:27:56,839 --> 00:27:57,759 similar 491 00:27:57,759 --> 00:27:58,680 ¿vale? 492 00:28:00,500 --> 00:28:02,440 que la fase estacionera se coloca en una columna 493 00:28:02,440 --> 00:28:04,259 que es un tubo de vidrio de dimensiones variables 494 00:28:04,259 --> 00:28:07,079 ¿vale? y acaba con un estrechamiento 495 00:28:07,079 --> 00:28:08,200 que dispone de una llave 496 00:28:08,200 --> 00:28:11,079 igual hay un vídeo, os lo miráis 497 00:28:11,079 --> 00:28:14,420 bueno, aquí os explico un poco como se 498 00:28:14,420 --> 00:28:18,079 se lleva a cabo el desarrollo de una 499 00:28:18,079 --> 00:28:19,440 cromatografía en columna 500 00:28:19,440 --> 00:28:35,759 Una vez colocada en posición vertical la columna, se introduce en el fondo de la columna lana de vidrio o algodón ayudándonos de una varilla de vidrio. Esto es simplemente para que la fase estacionaria no se nos salga por el agujero de la llave. 501 00:28:35,759 --> 00:28:38,640 este relleno de la colunda con la mezcla 502 00:28:38,640 --> 00:28:40,440 de absorbente y el disolvente 503 00:28:40,440 --> 00:28:42,660 con la llave abierta de manera que gotee un poco 504 00:28:42,660 --> 00:28:44,420 de disolvente, lo que hago es una mezcla del 505 00:28:44,420 --> 00:28:46,480 absorbente, la fase estacionaria y el disolvente 506 00:28:46,480 --> 00:28:48,880 que yo voy a utilizar como fase móvil 507 00:28:48,880 --> 00:28:49,759 ¿vale? 508 00:28:51,920 --> 00:28:52,839 bueno, cuando ya 509 00:28:52,839 --> 00:28:54,680 veo que gote un poco 510 00:28:54,680 --> 00:28:56,799 el disolvente, la fase móvil, cierro la llave 511 00:28:56,799 --> 00:28:58,819 añado más 512 00:28:58,819 --> 00:29:00,500 disolvente y me tiene que quedar un poquito 513 00:29:00,500 --> 00:29:02,480 por encima del material de relleno 514 00:29:02,480 --> 00:29:07,079 ¿vale? no sé, o sea, si lo veis aquí 515 00:29:07,079 --> 00:29:09,680 esta sería la fase estacionaria 516 00:29:09,680 --> 00:29:11,099 bueno, es que aquí exactamente 517 00:29:11,099 --> 00:29:12,859 por aquí, imagínate 518 00:29:12,859 --> 00:29:15,279 que si esta es la fase estacionaria que añade un poquito 519 00:29:15,279 --> 00:29:16,819 más de líquido, ¿vale? 520 00:29:16,859 --> 00:29:19,200 un poquito por encima, luego colocamos 521 00:29:19,200 --> 00:29:21,480 la muestra disuelta en el disolvente 522 00:29:21,480 --> 00:29:23,440 en el que se ha preparado la columna 523 00:29:23,440 --> 00:29:24,700 la depositamos 524 00:29:24,700 --> 00:29:27,019 aquí está la mezcla 525 00:29:27,019 --> 00:29:29,359 ¿vale? esta es la columna 526 00:29:29,359 --> 00:29:31,000 con el relleno del absorbente 527 00:29:31,000 --> 00:29:31,940 la muestra 528 00:29:31,940 --> 00:29:34,059 ¿vale? 529 00:29:35,420 --> 00:29:37,000 y luego lo que tengo que añadir 530 00:29:37,000 --> 00:29:40,700 se añade, una vez que tengo la muestra colocada en la parte superior 531 00:29:40,700 --> 00:29:43,440 se añade el disolvente, el huyente, hemos dicho que disolvente 532 00:29:43,440 --> 00:29:45,539 bueno, disolvente, el huyente, fase móvil es lo mismo 533 00:29:45,539 --> 00:29:47,359 y se abre la llave de la columna 534 00:29:47,359 --> 00:29:50,380 la muestra se va separando en bandas a lo largo de la columna 535 00:29:50,380 --> 00:29:53,680 en base a su diferente movilidad y se recogen las diferentes fracciones 536 00:29:53,680 --> 00:29:57,359 veis aquí, esta es la columna 537 00:29:57,359 --> 00:29:59,420 he colocado mi muestra 538 00:29:59,420 --> 00:30:02,720 añado la fase móvil 539 00:30:02,720 --> 00:30:06,740 la columna está abierta 540 00:30:06,740 --> 00:30:08,799 voy añadiendo la fase móvil y lo que 541 00:30:08,799 --> 00:30:10,740 hace es, pues en función de las interacciones que se 542 00:30:10,740 --> 00:30:12,940 producen entre la fase estacionaria, la muestra 543 00:30:12,940 --> 00:30:14,859 y la fase móvil, pues se van separando 544 00:30:14,859 --> 00:30:16,480 los componentes 545 00:30:16,480 --> 00:30:18,460 ¿veis? aquí tengo dos, o sea, esto sería bueno 546 00:30:18,460 --> 00:30:19,720 la lanza porque está todo mezclado 547 00:30:19,720 --> 00:30:22,119 y se me van separando porque este 548 00:30:22,119 --> 00:30:24,539 está menos retenido 549 00:30:24,539 --> 00:30:26,140 en la fase estacionaria que este 550 00:30:26,140 --> 00:30:28,579 ¿vale? idealmente si son 551 00:30:28,579 --> 00:30:30,579 compuestos coloreados pues lo veo fácilmente, si no son 552 00:30:30,579 --> 00:30:32,559 compuestos coloreados pues ya tengo que añadir algo para que 553 00:30:32,559 --> 00:30:34,240 sean los colores 554 00:30:34,240 --> 00:30:36,259 ¿vale? pero bueno, simplemente 555 00:30:36,259 --> 00:30:51,980 He separado mis dos compuestos y luego lo que hago yo aquí es, cuando veo, como esto es transparente, en este caso que son coloreados, pues cuando veo que llega este rojo aquí, lo recojo en un tubito, en un empento, por ejemplo, porque suelen ser pequeñas cantidades, y luego recojo este otro componente. 556 00:30:51,980 --> 00:30:55,839 Y así los he separado y los tengo separados en dos tubos, ¿vale? 557 00:30:56,220 --> 00:31:00,460 Entonces, en función de las interacciones que se producen, pues hay distintos tipos de cromatografías, ¿vale? 558 00:31:00,480 --> 00:31:02,660 Que es lo que hemos comentado antes, ¿vale? 559 00:31:02,779 --> 00:31:05,900 De reparto, de intercambio iónico, ¿vale? 560 00:31:05,960 --> 00:31:11,819 Pues eso varía en función de las interacciones que se producen entre la fase móvil, la fase estacional y el analito, ¿vale? 561 00:31:14,660 --> 00:31:15,579 Es lo que pone aquí. 562 00:31:15,779 --> 00:31:21,960 Dicen tipos de cromatografía en columna de absorción, de exclusión, de afinidad, de intercambio iónico o de reparto, ¿vale? 563 00:31:21,960 --> 00:31:24,660 nada, quedaros con el nombre porque esto ya lo veréis 564 00:31:24,660 --> 00:31:26,519 más en profundidad al año que viene 565 00:31:26,519 --> 00:31:28,799 ¿vale? y luego, bueno, simplemente 566 00:31:28,799 --> 00:31:29,579 esta es la 567 00:31:29,579 --> 00:31:32,039 líquida, ¿vale? 568 00:31:33,720 --> 00:31:34,599 y luego, en la 569 00:31:34,599 --> 00:31:36,539 cromatografía de gases, o sea, aquí en este caso 570 00:31:36,539 --> 00:31:37,420 la fase 571 00:31:37,420 --> 00:31:40,420 móvil es un líquido 572 00:31:40,420 --> 00:31:41,720 ¿vale? 573 00:31:42,420 --> 00:31:44,539 en este caso, aquí en la cromatografía de gases 574 00:31:44,539 --> 00:31:46,319 la fase móvil es un gas 575 00:31:46,319 --> 00:31:47,700 ¿vale? 576 00:31:48,700 --> 00:31:50,660 la muestra es, y es necesario que la muestra 577 00:31:50,660 --> 00:31:52,539 esté en fase vapor, ¿vale? 578 00:31:52,539 --> 00:31:53,240 Se volatilice. 579 00:31:53,740 --> 00:31:54,859 La muestra es volatilizada 580 00:31:54,859 --> 00:31:55,960 y se lleva a la parte superior 581 00:31:55,960 --> 00:31:57,200 de una columna cromatográfica. 582 00:31:57,460 --> 00:31:59,039 La fase móvil es un gas inerte 583 00:31:59,039 --> 00:32:00,119 porque no quiero que se produzca 584 00:32:00,119 --> 00:32:01,059 ningún tipo de reacción 585 00:32:01,059 --> 00:32:02,720 entre los componentes de la muestra 586 00:32:02,720 --> 00:32:03,680 y la fase móvil. 587 00:32:05,119 --> 00:32:06,579 Bueno, se puede utilizar nitrógeno, 588 00:32:06,700 --> 00:32:08,500 helio, hidrógeno, ¿vale? 589 00:32:09,259 --> 00:32:10,819 Transporta la muestra a través de la columna. 590 00:32:10,980 --> 00:32:11,619 En este caso, 591 00:32:11,900 --> 00:32:15,259 bueno, esto sería un cromatógrafo de gases. 592 00:32:20,319 --> 00:32:22,119 A ver, digamos que esto que está aquí, ¿vale? 593 00:32:22,119 --> 00:32:24,559 Es cromatografía en columna, pero clásica. 594 00:32:24,559 --> 00:32:35,230 Luego hay otra obra que es, digamos, más moderno, más estrella, pero bueno, lo vamos a dejar ahí. 595 00:32:36,230 --> 00:32:39,190 Entonces, en la cromatografía de gases, estos son los equipos. 596 00:32:40,650 --> 00:32:42,950 Tenemos gas líquido y gas sólido. 597 00:32:45,289 --> 00:32:49,710 Gas líquido se basa en la distribución del analito entre una fase móvil gaseosa y una fase líquida 598 00:32:49,710 --> 00:32:52,549 y movilizada sobre la superficie de un sólido inerte. 599 00:32:52,549 --> 00:32:57,630 Y en la gas sólido, la retención de analitos se produce por absorción física. 600 00:32:58,210 --> 00:33:01,210 entre una y otra, pero en cualquier caso 601 00:33:01,210 --> 00:33:03,170 la fase móvil es un gas 602 00:33:03,170 --> 00:33:05,309 y tengo que ser capaz 603 00:33:05,309 --> 00:33:07,269 para que se pueda llevar a cabo, tengo que ser capaz de pasar 604 00:33:07,269 --> 00:33:09,349 la muestra a fase vapor 605 00:33:09,349 --> 00:33:10,309 y está arrastrada 606 00:33:10,309 --> 00:33:13,349 por el gas de la fase móvil 607 00:33:13,349 --> 00:33:15,769 que es nitrógeno, helio, hidrógeno 608 00:33:15,769 --> 00:33:16,829 o mezcla de gases 609 00:33:16,829 --> 00:33:23,279 aquí la fase estacionaria 610 00:33:23,279 --> 00:33:24,140 es un líquido 611 00:33:24,140 --> 00:33:27,200 y aquí es un sólido 612 00:33:27,200 --> 00:33:53,440 Bueno, aquí simplemente son las partes del cromatógrafo, el fuente del gas portador, microjeringa para inyectar la muestra, la columna cromatográfica, que es lo más importante, bueno, todo es importante, pero bueno, aquí es realmente donde se produce la separación de los componentes, el horno, porque necesito que esta columna esté a una temperatura determinada y esté muy controlado, 613 00:33:53,440 --> 00:34:09,519 y luego, hemos dicho que la columna lo que me hace es separar, dice lo que tengo, entonces para saber lo que tengo tengo que tener colocado después de la columna un detector, hay distintos detectores, no vamos a entrar en ellos, 614 00:34:09,519 --> 00:34:20,380 los nombres, ionización de llama, conductividad térmica, bueno hay distintos tipos, hay más detectores que estos que están aquí puestos, pero bueno, lo que tenemos que tener claro es que la cromatorracia de gas es la fase móvil es un gas, 615 00:34:20,380 --> 00:34:38,619 La fase estacionaria puede ser un líquido o un sólido. Tengo que vaporizar la muestra. La columna tiene que estar a una temperatura controlada. Y luego tengo que tener un sistema de texto que me diga qué tengo y cuánto tengo. 616 00:34:38,619 --> 00:35:00,239 Y luego, bueno, un sistema, un ordenador para registrar los datos, ¿vale? Y simplemente os he puesto aquí una foto de lo que son las columnas, ¿vale? Porque no es como la cromatografía de líquidos que es un tubito de vidrio, ¿vale? Estos son como así del tamaño, no voy a decir de un pelo, pero casi, ¿vale? 617 00:35:00,239 --> 00:35:19,039 Y dentro de ese tubito, o un cable, digamos como un cable, ¿vale? Pues dentro de ese tubo de ese cable, que no es un cable en realidad, pero bueno, dentro de ese tubito es donde está la columna, que es lo que nos va a separar, bueno, gracias al gas portador también, hasta la fase móvil, lo que nos va a separar los componentes de la muestra, ¿vale? 618 00:35:19,039 --> 00:35:23,219 Pero bueno, siempre te he puesto la foto para que sepáis lo que es, ¿vale? 619 00:35:23,219 --> 00:35:26,019 Columna, bueno, hay distintos tipos, ¿vale? 620 00:35:27,079 --> 00:35:31,179 En función de la longitud y el grosor de la columna. 621 00:35:31,440 --> 00:35:33,300 Pero vamos, como si fuera un cable enrollado. 622 00:35:33,960 --> 00:35:35,699 O sea, enrollado porque son muy largas, ¿vale? 623 00:35:35,719 --> 00:35:37,460 Porque fijaros, dice columna cromatográfica. 624 00:35:37,860 --> 00:35:40,559 Dependiendo del tipo de columna, las capilares, que son muy finitas, 625 00:35:41,019 --> 00:35:43,820 suelen medir entre 15 y 100 metros, ¿vale? 626 00:35:43,820 --> 00:35:47,920 las llenas que son un poquito más gruesas 627 00:35:47,920 --> 00:35:49,360 son entre 2 y 6 metros 628 00:35:49,360 --> 00:35:51,099 entonces eso está creado 629 00:35:51,099 --> 00:35:51,679 ¿vale? 630 00:35:52,960 --> 00:35:55,039 estas son las partes del cromatograma 631 00:35:55,039 --> 00:35:56,840 del cromatografo 632 00:35:56,840 --> 00:35:58,760 y luego aquí simplemente he puesto 633 00:35:58,760 --> 00:36:00,880 la jeringuilla 634 00:36:00,880 --> 00:36:03,559 porque se usa, bueno, microjeringa 635 00:36:03,559 --> 00:36:05,260 porque añado muy poquita 636 00:36:05,260 --> 00:36:07,460 cantidad de muestra, se llama microjeringa 637 00:36:07,460 --> 00:36:08,780 pero bueno, es como si fuera una jeringuilla 638 00:36:08,780 --> 00:36:10,780 a través de un sexo 639 00:36:10,780 --> 00:36:13,539 la muestra en el cromatograma 640 00:36:13,539 --> 00:36:17,099 Bueno, pues esto es simplemente para que lo vierais, ¿vale? 641 00:36:18,480 --> 00:36:21,860 Y bueno, esto es un cromograma resuelto. 642 00:36:22,039 --> 00:36:24,460 Vamos, es lo que obtenemos, después de haber pasado por el detector, 643 00:36:24,460 --> 00:36:30,539 lo que obtenemos como el resultado de esa separación, ¿vale? 644 00:36:33,019 --> 00:36:35,300 Y pues nada más, esto es todo. 645 00:36:35,840 --> 00:36:37,260 Pues ya hemos terminado, ¿vale?