1
00:00:06,639 --> 00:00:38,219
Vale, pues hoy vamos a empezar el siguiente tema. No sé si tenéis alguna duda del tema

2
00:00:38,219 --> 00:00:52,829
3, del tema anterior, de los ejercicios o alguna duda de la teoría. Vale, pues no hay

3
00:00:52,829 --> 00:01:09,489
dudas. Bueno, pues entonces vamos a empezar el tema este, el 4, del tema 3. Bueno, el

4
00:01:09,489 --> 00:01:17,870
otro día os expliqué la práctica que teníais que hacer en casa, ¿vale? O sea, quedaría

5
00:01:17,870 --> 00:01:31,489
eso y ya estaría. Bueno, pues el tema 4 es la clonación de ácidos nucleicos. Vamos

6
00:01:31,489 --> 00:01:53,379
a ver qué es esto de la clonación. Bueno, pues mirad, hasta 1970, claro, la molécula

7
00:01:53,379 --> 00:01:57,000
de ADN ya vimos que es una macromolécula

8
00:01:57,000 --> 00:02:01,120
que está formada por millones de bases nitrogenadas

9
00:02:01,120 --> 00:02:04,459
entonces con su gran longitud y además

10
00:02:04,459 --> 00:02:08,659
es un poco monótona porque es

11
00:02:08,659 --> 00:02:12,419
adenina, timina, timina, adenina, guanina, citosina

12
00:02:12,419 --> 00:02:17,280
entonces era una molécula que era difícil de

13
00:02:17,280 --> 00:02:21,240
analizar hasta 1970. Sin embargo

14
00:02:21,240 --> 00:02:41,240
Luego a partir de 1970 se descubren las enzimas de restricción, son unas enzimas que van a servir para cortar el ADN y a partir de ese momento pues el ADN se puede estudiar y es una molécula fácil para estudiar.

15
00:02:41,240 --> 00:03:06,659
Con el, actualmente podemos pues separar, cortar regiones de ADN, podemos obtener un fragmento de ADN que hayamos cortado pues obtenerlo en grandes cantidades, podemos saber que nucleótidos, que secuencia de nucleótidos tiene ese ADN o también se puede incluso intercalar,

16
00:03:06,659 --> 00:03:16,490
Nosotros cortamos un fragmento de ADN y podemos ahí intercalar un fragmento de ADN de otro organismo.

17
00:03:16,490 --> 00:03:27,990
A todo este conjunto de técnicas que se pueden utilizar para analizar el ADN se conoce como ingeniería genética.

18
00:03:29,289 --> 00:03:37,889
La ingeniería genética es la tecnología de la manipulación genética de organismos con un propósito determinado.

19
00:03:38,289 --> 00:03:50,280
Bueno, pues aquí tenéis el mapa conceptual. Estos mapas conceptuales ya os digo que están muy bien.

20
00:03:51,319 --> 00:03:56,060
Y esto es lo que vamos a estudiar en este tema.

21
00:03:57,699 --> 00:04:04,259
Vamos a analizar los ácidos nucleicos, vamos a analizar el ADN y el ARN.

22
00:04:04,900 --> 00:04:12,080
Entonces, el ADN vamos a utilizar técnicas de corte, corte del ADN.

23
00:04:12,080 --> 00:04:20,600
Luego lo vamos a poder unir, vamos a poder secuenciar por el método de Sanger o por métodos automáticos.

24
00:04:21,360 --> 00:04:25,699
Secuenciar significa saber el orden de las bases nitrogenadas.

25
00:04:26,680 --> 00:04:32,699
Vamos a ver otra técnica que es la clonación, clonación que es la técnica del ADN recombinante.

26
00:04:32,699 --> 00:04:43,560
Y lo que vamos a hacer aquí va a ser copiar un fragmento de ADN y copiarlo millones de veces.

27
00:04:44,519 --> 00:04:58,519
Y ese fragmento de ADN se copia mediante la introducción en una bacteria y además luego vamos a obtener grandes cantidades de proteínas.

28
00:04:58,839 --> 00:05:01,360
Bueno, esto ya lo veremos.

29
00:05:02,100 --> 00:05:30,300
Podemos también identificar microorganismos, luego veremos la técnica de la PCR, de la reacción en cadena de la polimerasa, que seguro que esta os suena, la PCR, de la PCR, bueno, pues que hay varios tipos, la PCR consiste en aumentar, amplificar un fragmento de ADN y copiarlo millones de veces y todo esto a partir de una mínima cantidad de muestra.

30
00:05:30,300 --> 00:05:42,240
También vamos a ver la hibridación, que hay varios tipos, Nordens, Southern y la técnica in situ, esto también lo vamos a ver.

31
00:05:43,459 --> 00:05:52,800
Y todas estas que están con una sombra de color fucsia rusa, pues estas son aplicables a ARN.

32
00:05:52,800 --> 00:06:04,310
Bueno, pues hoy vamos a ver lo que es el corte de ADN, cómo se corta el ADN y cómo se une este ADN.

33
00:06:07,120 --> 00:06:17,160
Vale, pues ya vimos, bueno, este es el mismo mapa, pero más resumido.

34
00:06:17,160 --> 00:06:41,160
Y bueno, este es otro mapa conceptual, pero bueno, he puesto de otra forma, pero es lo mismo, corte, unión, secuenciación, hibridación, PCR, clonación, lo único que aquí he añadido otra técnica que se llama la técnica CRISPR, que no sé si os suena a la que últimamente se ha hablado, de la técnica CRISPR.

35
00:06:41,160 --> 00:06:50,819
Que está, aunque solamente la mencionan un poquito en los apuntes, pero también vamos a hablar sobre la técnica CRISPR, que está muy de actualidad.

36
00:06:54,509 --> 00:07:10,430
Bueno, pues como os decía antes, hasta los años 70 no se podía prácticamente analizar el ADN porque, claro, por lo que hemos dicho, es una molécula tan grande que era imposible estudiarla.

37
00:07:10,430 --> 00:07:25,250
Y ya con el descubrimiento de las enzimas de restricción que descubrió este científico Paul Berg y a partir de ese momento empieza el análisis del ADN.

38
00:07:28,089 --> 00:07:40,550
Posteriormente estos científicos Cohen, Chan y Boyer crearon un plásmido a partir de secciones de ADN viral y bacteriano que tenía resistencia a antibióticos y lo insertaron en una bacteria.

39
00:07:40,550 --> 00:07:53,189
Y bueno, esta es la tecnología del ADN recombinante. Ahora no os preocupéis si no entendéis esto porque luego lo veremos en los próximos días lo que es la técnica esta del ADN recombinante.

40
00:07:53,189 --> 00:08:00,670
Vale, pues entonces vamos a ver el corte y unión de moléculas de ADN.

41
00:08:02,129 --> 00:08:13,670
Sabemos que los ácidos nucleicos, ya dijimos, están formados por nucleótidos y esos nucleótidos a su vez están formados por un grupo fosfato,

42
00:08:13,670 --> 00:08:32,289
el azúcar, que es la pentosa, y una base nitrogenada. Y que estos nucleótidos están unidos unos a otros mediante enlaces fosfodiéster. Esto es un enlace fosfodiéster, esto es un enlace fosfodiéster.

43
00:08:32,289 --> 00:08:40,669
y por otra parte sabíamos también que la estructura del ADN, la estructura secundaria

44
00:08:40,669 --> 00:08:50,169
era una estructura de doble hélice, una doble hélice, esta sería una cadena, una de las cadenas de ADN

45
00:08:50,169 --> 00:08:57,669
y esta sería la otra cadena de ADN y que en el centro están las bases nitrogenadas

46
00:08:57,669 --> 00:09:02,669
que están formando, están unidas por puentes de hidrógeno.

47
00:09:03,950 --> 00:09:10,049
Si os acordáis, teníamos como bases nitrogenadas adenina, timina, citosina y guanina.

48
00:09:10,850 --> 00:09:15,889
La guanina y la citosina están unidas por tres puentes de hidrógeno

49
00:09:15,889 --> 00:09:21,029
y la adenina y la timina están unidas por dos puentes de hidrógeno.

50
00:09:22,590 --> 00:09:27,490
Entonces, esto que hay aquí en colores son las bases nitrogenadas.

51
00:09:27,669 --> 00:09:34,470
que están en el centro de la doble hélice y están unidas por puentes de hidrógeno.

52
00:09:35,450 --> 00:09:45,029
Bueno, pues si recordáis, para desnaturalizar el ADN, lo que hacíamos era romper estos puentes de hidrógeno.

53
00:09:45,929 --> 00:09:52,889
Pero ahora lo que queremos es fragmentar el ADN, o sea, fragmentar esas cadenas.

54
00:09:52,889 --> 00:10:14,049
Por lo tanto, para fragmentar las cadenas de ADN, lo que tenemos que hacer es romper estos enlaces fosfodiéster, que estos enlaces fosfodiéster ya son enlaces covalentes y van a necesitar más energía para romper estos enlaces de aquí, fosfodiéster.

55
00:10:14,049 --> 00:10:39,419
Vale, pues, bueno, pues esto es lo que os comentaba, este es el enlace fósforo y éster, o sea, tenemos el fósforo y luego tenemos dos grupos éster, el oxígeno unido a dos átomos y aquí tenemos la pentosa y por aquí las bases nitrogenadas.

56
00:10:39,419 --> 00:10:45,039
Acordaros que en el ARN tenemos uracilo en vez de timina

57
00:10:45,039 --> 00:10:55,600
Bueno, pues, ¿cómo hacemos para romper el ADN?

58
00:10:56,159 --> 00:11:02,279
Claro, el ADN son cadenas de nucleótidos

59
00:11:02,279 --> 00:11:05,620
Pero ¿cómo hacemos para que se nos rompa por aquí?

60
00:11:06,840 --> 00:11:10,820
O que se nos rompa por aquí el ADN y también por aquí

61
00:11:10,820 --> 00:11:15,840
y que no se nos rompa por otra parte, por otra zona de la cadena.

62
00:11:15,919 --> 00:11:21,100
La cadena es tan larga y los enlaces son iguales, son enlaces fosfodiéster

63
00:11:21,100 --> 00:11:25,320
y las bases nitrogenadas también son las mismas.

64
00:11:26,080 --> 00:11:30,580
Entonces, ¿cómo hacemos para que el enlace se nos rompa donde nosotros queremos?

65
00:11:33,580 --> 00:11:42,279
Pues al fragmento de ADN que a nosotros nos interesa se le llama Diana.

66
00:11:42,700 --> 00:12:03,240
Y para hacer un corte en una zona específica, en un fragmento específico, lo que necesitamos son unas enzimas que se llaman endonucleasas de restricción o enzimas de restricción, que se conocen también como tijeras moleculares.

67
00:12:04,500 --> 00:12:12,360
Bueno, pues ¿cómo se supo que estas endonucleasas son las que cortan el ADN?

68
00:12:12,700 --> 00:12:28,399
Bueno, antes de eso, estas enzimas que cortan los enlaces fosfodiéster en secuencias específicas y a estas secuencias específicas se les llama sitios de restricción.

69
00:12:29,779 --> 00:12:40,519
Tenemos endonucleasas de restricción o enzimas de restricción y al sitio donde corta se le denomina sitio de restricción.

70
00:12:40,519 --> 00:13:05,789
Bueno, aquí os he puesto un ejemplo, este sería una doble hélice de ADN, aquí tenemos las bases nitrogenadas, tenemos guanina, adenina, adenina, timina, timina, citosina y esto de aquí, ¿veis?

71
00:13:05,789 --> 00:13:14,929
marrón clarito, sería la enzima. Pues esta enzima va a cortar el ADN, va a cortar por aquí una cadena

72
00:13:14,929 --> 00:13:30,370
y la otra cadena y va a romper un enlace fosfodiéster. Bueno, pues ¿cómo se descubrió que existían

73
00:13:30,370 --> 00:13:36,610
estas enzimas de restricción y que eran las que cortaban el ADN? Pues esto se descubrió a partir

74
00:13:36,610 --> 00:13:47,049
de cepas de bacterias que se vio que algunas fijaros que eran 1950 se vio que algunas bacterias

75
00:13:47,049 --> 00:13:59,429
eran inmunes a virus no se infectaban por virus pues se investigó acerca de esto y se observó

76
00:13:59,429 --> 00:14:08,690
Fijaros, que pasaron 20 años para entender el mecanismo de cómo estas bacterias se defendían de los virus.

77
00:14:10,210 --> 00:14:18,690
Y se le recibieron el premio Nobel, estos tres científicos, Arber, Smith y Nathans, recibieron el premio Nobel en 1978.

78
00:14:19,610 --> 00:14:43,590
Bueno, pues el caso es que hay algunas bacterias que cuando les infecta un virus, los virus tienen también ADN o ARN, pues hay algunas bacterias que cuando les infecta un virus lo que hacen es, con una enzima que tienen, lo que hacen es cortar ese ADN que les está infectando, el ADN que aquí llamamos intruso.

79
00:14:43,590 --> 00:15:00,509
Entonces el virus intenta introducir su ADN en la bacteria, pero la bacteria tiene unas enzimas que lo que hacen es cortar ese ADN que está metiendo el virus.

80
00:15:00,509 --> 00:15:07,850
Ahora que, claro, el ADN que tiene el virus y el ADN de la bacteria es igual

81
00:15:07,850 --> 00:15:13,470
Está formado por enlaces fornucleótidos, enlaces fosfodiéster, las bases nitrogenadas

82
00:15:13,470 --> 00:15:19,629
¿Cómo sabe la bacteria que tiene que cortar el ADN del virus?

83
00:15:19,629 --> 00:15:25,309
¿Pero cómo hace para que esa enzima no corte su propio ADN?

84
00:15:25,309 --> 00:15:43,750
Por lo que hacen esas bacterias es metilar los nucleótidos de adenina, metilar significa que ponen un grupo CH3, se une un grupo CH3 al nucleótido de adenina

85
00:15:43,750 --> 00:16:00,789
Y así de esta forma la enzima de restricción no va a poder cortar este enlace fosfodiéster en la que está la adenina metilada y en cambio sí que va a poder cortar estos enlaces fosfodiéster, estos de aquí.

86
00:16:00,789 --> 00:16:18,460
Bueno, entonces, las bacterias tienen un mecanismo de defensa que hacen que las endonucleasas degraden el material genético extraño que entra en la célula.

87
00:16:19,559 --> 00:16:27,799
Las bacterias tienen la capacidad de metilar su ADN, lo cual sirve para distinguir entre el ADN extraño y el ADN propio.

88
00:16:27,799 --> 00:16:43,820
Las enzimas de restricción no pueden cortar el ADN metilado y de este modo solo afectan al ADN extraño y no al ADN de la bacteria. Esto se llama la metilación. Un grupo metilo es un CH3.

89
00:16:48,559 --> 00:16:57,980
Bueno, pues dentro de estas enzimas de restricción tenemos dos tipos, bueno tres mejor dicho.

90
00:16:58,840 --> 00:17:00,980
Tenemos tipo 1, tipo 2 y tipo 3.

91
00:17:01,980 --> 00:17:13,839
Las enzimas de restricción tipo 1 y tipo 3 lo que pueden hacer es, o sea son enzimas de restricción porque cortan, pueden cortar el ADN

92
00:17:13,839 --> 00:17:32,079
Y además son enzimas también de modificación porque metilan el ADN. Metilar es poner un CH3. Ahora, la diferencia entre las de tipo 1 y las de tipo 3 es la siguiente.

93
00:17:32,079 --> 00:17:55,319
Las de tipo 1 van a cortar el ADN, pero lo cortan al azar. Lo cortan a mil pares de bases o más de la secuencia de reconocimiento. Mil pares de bases. PB es pares de bases. Un par de bases sería adenina timina, citosina guanina.

94
00:17:55,319 --> 00:18:12,799
Esos son pares de bases. Pues fijaros, estas cortan pero a 1.000 pares de bases. Y las de tipo 3 cortan a entre 5 y 8 pares de bases antes o después de la secuencia que reconocen.

95
00:18:12,799 --> 00:18:27,259
y estas, las dos, las de tipo 1 y las de tipo 3, necesitan energía para moverse a través de la molécula hasta llegar al sitio donde tienen que cortar.

96
00:18:31,519 --> 00:18:33,720
Entonces estas serían tipo 1 y tipo 3.

97
00:18:35,059 --> 00:18:37,660
Y por otro lado tenemos las de tipo 2.

98
00:18:38,859 --> 00:18:43,039
Estas de tipo 2 son las que realmente se utilizan en ingeniería genética.

99
00:18:43,039 --> 00:18:58,039
Estas son más sencillas y solamente tienen actividad de restricción, es decir, que solamente cortan el ADN y además cortan justo en la secuencia que reconocen.

100
00:18:58,039 --> 00:19:15,440
Entonces, estas cortan en la zona, en el sitio de restricción que nos interesa y en cambio fijaros estas que la tipo 1 corta a mil pares de bases y está entre 5 y 8 pares de bases más lejos de la secuencia de reconocimiento.

101
00:19:15,440 --> 00:19:32,440
Y ahora, estas no requieren energía, estas de aquí sí que necesitan energía, la 1 y la 3, pero las de tipo 2 no necesitan energía para cortar y lo que sí que necesitan es cationes magnesio.

102
00:19:33,819 --> 00:19:37,440
Estos cationes magnesio se utilizan como cofactores.

103
00:19:37,440 --> 00:19:51,440
Si os acordáis cuando vimos las enzimas, os acordáis que las enzimas son proteínas y había algunas enzimas que necesitan de ayuda para poder reaccionar.

104
00:19:52,900 --> 00:20:01,279
Pues estas de tipo 2 necesitan cationes magnesio para que puedan actuar frente al sustrato.

105
00:20:02,579 --> 00:20:06,279
Y a esto se les llama el cofactor, necesitan de un cofactor.

106
00:20:07,440 --> 00:20:12,859
Y estos cationes magnesio se suelen obtener de cloruro de magnesio.

107
00:20:15,089 --> 00:20:17,569
Bueno, pues estas son las de tipo 2.

108
00:20:20,480 --> 00:20:28,859
Ahora, estas endonucleasas de restricción se conocen más de mil, o sea, más de un millar.

109
00:20:30,119 --> 00:20:36,400
Y algunas de ellas reconocen la misma secuencia, la misma secuencia diana.

110
00:20:36,400 --> 00:20:40,099
Pero bueno, hay más de un millar.

111
00:20:40,700 --> 00:20:49,279
Son estructuras sencillas y por lo tanto se pueden aislar fácilmente y se pueden conservar y manejar fácilmente.

112
00:20:49,279 --> 00:20:59,440
Y estas enzimas se aíslan de bacterias, de organismos prokaryotas, generalmente son bacterias.

113
00:21:04,609 --> 00:21:12,940
Ahora, ¿cómo trabajan estas enzimas de restricción?

114
00:21:12,940 --> 00:21:42,440
Bueno, pues estas endonucleasas de restricción pueden reconocer hasta más de 100 secuencias de ADN y las secuencias de ADN que distinguen son secuencias palindrómicas, secuencias palindrómicas que se leen igual de izquierda a derecha en una cadena como de derecha a izquierda en la otra cadena.

115
00:21:44,640 --> 00:21:56,180
Aquí tenemos, por ejemplo, la cadena, la cinco prima, tres prima, que tiene adenina, timina, citosina, citosina, timina, adenina, guanina, guanina, adenina, timina.

116
00:21:57,079 --> 00:22:08,299
Pues se lee igual, fijaros, aquí hay adenina, pues aquí también tenemos adenina, timina, timina, citosina, citosina, citosina, citosina,

117
00:22:08,839 --> 00:22:17,420
T, T, A, A, G, G, y aquí también una G, una A, una A, y una T, y una T.

118
00:22:17,420 --> 00:22:32,250
Se leen igual en una de las cadenas de 5' a 3' y en el otro sentido, la otra cadena, se lee también igual en la otra dirección.

119
00:22:36,220 --> 00:22:38,619
Bueno, pues estas son secuencias palindrómicas.

120
00:22:41,170 --> 00:22:45,630
Por ejemplo, aquí os he puesto esta enzima que se llama ECO R1.

121
00:22:46,710 --> 00:22:50,309
Reconoce esta secuencia, la GAATTC.

122
00:22:50,309 --> 00:23:13,690
¿Veis? Y aquí en la otra cadena tenemos G, A, A, T, T, C. Pues esta enzima reconoce esta secuencia, va pasando a través del ADN hasta que ve esta secuencia que es palindrómica y cuando llega a esta secuencia, esta endonucleasa rompe las dos cadenas, rompe los enlaces fósforo y éste.

123
00:23:13,690 --> 00:23:38,869
Bueno, aquí os he puesto este dibujo que viene ahí en el documento. Esta sería la enzima, esto de aquí morado. Lo que está en rojo es el ADN. La enzima se une débilmente al ADN, se desplaza hasta que encuentra la secuencia afín.

124
00:23:38,869 --> 00:23:47,710
Ahora el ADN se pliega y ya la enzima actúa y el ADN se extiende, se rompe.

125
00:23:48,450 --> 00:23:53,730
Y ya la enzima se despega y puede actuar frente a otra cadena de ADN.

126
00:23:55,349 --> 00:24:03,789
Si os acordáis de las enzimas, esto era una característica importante de las enzimas,

127
00:24:03,789 --> 00:24:11,970
que actúan frente a un sustrato y luego quedan libres para actuar frente al siguiente sustrato.

128
00:24:17,150 --> 00:24:23,069
Bueno, aquí os he puesto algunas enzimas. Esta sería la de Escherichia coli, que es

129
00:24:23,069 --> 00:24:29,990
la que hemos visto, la ECO-R1, y que corta por aquí entre la guanina y la adenina, en

130
00:24:29,990 --> 00:24:37,589
una de las cadenas y en la otra igual, entre adenina y guanina. Esta de aquí, Bacillus

131
00:24:37,589 --> 00:24:47,769
amilolifuefaciens, que es la BAMH1, pues esta corta aquí entre las dos guaninas y aquí

132
00:24:47,769 --> 00:24:53,329
lo mismo, entre las dos guaninas. Y si os fijáis, esta también es una secuencia palindrómica

133
00:24:53,329 --> 00:25:06,710
G, G, A, T, C, C, G, G, A, T, C, C. Esta otra, Aemophilus influenzae, que es la GINDE3,

134
00:25:07,210 --> 00:25:16,329
pues lo mismo, corta en esta secuencia, que es la A, A, G, C, T, T, y corta entre las

135
00:25:16,329 --> 00:25:23,509
dos adeninas por aquí y corta por aquí. Y a esto se le denomina sitio de reconocimiento,

136
00:25:23,650 --> 00:25:34,710
es el sitio donde va la enzima a cortar. Bueno, aquí os he puesto esto, esta tabla, pero

137
00:25:34,710 --> 00:25:40,569
no es parecida a la anterior, pero era para que vierais también alguna otra. Entonces,

138
00:25:40,569 --> 00:25:48,329
bueno, pues aquí son estas enzimas, si veis son todas de origen bacteriano, pues esta

139
00:25:48,329 --> 00:25:55,910
la que hemos visto ya, la Ascherichia coli, esta, por ejemplo, la TAC-1, la Cermus aquaticus.

140
00:25:56,950 --> 00:26:04,369
¿Veis? Cortaría, por ejemplo, esta secuencia TCGA, que como es palindrómica, aquí sería

141
00:26:04,369 --> 00:26:15,029
TCGA. Entonces, eso, cada enzima corta una secuencia determinada. Por ejemplo, esta de

142
00:26:15,029 --> 00:26:28,160
aquí, pues corta esta secuencia GGCC, GGCC. Ahora, cuando la enzima corta, claro, corta

143
00:26:28,160 --> 00:26:35,900
dos enlaces fosfodiéster, uno en cada cadena. Por lo tanto, nos van a quedar dos extremos

144
00:26:35,900 --> 00:26:43,400
de ADN. Bueno, pues estas enzimas, al cortar el ADN, se van a poder producir dos tipos

145
00:26:43,400 --> 00:26:55,269
de cortes. Tenemos cortes que se pueden obtener extremos romos y cortes que pueden dar lugar

146
00:26:55,269 --> 00:27:01,349
a extremos cohesivos. ¿Qué diferencia hay entre una y otra? Pues mirad, los extremos

147
00:27:01,349 --> 00:27:12,329
romos se producen cuando el corte es en vertical. Esta sería la región, el fragmento palindrómico

148
00:27:12,329 --> 00:27:21,470
C, C, C, G, G, G, C, C, C, G, G, G y la enzima corta justo entre la citosina y la guanina

149
00:27:21,470 --> 00:27:28,130
en una cadena, entre guanina y citosina, entre la otra cadena. Por lo tanto, el corte

150
00:27:28,130 --> 00:27:36,670
es vertical y no nos van a quedar bases desapareadas. En cambio, cuando se obtienen extremos cohesivos

151
00:27:36,670 --> 00:27:42,910
El corte no es vertical, aquí hay un corte y el otro corte está en este otro lado.

152
00:27:43,970 --> 00:27:49,589
Aquí en este caso se corta entre la guanina y la adenina, entre guanina y adenina.

153
00:27:51,109 --> 00:27:55,410
Y lo que ocurre aquí es que van a quedar bases desapareadas.

154
00:27:56,730 --> 00:27:59,730
Vamos a ver qué significa esto de bases desapareadas.

155
00:28:00,529 --> 00:28:02,470
Mira, yo creo que aquí se ve mejor.

156
00:28:02,470 --> 00:28:11,230
Aquí, por ejemplo, tendríamos la enzima que es la ALU1 y esta enzima corta por aquí, entre la guanina y la citosina.

157
00:28:11,990 --> 00:28:27,789
Entonces se nos van a quedar las bases, o sea, no van a quedar bases desapareadas porque la guanina sigue estando apareada, la citosina y la adenina latimina, la citosina, la guanina, latimina con la adenina.

158
00:28:27,789 --> 00:28:31,750
Y estos extremos se llaman extremos romos.

159
00:28:33,150 --> 00:28:46,930
Ahora, cuando la enzima no corta en vertical, pues nos van a quedar extremos que se llaman extremos cohesivos o también se llaman extremos pegajosos.

160
00:28:48,549 --> 00:28:53,069
En este caso ha cortado por aquí una cadena y por aquí la otra cadena.

161
00:28:53,069 --> 00:29:13,849
Entonces nos han quedado la adenina, adenina, timina, timina, estas cuatro bases nos quedan desapareadas, desapareadas porque no tienen aquí ninguna base a la que puedan unirse mediante puentes de hidrógeno y en la otra cadena nos quedan la timina, timina, adenina, adenina.

162
00:29:13,849 --> 00:29:29,849
Lo mismo, aquí están desapareadas porque no tienen aquí otra base nitrogenada con la que formar puentes de hidrógeno. Pues a esto se le llaman extremos cohesivos. Extremos romos y extremos cohesivos.

163
00:29:29,849 --> 00:29:44,660
Aquí he puesto otro ejemplo, bueno, que es parecido, aquí también es la ALU1, pues eso que corta dando lugar a extremos romos, no quedan bases desapareadas.

164
00:29:44,660 --> 00:30:00,500
La NLA3, pues esta corta entre la guanina y la timina y entre la citosina y la guanina por aquí.

165
00:30:01,480 --> 00:30:16,759
O sea que nos van a quedar extremos cohesivos, nos van a quedar estas cuatro bases desapareadas y aquí estas cuatro bases nos quedan también desapareadas.

166
00:30:16,759 --> 00:30:24,839
Y esta de aquí, la AU3A1, pues también nos da extremos cohesivos

167
00:30:24,839 --> 00:30:28,519
Porque corta por aquí entre la citosina y la guanina

168
00:30:28,519 --> 00:30:32,220
Y por aquí corta entre la adenina y la guanina

169
00:30:32,220 --> 00:30:36,920
Pues nos van a quedar estas bases, la citosina, la timina, la adenina, la guanina

170
00:30:36,920 --> 00:30:38,500
Nos quedan desapareadas

171
00:30:38,500 --> 00:30:43,420
Y en la otra cadena, la guanina, la adenina, la timina y la citosina

172
00:30:43,420 --> 00:30:45,359
Nos quedan también desapareadas

173
00:30:45,359 --> 00:31:03,519
Bueno, aquí en el documento tenéis esta evaluación, pero bueno, yo creo que es fácil.

174
00:31:03,519 --> 00:31:11,519
Aquí lo único que nos dicen es que tenemos que relacionar las enzimas con el sitio de corte.

175
00:31:11,519 --> 00:31:31,859
Entonces, bueno, esto es fácil, ya cuando os veáis la teoría lo hacéis. Aquí lo que tenemos es, pues, si cortan a una distancia de mil pares de bases, a una distancia de ocho o diez pares de bases o dentro de la secuencia de reconocimiento.

176
00:31:31,859 --> 00:32:01,880
Vale, pues ya hemos visto que estas enzimas, estas endonucleasas de restricción se aíslan de bacterias, de organismos prokaryotas, por lo que para su nomenclatura se nombran a partir de las bacterias de las que son extraídas.

177
00:32:01,880 --> 00:32:19,339
Ya hemos visto un poco los nombres. Entonces, para el nombre, pues la primera letra se corresponde con el género de la bacteria. Por ejemplo, la Eco R1 sería de la Escherichia, esa sería la E.

178
00:32:19,339 --> 00:32:26,440
Las dos siguientes letras, la C y la O, pues van a provenir de la especie de la bacteria

179
00:32:26,440 --> 00:32:30,480
Aquí sería coli, entonces es E, C, O

180
00:32:30,480 --> 00:32:36,339
Y luego la siguiente letra proviene de la cepa de la bacteria

181
00:32:36,339 --> 00:32:40,380
Que en este caso es la RY13

182
00:32:40,380 --> 00:32:45,319
Y la última letra, bueno, sería más bien número

183
00:32:45,319 --> 00:32:53,160
sería el orden de identificación de la enzima en la bacteria.

184
00:32:53,160 --> 00:32:59,339
O sea, esta es la quinta endonucleasa que se ha aislado de esta especie de la Escherichia coli.

185
00:33:00,559 --> 00:33:08,640
Entonces, la E, género de la bacteria, especie de la bacteria, cepa y orden de identificación.

186
00:33:08,640 --> 00:33:29,329
Bueno, pues para trabajar con enzimas de restricción hay una serie de factores que son importantes que pueden afectar a la actividad de la enzima.

187
00:33:29,329 --> 00:34:00,220
Bueno, pues estos factores son, por un lado es importante la pureza del ADN, que estemos trabajando con un ADN puro, para eso pues tiene que ser un ADN que no tenga contaminantes, que no tenga por ejemplo proteínas, fenol, cloroformo, etanol, EDTA, SDS, que no tenga sales, porque todos estos contaminantes van a inhibir a la endonucleasa.

188
00:34:00,640 --> 00:34:17,360
Por otro lado, importante también, temperatura y pH. ¿Por qué? Porque la temperatura y el pH, hemos visto, las enzimas son proteínas.

189
00:34:17,360 --> 00:34:29,400
Por lo tanto, si aumentamos mucho o disminuimos mucho la temperatura o se cambia el pH, pues eso va a afectar a la estabilidad de las enzimas y a su actividad,

190
00:34:29,400 --> 00:34:59,199
Porque se pueden desnaturalizar. Acordaros de la desnaturalización de las proteínas. Por otro lado, también, si tenemos adenasas, estas enzimas degradan el ADN. Y si además tenemos, sobre todo en presencia de cationes de magnesio, ¿qué más factores pueden afectar a estas enzimas?

191
00:34:59,199 --> 00:35:08,159
al mecanismo, a la actividad de las enzimas, pues también puede afectar los grados de

192
00:35:08,159 --> 00:35:16,059
metilación, que algunas enzimas son inhibidas por metilación. Por otra parte, también

193
00:35:16,059 --> 00:35:23,219
puede ser el tipo de molécula de ADN. Si, por ejemplo, el ADN no tiene la secuencia

194
00:35:23,219 --> 00:35:32,940
que es reconocida por la enzima y esta secuencia que no sea accesible, si el ADN está muy

195
00:35:32,940 --> 00:35:39,639
enrollado, pues la enzima no puede acceder al sitio de restricción, no va a poder actuar.

196
00:35:41,360 --> 00:35:49,920
Y también vamos a necesitar un buffer, trabajar con una disolución tampón adecuada, porque

197
00:35:49,920 --> 00:35:56,019
que esto es lo que va a proveer el ambiente para que la enzima trabaje en condiciones óptimas.

198
00:35:56,440 --> 00:36:04,469
Bueno, pues estos serían los factores importantes que pueden afectar a la actividad,

199
00:36:04,750 --> 00:36:10,610
que son la pureza, temperatura y pH, las adenasas, los grados de metilación,

200
00:36:11,510 --> 00:36:17,230
el tipo de molécula de ADN y necesitamos también de un buffer,

201
00:36:17,230 --> 00:36:36,889
una disolución tampón adecuada para que el ph no varía demasiado vale bueno pues hemos cortado los

202
00:36:36,889 --> 00:36:48,329
fragmentos de adn pero quizá que querramos también unir esos fragmentos hay veces que en alguna de

203
00:36:48,329 --> 00:36:55,309
las técnicas lo que se hace es unir dos fragmentos de adn pero son fragmentos de adn que provienen

204
00:36:55,309 --> 00:36:57,210
de organismos diferentes

205
00:36:57,210 --> 00:37:00,949
claro, ahora hemos roto

206
00:37:00,949 --> 00:37:03,750
para cortar el ADN hemos roto

207
00:37:03,750 --> 00:37:06,590
enlaces fosfodiéster, pues ahora

208
00:37:06,590 --> 00:37:09,949
para formar otra vez, para unir esos fragmentos

209
00:37:09,949 --> 00:37:12,590
vamos a necesitar también que se formen

210
00:37:12,590 --> 00:37:14,150
enlaces fosfodiéster

211
00:37:14,150 --> 00:37:19,989
y por lo tanto para unir estos fragmentos

212
00:37:19,989 --> 00:37:23,010
lo que vamos a necesitar son las otras

213
00:37:23,010 --> 00:37:25,849
enzimas que se llaman ADN ligasas

214
00:37:25,849 --> 00:37:33,750
Y para crear estos nuevos enlaces se va a necesitar energía o otro cofactor.

215
00:37:37,000 --> 00:37:50,079
Bueno, pues claro, como hemos visto que teníamos dos tipos de extremos, los extremos romos y los extremos cohesivos, pues ahora la unión también va a ser diferente.

216
00:37:50,079 --> 00:38:07,000
Si os acordáis, antes hemos dicho extremos cohesivos o pegajosos. Esto ya nos está indicando que va a ser fácil unir esos extremos. Y en cambio los extremos romos van a ser más difícil que se unan.

217
00:38:07,000 --> 00:38:29,929
Bueno, pues por un lado, para unir los extremos cohesivos a partir de fragmentos distintos de ADN, importante, estos fragmentos de ADN tienen que haber sido cortados con la misma enzima de restricción, ¿vale?

218
00:38:29,929 --> 00:38:44,869
Porque, claro, nosotros cortamos, por ejemplo, la de EcoR1, pues corta esta secuencia.

219
00:38:47,130 --> 00:38:55,670
Por lo tanto, cortaríamos un ADN con esta enzima, la Escherichia coli,

220
00:38:55,670 --> 00:39:08,750
Y el otro ADN de otro organismo diferente tendremos que cortarlo también con esta misma enzima para que luego nos queden los extremos que se puedan después unir fácilmente.

221
00:39:08,750 --> 00:39:32,409
Porque si cortáramos un ADN con esta enzima nos quedarían bases desapareadas, pues adenina, AATT. Imaginaos que el otro ADN lo cortamos con esta enzima, pues nos van a quedar bases desapareadas, nos van a quedar GATCC y eso no va a ser posible que se unan.

222
00:39:32,409 --> 00:39:49,409
Por lo tanto, si queremos unir dos tipos de ADN provenientes de organismos diferentes, vamos a necesitar que hayan sido cortados con la misma enzima de restricción.

223
00:39:56,989 --> 00:40:03,670
Esto sería para los dos tipos de extremos, cohesivos y romos.

224
00:40:03,670 --> 00:40:10,429
Ahora ya hemos dicho que estos van a ser colas que se llaman extremos pegajosos

225
00:40:10,429 --> 00:40:19,809
Porque estos extremos se van a unir por, lo primero que van a hacer es unirse por puentes de hidrógeno

226
00:40:19,809 --> 00:40:25,269
Y posteriormente una vez que tengamos las bases ya apareadas

227
00:40:25,269 --> 00:40:33,570
Posteriormente lo que vamos a necesitar es que se unan estos fragmentos mediante la formación de un enlace fosfodiéster

228
00:40:33,570 --> 00:40:36,130
que lo va a formar la ADN ligasa.

229
00:40:37,449 --> 00:40:39,369
Aquí en este dibujo se ve mejor, mirad.

230
00:40:40,190 --> 00:40:46,050
Aquí tenemos un ADN y otro ADN cortados con la enzima ECO-R1.

231
00:40:47,090 --> 00:40:52,170
Nos han quedado aquí bases desapareadas, timina-timina, adenina-banina.

232
00:40:52,949 --> 00:40:58,349
Y en este otro ADN nos han quedado también las mismas, timina-timina, adenina-adenina.

233
00:40:58,349 --> 00:41:05,889
Por lo tanto, se nos van a formar puentes de hidrógeno entre esta timina y esta adenina.

234
00:41:06,630 --> 00:41:10,170
Timina, adenina, adenina, timina, adenina, timina.

235
00:41:10,610 --> 00:41:14,389
Se nos van a formar entre cada una de ellas dos puentes de hidrógeno.

236
00:41:16,730 --> 00:41:21,789
Ahora ya tenemos las bases apareadas, pero ahora necesitamos unir estos nucleótidos.

237
00:41:22,849 --> 00:41:25,969
La guanina con la adenina y aquí la adenina con la guanina.

238
00:41:25,969 --> 00:41:31,670
Pues para unir estos nucleótidos lo que utilizamos es una ADN ligasa.

239
00:41:33,070 --> 00:41:38,550
¿Veis que aquí ya están unidas la guanina con la adenina y la adenina con la guanina?

240
00:41:39,590 --> 00:41:47,190
Entonces estos extremos son los extremos cohesivos, estos son cohesivos o pegajosos, estos son los que es fácil unirlos.

241
00:41:47,190 --> 00:41:52,449
Y ahora, para los extremos romos, pues ya es más complicado

242
00:41:52,449 --> 00:41:57,829
Porque para los extremos romos, claro, no tenemos aquí bases desapareadas

243
00:41:57,829 --> 00:41:59,670
No hay ninguna base desapareada

244
00:41:59,670 --> 00:42:05,849
Entonces, para los extremos romos, lo primero que tenemos que hacer es modificarlos

245
00:42:05,849 --> 00:42:10,929
Y esto se hace con una enzima, que es la enzima DTT

246
00:42:10,929 --> 00:42:16,550
Es la enzima de soxinucleotidil transferasa terminal

247
00:42:16,550 --> 00:42:21,070
Bueno, pues con esta enzima lo que va a hacer va a ser

248
00:42:21,070 --> 00:42:24,309
En una de las cadenas de ADN

249
00:42:24,309 --> 00:42:28,710
Pues va a añadir una cola de poli de A

250
00:42:28,710 --> 00:42:32,190
O sea, una cola de nucleótidos de soxiadenilato

251
00:42:32,190 --> 00:42:37,210
Va a añadir adeninas, bases nitrogenadas que van a tener adenina

252
00:42:37,210 --> 00:42:41,670
Y en la otra cadena va a añadir una cola de poli de T

253
00:42:41,670 --> 00:42:45,010
O sea, una cola de desoxitimidato

254
00:42:45,010 --> 00:42:53,369
Va a añadir timinas, nucleótidos que van a contener timina y en la otra nucleótidos que tienen adenina

255
00:42:53,369 --> 00:42:57,969
Por lo tanto se van a formar dos colas que sí que ahora van a ser complementarias

256
00:42:57,969 --> 00:43:02,730
Y se van a unir estas colas por puentes de hidrógeno

257
00:43:02,730 --> 00:43:15,610
Por lo que al final, con la ADN ligasa, estas bases se van a unir, se van a formar enlaces fosfodiéster.

258
00:43:17,070 --> 00:43:18,389
Bueno, aquí lo tenemos.

259
00:43:19,289 --> 00:43:25,570
Este sería un corte que se ha hecho con esta enzima, con la SMA1.

260
00:43:26,690 --> 00:43:30,070
Y este es el corte en vertical que hemos dicho antes.

261
00:43:30,070 --> 00:43:33,090
por lo tanto no nos quedan bases desapareadas

262
00:43:33,090 --> 00:43:37,369
y lo que tenemos que hacer es añadir la enzima, la DTT

263
00:43:37,369 --> 00:43:45,210
y esa enzima DTT va a añadir timinas, o sea nucleótidos que tienen timina

264
00:43:45,210 --> 00:43:51,989
en una de las cadenas y en la otra de las cadenas añade nucleótidos que tienen adenina.

265
00:43:51,989 --> 00:44:14,190
Avenina, avenina, avenina. El siguiente paso, claro, estas dos bases nitrogenadas son complementarias, por lo tanto se van a unir, se van a formar puentes de hidrógeno y lo último que tiene que pasar es que va a actuar la ADN ligasa.

266
00:44:14,190 --> 00:44:34,590
Y la ADN ligasa lo que va a hacer va a ser unir estos enlaces formando aquí enlaces fosfodiéster. Va a unir estas dos bases nitrogenadas y va a formar enlaces fosfodiéster. Va a unir la citosina y la timina y en el otro lado la citosina y la adenina.

267
00:44:34,590 --> 00:44:47,170
Bueno, aquí teníais una autoevaluación. Aquí dice, completa el siguiente párrafo.

268
00:44:47,289 --> 00:45:03,409
Las enzimas que catalizan la reacción de unión de dos fragmentos de ADN se denominan, son las responsables de formar nuevos enlaces en una reacción que utiliza u otro cofactor similar.

269
00:45:03,409 --> 00:45:09,469
La unión de extremos requiere una modificación inicial del sitio de unión.

270
00:45:10,170 --> 00:45:16,889
La enzima DTT puede emplearse para ello ya que facilita la creación de nucleótidos.

271
00:45:17,550 --> 00:45:22,989
Bueno, pues os dejo un minutillo para pensar esto y ahora lo corregimos.

272
00:46:05,320 --> 00:46:09,420
Vale, pues vamos a corregirlo.

273
00:46:09,420 --> 00:46:17,719
Las enzimas que catalizan la reacción de unión de dos fragmentos de ADN se denominan ADN ligasas.

274
00:46:18,320 --> 00:46:21,960
Este nombre es fácil, ligasas de unión.

275
00:46:23,380 --> 00:46:27,059
Son las responsables de formar nuevos enlaces fosfodiéster.

276
00:46:27,280 --> 00:46:32,500
Acordaros, los enlaces fosfodiéster están uniendo los nucleótidos.

277
00:46:32,500 --> 00:46:42,019
en una reacción que utiliza ATP, bueno, que utiliza, podemos decir, energía u otro factor similar.

278
00:46:42,820 --> 00:46:50,280
La unión de extremos romos requiere una modificación inicial del sitio de unión.

279
00:46:51,460 --> 00:46:58,019
La enzima DTT puede emplearse para ello ya que facilita la creación de colas de nucleótidos,

280
00:46:59,579 --> 00:47:02,300
que puede ser una cola, como hemos visto, de timina.

281
00:47:02,500 --> 00:47:11,840
Y la otra de adeninas, nucleótidos con adeninas. Y así se van a formar enlaces por puentes de hidrógeno.

282
00:47:14,250 --> 00:47:20,829
Y luego teníamos por aquí otra auto-evaluación. A ver, esto, bueno, reflexiona.

283
00:47:21,789 --> 00:47:29,469
Que busca en internet con bibliografía de qué especie bacteriana se ha aislado la enzima de restricción SMA1.

284
00:47:29,469 --> 00:47:32,349
vale, bueno, pues esta ya

285
00:47:32,349 --> 00:47:34,070
está aquí

286
00:47:34,070 --> 00:47:36,369
la solución, esta es de la especie

287
00:47:36,369 --> 00:47:38,429
bacteriana

288
00:47:38,429 --> 00:47:39,389
esta es Serratia

289
00:47:39,389 --> 00:47:41,210
Marcenscens

290
00:47:41,210 --> 00:47:45,369
y luego nos dice, pues bueno

291
00:47:45,369 --> 00:47:48,730
que buscad otra como la AE3

292
00:47:48,730 --> 00:47:49,469
estas

293
00:47:49,469 --> 00:47:52,650
y bueno, estas

294
00:47:52,650 --> 00:47:56,510
estas yo creo que estaban aquí

295
00:47:56,510 --> 00:48:03,920
aquí

296
00:48:03,920 --> 00:48:18,079
Aquí está la BAMH1, proviene de esta bacteria, de la Bacillus amylolycoefaciens, y esta proviene de la Haemophilus influenzae.

297
00:48:18,079 --> 00:48:40,000
Y bueno, nos faltarían dos, que serían aquí, esta la PV2, que a lo mejor vamos a ver si la tenemos en esta tabla,

298
00:48:40,000 --> 00:48:45,150
PV aquí, aquí no sé

299
00:48:45,150 --> 00:48:46,130
si es uno o dos

300
00:48:46,130 --> 00:48:48,230
no lo veo bien

301
00:48:48,230 --> 00:48:50,349
pero bueno, esta sería de aquí

302
00:48:50,349 --> 00:48:53,250
aquí tenéis algunas

303
00:48:53,250 --> 00:48:54,329
hemos visto que hay

304
00:48:54,329 --> 00:48:57,010
más de mil tipos

305
00:48:57,010 --> 00:48:58,690
de

306
00:48:58,690 --> 00:48:59,590
enzimas

307
00:48:59,590 --> 00:49:02,949
de restricción que se obtienen

308
00:49:02,949 --> 00:49:04,530
de bacterias

309
00:49:04,530 --> 00:49:06,630
diferentes

310
00:49:06,630 --> 00:49:09,530
aquí tenéis alguna de las bacterias

311
00:49:09,530 --> 00:49:10,849
de las que se pueden obtener

312
00:49:10,849 --> 00:49:35,920
Y el sitio de reconocimiento. Vale, pues esta sería la primera parte de este tema, del tema 4. El próximo día veremos la hibridación y la secuenciación. Eso sería antes de Semana Santa.

313
00:49:35,920 --> 00:49:48,000
y después de Semana Santa yo creo que ya veremos la PCR y la técnica del ADN recombinante, que esas son un poquito más largas.

314
00:49:49,860 --> 00:50:02,780
En este tema también nos hablan un poco aquí de la tecnología CRISPR, aquí donde pone para saber más, aquí nos hablan un poco de la tecnología CRISPR.

315
00:50:02,780 --> 00:50:27,800
Os voy a contar un poco de la tecnología CRISPR que está como muy de actualidad. Bueno, de esto no sé si tenéis alguna duda. Vale, pues mirad la técnica o la tecnología CRISPR.

316
00:50:27,800 --> 00:50:57,440
Entonces, es una técnica en la que podemos editar, podemos cortar un gen, podemos mutar un gen. Es una técnica que, fijaros, que hasta el año 2012 modificar un gen, pues como dice aquí, era una obra de ingeniería y podía costar hasta unos 5.000 euros y solamente se podía para unas pocas regiones.

317
00:50:57,800 --> 00:51:05,880
En cambio aquí con la tecnología CRISPR se puede editar o corregir el genoma de cualquier célula.

318
00:51:07,280 --> 00:51:13,059
Y esto de CRISPR viene de las siglas en inglés, de estas siglas,

319
00:51:13,059 --> 00:51:17,320
Cluster Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats,

320
00:51:17,880 --> 00:51:25,159
y que en español son repeticiones palindrómicas cortas, agrupadas y regularmente interespaciadas.

321
00:51:25,159 --> 00:51:38,219
Bueno, pues esta tecnología CRISPR, lo que es la base de la tecnología, la investigación básica, la hizo este científico, Francisco Mojica,

322
00:51:38,219 --> 00:51:55,639
En 1993 comenzó a hacer su tesis doctoral y al empezar la tesis empezó a investigar por qué él vivía en Alicante

323
00:51:55,639 --> 00:52:03,059
Entonces se puso a investigar por qué las arqueas que vivían en las salinas de Santa Pola

324
00:52:03,059 --> 00:52:09,800
porque estas arqueas aguantaban condiciones extremas de temperatura y de salinidad.

325
00:52:09,800 --> 00:52:32,699
Esto fue en el año 1993 y posteriormente pasaron 10 años hasta que descubre que estas arqueas

326
00:52:32,699 --> 00:52:45,360
tenían una secuencia de ADN que era diferente y esta secuencia de ADN tenía repeticiones palindrómicas,

327
00:52:45,820 --> 00:52:53,500
si os acordáis las repeticiones palindrómicas que se leen igual al derecho en una cadena como en la otra cadena en el otro sentido

328
00:52:53,500 --> 00:53:03,139
y además tenían en su secuencia de ADN, esto sería el ADN, pues tenían un fragmento de ADN

329
00:53:03,139 --> 00:53:09,619
y este fragmento de ADN que él llamó espaciador provenía de fragmentos de virus.

330
00:53:10,719 --> 00:53:22,519
Y además tenían otra secuencia de ADN y esta secuencia de ADN codificaba a una proteína que la llamó proteína Cas9.

331
00:53:22,519 --> 00:53:25,619
de sistema asociado a CRISPR

332
00:53:25,619 --> 00:53:30,440
entonces él se puso a investigar sobre el ADN de estas arqueas

333
00:53:30,440 --> 00:53:34,960
y en 2003 pasaron 10 años hasta que descubrió que estas arqueas

334
00:53:34,960 --> 00:53:40,000
tenían esta secuencia, por lo que

335
00:53:40,000 --> 00:53:43,679
bueno, aquí está representado lo mismo

336
00:53:43,679 --> 00:53:47,219
aquí en rombo serían las secuencias palindrómicas

337
00:53:47,219 --> 00:53:51,460
y aquí entre las secuencias palindrómicas

338
00:53:51,460 --> 00:53:57,780
tenemos una secuencia que provienen de virus. Estos serían los virus y estas serían las secuencias

339
00:53:57,780 --> 00:54:12,050
que provienen de los virus. Pues entonces él descubrió que había unas bacterias o las arqueas

340
00:54:12,590 --> 00:54:20,050
que tenían un mecanismo de defensa frente a los virus y es decir que cuando el virus infectaba

341
00:54:20,050 --> 00:54:25,989
infectaba a una bacteria, pues esta bacteria lo que hacía era copiar fragmentos de ese

342
00:54:25,989 --> 00:54:33,869
ADN y los incorporaba en su genoma, en su ADN, esos eran los espaciadores. Y además

343
00:54:33,869 --> 00:54:48,360
hacía copias de ARN, de ese fragmento del virus. Entonces, la próxima vez que ese virus

344
00:54:48,360 --> 00:54:58,340
entre la bacteria, pues la bacteria ya tiene, a ese virus ya le reconoce porque tiene esa secuencia de virus en su ADN

345
00:54:58,340 --> 00:55:08,099
y además como tiene unas secuencias de ARN que son del virus, pues ese virus ya lo identifica.

346
00:55:08,099 --> 00:55:27,099
Por lo que la proteína Cas9 lo que va a hacer va a ser romper ese ADN, lo va a destruir. Esta proteína es una enzima, una endonucleasa que va a romper ese ADN.

347
00:55:27,099 --> 00:55:53,889
Bueno, en 1993 fue cuando Mojica empezó a investigar, en 2003 ya descubrió ese mecanismo y posteriormente hubo todos estos investigadores que se pusieron a estudiar este mismo mecanismo de defensa de las bacterias frente a los virus.

348
00:55:53,889 --> 00:56:06,150
Y en el 2013, estas dos investigadoras, Yeri Ferdouna y Emanuel Charpentier, descubrieron la aplicación de este mecanismo.

349
00:56:07,730 --> 00:56:21,610
Ellas lo que descubrieron fue cómo aplicar lo que había descubierto ya Mojica, de cómo actuaban las enzimas, pues ellas descubrieron la aplicación.

350
00:56:21,610 --> 00:56:50,969
Es decir, pues si nosotros queremos editar un gen, lo que podemos hacer es copiar ese gen, crear un ARN de ese fragmento de ADN que queremos modificar y con ese ARN y con la proteína Cas9, que actúan como tijeras moleculares, lo que podemos cortar es ese ADN que nosotros queremos identificar.

351
00:56:51,610 --> 00:57:01,719
cortar. Bueno, pues esta es la tecnología CRISPR. Bueno, ahora quizá os suene un poco

352
00:57:01,719 --> 00:57:09,679
complicado, pero ya volveremos a ello. Simplemente quería que supierais un poquito de qué

353
00:57:09,679 --> 00:57:18,920
lleva esto de la CRISPR. Simplemente es eso. Para editar un gen, lo que podemos hacer es

354
00:57:18,920 --> 00:57:20,800
saber mediante

355
00:57:20,800 --> 00:57:23,539
un fragmento de ARN

356
00:57:23,539 --> 00:57:25,360
saber dónde tenemos

357
00:57:25,360 --> 00:57:27,739
que cortar y posteriormente

358
00:57:27,739 --> 00:57:28,739
la proteína

359
00:57:28,739 --> 00:57:31,719
la proteína, la Cas9

360
00:57:31,719 --> 00:57:33,480
la nucleasa, va a

361
00:57:33,480 --> 00:57:35,679
cortar ese fragmento de

362
00:57:35,679 --> 00:57:36,260
ADN

363
00:57:36,260 --> 00:57:39,360
pero bueno, ya os digo que de esto

364
00:57:39,360 --> 00:57:41,019
volveremos porque

365
00:57:41,019 --> 00:57:44,500
ahora yo creo que igual

366
00:57:44,500 --> 00:57:46,780
os he podido liar un poco

367
00:57:46,780 --> 00:57:50,440
pero ya volveremos a esto de la CRISPR

368
00:57:50,440 --> 00:57:53,800
vale, pues entonces

369
00:57:53,800 --> 00:57:58,059
no sé si tenéis alguna duda

370
00:57:58,059 --> 00:57:59,280
de esto que hemos visto

371
00:57:59,280 --> 00:58:05,849
o de las prácticas que

372
00:58:05,849 --> 00:58:10,250
de la práctica de casa, de laboratorio

373
00:58:10,250 --> 00:58:11,670
no sé si hay alguna duda

374
00:58:11,670 --> 00:58:16,210
voy a cortar la grabación