1
00:00:01,780 --> 00:00:12,300
Bien, pues vamos a ver esta parte del tema, muy importante en el análisis microbiológico de las aguas, que es la preparación de los medios de cultivo.

2
00:00:12,699 --> 00:00:18,660
Vamos a ver algunas generalidades de los medios de cultivo que más se utilizan especialmente para el cultivo de bacterias.

3
00:00:19,879 --> 00:00:23,160
Vamos a seguir este orden, que es el que tenemos en la presentación.

4
00:00:24,420 --> 00:00:31,460
Haré una pequeña introducción, sobre todo de algunos conceptos que son importantes, que tenemos que tener en cuenta.

5
00:00:31,780 --> 00:00:46,039
Y este segundo apartado es muy importante, cómo se clasifican los medios de cultivo según su composición, según el modo de preparación, su consistencia y su utilización.

6
00:00:46,039 --> 00:01:16,019
Bien, en el tercer apartado vamos a ver una descripción de los medios de cultivo que más se utilizan, más habituales, sobre todo en el cultivo de bacterias y haré especial hincapié, aunque lo veremos más adelante, cuáles son los medios de cultivo que se utilizan sobre todo para el recuento y para la identificación y detección de coliformes e indicadores microbiológicos de contaminación.

7
00:01:16,040 --> 00:01:37,040
fecal de las aguas, sobre todo las aguas de consumo, el consumo humano. Esta última parte es una parte de práctica más procedimental que está relacionada con las prácticas de laboratorio que ya estamos haciendo en el laboratorio de análisis microbiológico.

8
00:01:37,040 --> 00:01:53,780
Bien, pues vamos a comenzar. Fijaos, una fase muy importante del análisis microbiológico es poder, in vitro, en el laboratorio, crecer y cultivar los microorganismos que queremos detectar.

9
00:01:53,780 --> 00:02:09,439
Sabemos que los microorganismos crecen fácilmente, especialmente las bacterias, crecen con mucha facilidad siempre y cuando se den todas las condiciones necesarias para su crecimiento, para su división celular.

10
00:02:09,439 --> 00:02:34,240
Desde la atmósfera adecuada, presión parcial de oxígeno, humedad relativa, temperatura óptima, ya sabemos que hay bacterias que crecen a 37 grados, hay bacterias, que es la gran mayoría, pero hay bacterias, como veremos, las heterótrofas, que crecen a 22 grados, otras crecen a 26 grados, incluso las hay que crecen a 42 grados, etc.

11
00:02:34,240 --> 00:02:51,020
Hay que conocer muy bien la temperatura óptima de crecimiento para poder facilitar esas condiciones en el laboratorio. Y especialmente qué elementos y qué compuestos nutritivos necesitan esas bacterias, qué nutrientes necesitan esas bacterias para poder crecer.

12
00:02:52,020 --> 00:03:20,180
Una vez que establecemos el cultivo, las bacterias, a partir de una sola bacteria, una sola bacteria sobre el medio de cultivo, si las condiciones son las adecuadas, se van a generar por bipartición, por división mitótica, bueno, división mitótica no, por bipartición, la división celular prokaryota, se van a generar miles y miles de millones de individuos.

13
00:03:20,180 --> 00:03:28,360
individuos a partir de esa bacteria que cayó en ese punto del medio de cultivo. Estas células

14
00:03:28,360 --> 00:03:35,979
creciendo y acumulándose van a dar lugar a lo que ya conocemos como las colonias. Aquí tenemos

15
00:03:35,979 --> 00:03:43,219
varios ejemplos de colonias de diferentes bacterias. Ya veis que la morfología de las colonias, no

16
00:03:43,219 --> 00:03:48,960
tenemos tiempo de estudiarla, pero ya veis que en la morfología de las colonias ya se puede prever

17
00:03:48,960 --> 00:03:51,719
y sospechar qué bacteria es la que está creciendo.

18
00:03:52,699 --> 00:03:56,659
Daos cuenta que algunas, por ejemplo esta y esta, no tienen pigmentos.

19
00:03:56,960 --> 00:03:59,000
Estas colonias son pigmentadas.

20
00:04:00,159 --> 00:04:04,819
Estas además son colonias muy redonditas, con los bordes muy suaves,

21
00:04:05,199 --> 00:04:06,699
además tienen un cierto brillo.

22
00:04:06,879 --> 00:04:09,039
Estas son mucho más planas, estas de aquí.

23
00:04:09,500 --> 00:04:12,400
Estas colonias son grandes, estas colonias son mucho más pequeñas.

24
00:04:13,340 --> 00:04:17,660
Pero la idea fundamental es que cualquiera de estas colonias que tenemos aquí

25
00:04:18,959 --> 00:04:33,959
Procede de una única bacteria que cuando sembramos el medio de cultivo cayó en ese punto del medio de cultivo y a partir de ella se han generado miles de millones de individuos, ¿de acuerdo?

26
00:04:33,959 --> 00:04:47,959
Por lo tanto, son bacterias clónicas. Esto es importante que lo tengamos en cuenta. De ahí el nombre de colonia. Las llamamos colonias porque todas ellas genéticamente son clones que derivan de aquella bacteria.

27
00:04:48,959 --> 00:05:06,939
Muy bien. Esto es importante y me detengo un poquito porque ya veremos más adelante que para el recuento, para saber cuántas bacterias o cuántos coliformes, cuántas enterococos, por ejemplo, hay en una muestra de agua, tenemos que cuantificarlas.

28
00:05:06,939 --> 00:05:32,060
Y para poder cuantificarlas vamos a contar colonias. ¿Y cómo es posible que contemos colonias y sabemos el número de bacterias? Porque sabemos que cada colonia procede de una sola bacteria. Si yo en el recuento cuento lo que llamamos 50 UFCs, 50 colonias, unidades formadoras de colonias, yo sé que en aquella muestra había 50 bacterias.

29
00:05:32,060 --> 00:05:39,019
Y de eso puedo estar totalmente seguro. ¿De acuerdo? Bien, este concepto de colonia es importante.

30
00:05:40,000 --> 00:05:56,279
Bien, como ya fuimos viendo en temas anteriores, bueno, en otras partes del tema, la gran mayoría de las bacterias, en este caso de interés clínico, de interés clínico en microbiología clínica, pero de interés clínico también en el análisis de agua.

31
00:05:56,279 --> 00:06:23,699
Porque si analizamos, hacemos un análisis microbiológico para poder detectar posibles patógenos de interés. Todas ellas son quimio-heterótrofas desde un punto de vista nutricional. Por tanto, necesitan compuestos orgánicos y a partir de estos compuestos orgánicos van a obtener la energía y la fuente de carbono para todos los procesos que necesitan.

32
00:06:23,699 --> 00:06:31,439
procesos metabólicos y fisiológicos que necesitan para su crecimiento y expansión. Bien, ¿qué sería

33
00:06:31,439 --> 00:06:38,000
entonces un medio de cultivo? Pues un medio de cultivo lo podríamos definir como, ya decíamos,

34
00:06:38,139 --> 00:06:45,519
como una especie de disolución, un sustrato, una solución de nutrientes que permite el desarrollo

35
00:06:45,519 --> 00:06:52,779
de estos microorganismos. Si estos microorganismos necesitan compuestos orgánicos, pues hay que saber

36
00:06:52,779 --> 00:06:58,339
cuáles son todos estos compuestos orgánicos que necesitan, algunos son inorgánicos, para poder

37
00:06:58,339 --> 00:07:06,279
juntarlos todos y crear medios de cultivo. Por tanto, es como una mezcla, puede ser simple o

38
00:07:06,279 --> 00:07:11,959
puede ser más compleja, como veremos ahora, una mezcla de nutrientes, especialmente que aportan

39
00:07:11,959 --> 00:07:18,579
carbono, que necesitan las bacterias para la síntesis de sus compuestos orgánicos, nitrógeno,

40
00:07:18,579 --> 00:07:42,759
Azufre y fósforo. ¿De acuerdo? Y faltaría aquí también el oxígeno, que es muy importante. Además de todos estos compuestos orgánicos, ya veremos que hay muchos más componentes. Necesitamos sales, por supuesto, algunos iones metálicos, calcio, magnesio, cofactores, es decir, algunas vitaminas, factores de crecimiento, etcétera, etcétera.

41
00:07:43,600 --> 00:07:45,399
Por tanto, ¿qué es un medio de cultivo?

42
00:07:45,620 --> 00:07:49,120
No es ni más ni menos que una mezcla, una solución de nutrientes

43
00:07:49,120 --> 00:07:53,600
que lo vamos a utilizar como sustrato

44
00:07:53,600 --> 00:07:57,779
y sobre ese sustrato van a poder crecer nuestras bacterias.

45
00:07:58,759 --> 00:08:02,600
Bien, ¿qué requisitos debe cumplir todo medio de cultivo?

46
00:08:05,779 --> 00:08:08,680
Por un lado, deben ser estériles, por supuesto,

47
00:08:09,579 --> 00:08:12,319
si están ya contaminados los medios de cultivo,

48
00:08:12,319 --> 00:08:17,120
entonces no puedo detectar si hay o no hay contaminación en la muestra que me llega al laboratorio.

49
00:08:18,360 --> 00:08:23,660
En segundo lugar, deben estar contenidos en recipientes adecuados,

50
00:08:24,259 --> 00:08:29,060
recipientes que mantengan la esterilidad y que sean de fácil manejo.

51
00:08:29,779 --> 00:08:35,059
Normalmente, como ya sabemos, o bien vamos a dispensarlo en tubos,

52
00:08:35,600 --> 00:08:40,659
en tubos de cultivo microbiológico o bien en placas Petri.

53
00:08:42,320 --> 00:08:49,940
Tercero, deben poseer todos los nutrientes necesarios para el crecimiento de las bacterias que nos interesan.

54
00:08:50,940 --> 00:09:05,019
Y por último, debe contener las condiciones fisicoquímicas adecuadas en cuanto a pH, en cuanto a humedad, en cuanto a presión osmótica, es decir, fuerza iónica, concentración de sales.

55
00:09:06,340 --> 00:09:08,799
Todas estas condiciones son muy importantes.

56
00:09:08,799 --> 00:09:13,799
todos los medios de cultivo deben cumplir estos cuatro requisitos.

57
00:09:15,019 --> 00:09:18,480
Bien, ¿qué tipos de medios de cultivo?

58
00:09:18,860 --> 00:09:20,899
Vamos a ir a las ideas importantes.

59
00:09:22,019 --> 00:09:24,320
Podemos clasificar los medios de cultivo de muchas maneras.

60
00:09:25,100 --> 00:09:27,559
Una primera clasificación es según su composición.

61
00:09:30,259 --> 00:09:36,620
Y según su composición tenemos, por un lado, lo que llamamos los medios complejos o naturales.

62
00:09:36,620 --> 00:09:53,340
Son los primeros medios de cultivo que se utilizaron. Y esta imagen no está por casualidad. Y es que eran caldos. Caldos hechos a base de extractos vegetales o extractos animales.

63
00:09:54,220 --> 00:10:03,980
Los primeros que se utilizaban eran, pues eso, a partir de carne o a partir de, aunque en mucha menos medida, de extractos vegetales.

64
00:10:04,299 --> 00:10:10,659
El gran problema que tenían estos medios es que es verdad que muchas bacterias podían crecer en estos medios de cultivo,

65
00:10:10,799 --> 00:10:17,639
pero su composición, por supuesto que no es definida, son medios indefinidos.

66
00:10:17,639 --> 00:10:41,039
No conocemos exactamente la concentración de glucosas, de carbohidratos, de lípidos, de proteínas. Por tanto, de un lote de medio complejo a otro lote que producíamos en el laboratorio, no había consistencia, ¿de acuerdo? Y por tanto, no era un método, digamos, muy riguroso.

67
00:10:41,039 --> 00:10:46,580
Por tanto, la reproducibilidad era el gran problema que tenía

68
00:10:46,580 --> 00:10:49,820
Claro, yo preparo un caldo y lo puedo utilizar para muchas veces

69
00:10:49,820 --> 00:10:52,480
Porque lo puedo dosificar en alícuotas

70
00:10:52,480 --> 00:10:55,120
Cuando se me acaba tengo que preparar un caldo nuevo

71
00:10:55,120 --> 00:10:58,139
La composición es completamente diferente seguramente

72
00:10:58,139 --> 00:11:02,779
Por tanto, no había muchos problemas en reproducir los resultados

73
00:11:02,779 --> 00:11:10,419
De ahí que se empezaron a diseñar y a fabricar los medios sintéticos

74
00:11:10,419 --> 00:11:17,440
que son aquellos que contienen en su composición exclusivamente muchas moléculas

75
00:11:17,440 --> 00:11:20,659
y que son directamente asimilables por las bacterias.

76
00:11:20,799 --> 00:11:26,580
Por ejemplo, en lugar de poner proteínas de la carne, se pueden poner directamente los aminoácidos.

77
00:11:27,799 --> 00:11:33,720
La gran ventaja y la gran diferencia con los anteriores es que la composición está perfectamente definida

78
00:11:33,720 --> 00:11:38,279
porque yo peso y yo sé qué cantidad pongo.

79
00:11:38,279 --> 00:11:59,539
Por ejemplo, aquí tenéis un ejemplo, la composición del agarce trimida. Este medio de cultivo, el agarce trimida, se utiliza para el cultivo de pseudomonas, pseudomonas eruginosa, pseudomonas fluorescens, ¿de acuerdo? Tiene este aspecto de aquí.

80
00:11:59,539 --> 00:12:21,279
Y nosotros sabemos, cuando compramos un medio de cultivo de cetrimida, agar cetrimida, sabemos la composición exacta que tiene y además nos lo dice el fabricante. De hecho, yo podría comprar pectona, cetrimida, etcétera, etcétera y fabricarlo yo en el laboratorio. Luego lo esterilizo y ya tendría yo mi medio de cultivo.

81
00:12:21,279 --> 00:12:27,399
Bien, y en tercer lugar tenemos los que llamamos los semisintéticos

82
00:12:27,399 --> 00:12:33,259
Cabe destacar que los anteriores, los sintéticos, son los que más se utilizan actualmente

83
00:12:33,259 --> 00:12:40,700
Sin embargo, algunas bacterias requieren algunos factores de crecimiento específicos, muy específicos

84
00:12:40,700 --> 00:12:43,639
¿De acuerdo? Para poder desarrollarse in vitro

85
00:12:43,639 --> 00:12:48,159
Es por ello que existen medios que llamamos semisintéticos

86
00:12:48,159 --> 00:12:57,120
que aportan factores de crecimiento, pero tampoco de una forma definida, sino dentro de un extracto

87
00:12:57,120 --> 00:13:03,379
orgánico hidrolizado. Puede ser, por ejemplo, un extracto de levaduras, que no es ni más ni menos

88
00:13:03,379 --> 00:13:11,980
que células fúngicas, levaduras, son hongos unicelulares, machacados. Un extracto heliofilizado,

89
00:13:12,679 --> 00:13:17,600
¿de acuerdo? O extracto de algunos tejidos, por ejemplo, o infusión, que lo vamos a ver,

90
00:13:17,600 --> 00:13:24,940
O las peptonas, las peptonas son, lo vamos a ver ahora después, bueno, son proteínas digeridas, ¿de acuerdo?

91
00:13:24,940 --> 00:13:28,659
Aquí tenemos un ejemplo del isovitálex, ¿de acuerdo?

92
00:13:29,059 --> 00:13:37,039
Entonces, en este caso, pues tenemos dos gramos de extracto de carne bovina, pero ese extracto, la composición exacta no sabemos muy bien,

93
00:13:37,159 --> 00:13:46,080
cuánta proteína, un hidrolizado ácido de caseína, que es una proteína, almidón sí que sabemos, cuánta hemoglobina ponemos también lo sabemos y cuánto agar.

94
00:13:46,080 --> 00:13:59,019
Pero aquí tenemos este extracto y este hidrolizado que la composición exacta no la sabemos. Estos son medios semisintéticos y se utilizan, digamos, como para usos muy concretos. ¿De acuerdo? Bien.

95
00:13:59,019 --> 00:14:19,539
Por último, hay algunas bacterias que no crecen bien en ningún tipo de medio de cultivo. Lo comento aquí porque es importante que lo conozcáis. En control de aguas no se utiliza mucho y no es necesario, pero quiero que lo conozcamos porque me parece que es importante.

96
00:14:19,539 --> 00:14:26,539
Algunas bacterias son, sobre todo aquellas bacterias que son parásitos intracelulares.

97
00:14:27,620 --> 00:14:37,139
Son bacterias que no crecen en ningún medio de cultivo porque solo crecen dentro de células vivas.

98
00:14:37,519 --> 00:14:43,799
Por tanto, para poderlas cultivar necesitamos establecer un cultivo de células eucariotas e infectarlo.

99
00:14:44,519 --> 00:14:46,820
Este es el caso de las clamidias y las riquetsias.

100
00:14:47,100 --> 00:14:50,500
Aquí os he puesto una imagen para que veáis, para poderlas cultivar.

101
00:14:50,500 --> 00:14:58,879
Aquí, por ejemplo, tenemos una imagen de células que han sido infectadas con riquetsias, que tienen esta forma de espiralada.

102
00:14:59,460 --> 00:15:06,559
Como son parásitos intracelulares, infectamos las células y aquí dentro de las células las podemos cultivar en el laboratorio.

103
00:15:06,779 --> 00:15:11,240
Si no, es imposible. En este caso son clamidias, que son también intracelulares.

104
00:15:12,120 --> 00:15:15,500
La siguiente clasificación es según el modo de preparación.

105
00:15:15,980 --> 00:15:19,919
Y es que podemos preparar el medio de cultivo directamente a partir de la fórmula.

106
00:15:20,500 --> 00:15:31,299
Por ejemplo, si tenemos esta fórmula, podemos comprar de forma individual todos los componentes, pesar la cantidad adecuada y prepararlo en el laboratorio.

107
00:15:32,019 --> 00:15:33,940
Esto no suele ser ya lo habitual.

108
00:15:35,379 --> 00:15:43,480
Actualmente, se suelen comprar o bien los medios deshidratados, liofilizados, tal y como los tenemos en el laboratorio,

109
00:15:43,480 --> 00:15:49,460
y a partir de las indicaciones del fabricante lo preparamos en el laboratorio

110
00:15:49,460 --> 00:15:56,240
o bien ya comprar directamente los medios preparados y esterilizados en forma ya de placas

111
00:15:56,240 --> 00:16:04,379
y se pueden comprar pues eso, mangas, una manga de 15 placas de agar sangre, por ejemplo,

112
00:16:04,740 --> 00:16:08,279
este sería agar sangre, medio de cultivo y ya viene preparado, viene esterilizado

113
00:16:08,279 --> 00:16:16,340
y lo único que tenemos que hacer es sembrarlo o sembrar la muestra, una alícuota de la muestra y ponerlo a cultivar.

114
00:16:17,559 --> 00:16:22,879
No suele ser muy habitual, a no ser que sea un laboratorio que mueve una gran cantidad de muestras.

115
00:16:23,580 --> 00:16:30,580
De tal manera que le sale rentable, puede salir rentable comprar ya las placas preparadas y esterilizadas.

116
00:16:30,580 --> 00:16:39,100
Bien, según la consistencia tenemos medios líquidos que clásicamente se les llama caldos

117
00:16:39,100 --> 00:16:46,570
En inglés son broth, lo veremos así como broth

118
00:16:46,570 --> 00:16:56,230
Es un caldo nutritivo, caldo nutritivo compuesto principalmente, la mayoría de ellos, de extracto de carne, peptona, que ya veremos qué es, y agua

119
00:16:56,230 --> 00:17:04,650
¿Y para qué se suelen utilizar? Pues se suelen utilizar mucho para la obtención del tema

120
00:17:04,650 --> 00:17:13,769
Los medios sólidos, la gran diferencia con los caldos es sencillamente que le añadimos un agente gelificante

121
00:17:13,769 --> 00:17:19,490
Gelificante o solidificante, que nos ayuda a darle consistencia

122
00:17:19,490 --> 00:17:27,650
Los que más se utilizan son o bien la gelatina, esta es de origen animal, la gelatina procede del colágeno

123
00:17:27,650 --> 00:17:37,170
de muchos tejidos animales, especialmente huesos, tendones, ligamentos o el agar-agar.

124
00:17:37,509 --> 00:17:41,210
El que más se utiliza es el agar-agar, que es un polisacárido no ramificado

125
00:17:41,210 --> 00:17:43,710
que procede de algas marinas, etcétera, etcétera.

126
00:17:44,230 --> 00:17:50,349
Muy bien, si a un caldo le añadimos un agente gelificante, agar-agar, por ejemplo, o gelatina,

127
00:17:50,349 --> 00:17:51,869
ya tenemos un medio sólido.

128
00:17:51,869 --> 00:18:14,819
Además tenemos los medios semisólidos que se preparan normalmente a partir de los medios líquidos también y agregando una cantidad pequeña del agente solidificante o gelificante, entre 2 y 4 gramos por litro, muy poquito, de tal manera que no llegan a ser sólidos ni tampoco son líquidos, por supuesto.

129
00:18:14,819 --> 00:18:21,119
Y se estudian, o sea, se utilizan únicamente para el estudio de la movilidad de las bacterias.

130
00:18:21,740 --> 00:18:26,519
Tenemos aquí dos tubos con medio semisólido y los hemos sembrado en picadura.

131
00:18:27,099 --> 00:18:31,460
Aquí tenemos nuestro hilo de siembra, ¿recordáis? Con el hilo de siembra.

132
00:18:31,779 --> 00:18:43,720
Lo hemos esterilizado, cogemos una parte de la muestra, el inóculo, insisto que es el hilo de siembra, no es el asa de siembra, y sembramos por picadura.

133
00:18:43,720 --> 00:19:03,579
Lo introducimos aquí dentro. Si no hay movilidad, la bacteria no es flagelada, solo se observa crecimiento en esta parte donde yo he hecho la incisión. Si hay movilidad, lo que veo es que todo el medio es turbio. Eso significa que la bacteria tiene flagelos y movilidad.

134
00:19:03,579 --> 00:19:25,250
Según su utilización, esta es la clasificación más importante. Según su utilización tenemos medios comunes o generales. ¿Qué son los medios comunes o generales? Pues son medios que contienen los componentes mínimos básicos para que crezca la gran mayoría de las bacterias.

135
00:19:25,250 --> 00:19:47,250
Bacterias que llamamos, digamos, no exigentes, ¿de acuerdo? Que no necesitan requerimientos muy especiales. Un ejemplo es el agar nutritivo o agar común, ¿de acuerdo? Igual que está el agar nutritivo, tenemos el caldo nutritivo, que sería el agar nutritivo sin el agente gelificante.

136
00:19:47,250 --> 00:19:54,609
calificante. ¿Para qué utilizamos a veces estos, se utilizan estos medios? Pues para enriquecer una

137
00:19:54,609 --> 00:20:00,309
muestra y para hacer que las bacterias que hay en esa muestra puedan crecer sin problema y luego ya

138
00:20:00,309 --> 00:20:06,450
las estudiaremos a ver qué bacterias hay. Muy bien, cuando ya tenemos bacterias que son exigentes lo

139
00:20:06,450 --> 00:20:14,569
que necesitamos son medios enriquecidos. La gran mayoría de estos medios enriquecidos proceden de

140
00:20:14,569 --> 00:20:20,710
otros medios que son generales o comunes, a los cuales les hemos añadido una serie de factores

141
00:20:20,710 --> 00:20:28,210
críticos indispensables para el crecimiento de microorganismos, bacterias que son exigentes. Es

142
00:20:28,210 --> 00:20:35,789
decir, si no tienen esos factores, esas bacterias no pueden crecer. Este enriquecimiento se puede

143
00:20:35,789 --> 00:20:42,029
conseguir de muchas maneras. Por ejemplo, en algunos se puede añadir suero, suero de la sangre.

144
00:20:42,029 --> 00:21:07,369
El suero de la sangre con todos los componentes y proteínas del suero o leche o huevo, un extracto de huevo o bilis o ácido tioglicólico. Todos estos factores, todos estos productos, muchos derivan de la sangre, pues aportan factores que son indispensables para muchos organismos, microorganismos que son exigentes.

145
00:21:07,369 --> 00:21:27,910
¿De acuerdo? Además, a estos medios enriquecidos incluso hay veces que hay que añadirle suplementos artificiales. ¿De acuerdo? Por ejemplo, el agar chocolate, que es este de aquí abajo, y este es el agar sangre. El agar sangre y el agar chocolate añadimos sangre. ¿De acuerdo?

146
00:21:27,910 --> 00:21:49,769
Lo que más nos interesa no es la sangre en sí, es la hemoglobina, ¿de acuerdo? Y los factores de crecimiento que van en la sangre, ¿de acuerdo? Entonces, el agar sangre es porque añadimos sangre tal cual y sangre de carnero. Y el agar chocolate es porque la sangre va hidrolizada, desnaturalizada, ¿de acuerdo?

147
00:21:49,769 --> 00:22:20,190
Entonces, bueno, esto es un ejemplo de estos medios enriquecidos. Aquí, por ejemplo, pues en microbiología clínica, pues se utilizan mucho para el crecimiento de hemófilus. Hemófilus, influenza o para influenza, todas las especies o especies de hemófilus necesitan factores de la coagulación para poder crecer. El factor 5, el factor 10, ¿de acuerdo? Que están presentes en el plasma actual.

148
00:22:20,190 --> 00:22:24,410
medios selectivos, ¿qué son los medios selectivos?

149
00:22:25,230 --> 00:22:27,750
pues los medios selectivos son medios en los cuales

150
00:22:27,750 --> 00:22:31,809
yo voy a poner componentes que van a favorecer

151
00:22:31,809 --> 00:22:35,049
el crecimiento de algunas bacterias respecto de otras

152
00:22:35,049 --> 00:22:39,170
por tanto, en estos medios selectivos

153
00:22:39,170 --> 00:22:41,769
yo de alguna manera voy a seleccionar

154
00:22:41,769 --> 00:22:47,460
qué bacterias van a crecer y cuáles no

155
00:22:47,460 --> 00:22:51,819
muchos de estos componentes que se añaden a los medios selectivos

156
00:22:51,819 --> 00:22:58,900
facilitan el crecimiento de algunas bacterias e inhiben activamente el crecimiento de otras.

157
00:23:02,200 --> 00:23:05,460
Bien, un ejemplo es el caldo selenito.

158
00:23:06,119 --> 00:23:09,799
El caldo selenito contiene selenito sódico

159
00:23:09,799 --> 00:23:17,079
y el selenito de sodio inhibe el crecimiento de las bacterias que son gram-positivas

160
00:23:17,079 --> 00:23:27,480
Pero además también inhibe el crecimiento de las bacterias gram-negativas a excepción de Salmonella.

161
00:23:28,039 --> 00:23:37,619
El género Salmonella, Salmonella titimorium, por ejemplo, sí que es capaz de crecer, es una enterobacteria capaz de crecer en presencia de selenito sódico.

162
00:23:37,980 --> 00:23:44,019
Por tanto, el caldo selenito es un medio de cultivo selectivo para el crecimiento de Salmonella.

163
00:23:44,019 --> 00:24:04,809
Otro ejemplo es el agar maconkey. El agar maconkey contiene cristalvioleta. El cristalvioleta es un colorante que inhibe las bacterias gram positivas, pero permite el crecimiento de las gram negativas y entre ellas las enterobacterias.

164
00:24:04,809 --> 00:24:15,970
Además, tiene otra serie de componentes que nos permiten evaluar el metabolismo fermentativo de las enterobacterias

165
00:24:15,970 --> 00:24:19,130
Porque unas enterobacterias fermentan lactosa y otras no

166
00:24:19,130 --> 00:24:25,089
Eso hace que además de ser selectivo, porque solo permite el crecimiento de las gran negativas

167
00:24:25,089 --> 00:24:30,089
Nos permite diferenciar qué tipo de enterobacteria está creciendo

168
00:24:30,089 --> 00:24:32,309
Pero esto lo veremos ahora más adelante

169
00:24:32,309 --> 00:24:36,930
Por tanto, la gama conque, además de ser selectivo, es un medio diferencial.

170
00:24:37,809 --> 00:24:42,430
Bien, el cuarto tipo son los medios de cultivo diferenciales.

171
00:24:43,269 --> 00:24:45,069
¿Por qué le llamamos diferenciales?

172
00:24:45,089 --> 00:24:50,990
Porque nos permiten diferenciar y poner en evidencia características bioquímicas

173
00:24:50,990 --> 00:24:59,009
que nos ayuden a diferenciar e identificar géneros y especies dentro del mismo grupo de bacterias.

174
00:24:59,009 --> 00:25:01,869
Por ejemplo, las enterobacterias.

175
00:25:02,309 --> 00:25:08,750
Dentro de las enterobacterias tenemos muchas especies de enterobacterias, géneros y especies.

176
00:25:08,750 --> 00:25:16,009
Y es importante diferenciar cuál es la bacteria, la enterobacteria, que está creciendo o que está presente en la muestra.

177
00:25:16,450 --> 00:25:20,890
Para ello nos podemos servir de estos medios diferenciales.

178
00:25:21,269 --> 00:25:27,710
Como los utilizamos para identificar, muchas veces les llamamos también medios de identificación.

179
00:25:30,089 --> 00:25:39,349
Veremos en las pruebas de identificación que una prueba de identificación típica es hacer un crecimiento en medios diferenciales.

180
00:25:39,970 --> 00:25:48,349
Para poner en evidencia estas características bioquímicas, muchas veces lo que se utilizan son diferentes tipos de carbohidratos.

181
00:25:48,349 --> 00:26:01,269
De tal manera que se puede evaluar qué carbohidratos, qué azúcares fermentan las bacterias que están presentes en la muestra y, por tanto, poder identificarlas.

182
00:26:01,269 --> 00:26:20,410
¿De acuerdo? Bien. Un ejemplo de medio diferencial es el agarclet. El agarclet nos permite diferenciar aquellas bacterias que son capaces de fermentar las lactosas de las que no son capaces de fermentar lactosa.

183
00:26:20,410 --> 00:26:33,349
Aquellas bacterias que fermentan lactosa y son lactosa positivas nos van a dar lugar a unas colonias de color amarillentas, que serían estas que están en la parte de la derecha.

184
00:26:33,849 --> 00:26:42,869
Si nos dan unas colonias de un color azul verdoso, significa que son lactosa deficientes, no son capaces de fermentar la lactosa.

185
00:26:42,869 --> 00:26:56,970
Este agar clet se utiliza mucho en microbiología clínica para poder cuantificar y detectar bacterias en infecciones del tracto urinario, ¿de acuerdo? No tanto en aguas.

186
00:26:56,970 --> 00:27:15,710
Otro ejemplo de medio tremendamente diferencial es el agar SS. El agar SS es de Salmonella sigela, porque nos permite diferenciar estas dos especies, estos dos géneros de enterobacterias, Salmonella y sigela.

187
00:27:15,710 --> 00:27:21,450
¿Cómo? Pues en su formulación contiene citrato férrico

188
00:27:21,450 --> 00:27:32,269
Aparte de la lactosa, que como ya veis nos permite por un lado ver qué bacterias son capaces de crecer

189
00:27:32,269 --> 00:27:36,890
Y por tanto que fermentan la lactosa, además contiene citrato férrico

190
00:27:36,890 --> 00:27:43,890
Y esto es importante porque Salmonella, que sería la que ha crecido en esta placa, produce ácido sulfídrico

191
00:27:43,890 --> 00:27:58,190
El ácido sulfídrico, al reaccionar con el citato férrico, da un precipitado de color azul y por eso todas las colonias tienen esta coloración tan oscura.

192
00:27:58,849 --> 00:28:09,670
Por tanto, si nosotros cultivamos una parte de nuestra muestra y observamos que las colonias son negras, inequívocamente podemos decir que estas bacterias son salmonella.

193
00:28:10,369 --> 00:28:15,910
Sin embargo, si lo que observamos es un crecimiento donde aquí se ven muy bien las estrías que se han realizado,

194
00:28:15,910 --> 00:28:22,250
aunque no sean colonias individuales, se ven de un color igual que el medio, o sea, como transparente,

195
00:28:22,470 --> 00:28:24,170
significa que ha crecido sigeta.

196
00:28:25,109 --> 00:28:32,930
Por tanto, el agar SS nos permite no solamente seleccionar el crecimiento de las enterobacterias,

197
00:28:33,009 --> 00:28:38,730
sino además poder diferenciar a dos géneros de bacterias que son muy próximas

198
00:28:38,730 --> 00:28:49,930
y que bioquímicamente se parecen mucho, que son sigel y salmonella, por esta característica propia de salmonella de producir el ácido sulfírico.

199
00:28:51,230 --> 00:29:00,069
Muy bien. Además, dentro de los medios diferenciales se han diseñado en las últimas décadas lo que llamamos los medios cromogénicos.

200
00:29:00,130 --> 00:29:06,349
Los medios cromogénicos son un tipo concreto de medios diferenciales. Actualmente se usan mucho.

201
00:29:06,349 --> 00:29:26,230
¿Por qué se le llaman cromogénicos? Porque además de toda su formulación nutritiva, contienen pigmentos y sustratos cromogénicos. De tal manera que, dependiendo de qué bacteria ha crecido en la placa, la colonia adquiere un color diferente, muy diferente.

202
00:29:26,230 --> 00:29:33,950
En este caso, si la colonia es de un color violeta, sabremos que es un Streptococcus agalactiae.

203
00:29:34,230 --> 00:29:37,910
Y si las colonias son rojizas, entonces ha crecido Escherichia coli.

204
00:29:39,009 --> 00:29:47,009
En este caso, por ejemplo, nos permite este medio cromogénico diferenciar tres especies diferentes.

205
00:29:47,009 --> 00:30:04,869
Escherichia coli, que daría estas colonias de color rojizo, Proteus, que es otra enterobacteria, nos daría unas colonias que son incoloras, transparentes, y si son verdes, entonces hablaríamos de un enterococco fecalis.

206
00:30:04,869 --> 00:30:09,130
¿Por qué se utilizan mucho?

207
00:30:10,269 --> 00:30:15,490
Porque lo único que tenemos que hacer es sembrar una parte de la muestra, una alícota de la muestra

208
00:30:15,490 --> 00:30:24,650
Y una vez está sembrada la cultivamos 24 horas y al día siguiente, a simple vista, dependiendo de la coloración que tengan las colonias

209
00:30:24,650 --> 00:30:30,569
Podemos identificar cuál o cuáles de estas bacterias estaban presentes en la muestra

210
00:30:30,569 --> 00:30:58,700
Por ejemplo, existen una serie de medios cromogénicos para análisis específico de aguas. Son los que llamamos los cromagar, por ejemplo. Tienen diferentes usos. Por ejemplo, el cromagar que veremos ahora, ECC, nos permite diferenciar si en la muestra hay coliformes y entre ellos escherichia coli.

211
00:30:58,700 --> 00:31:05,880
¿De acuerdo? Entonces, algunos son como, por ejemplo, este de aquí que es un caldo y el resto que son agares.

212
00:31:06,380 --> 00:31:16,220
Dependiendo de la coloración de las colonias, podemos, como en este caso, podemos diferenciar muy bien qué bacteria ha crecido, solamente por la coloración.

213
00:31:17,500 --> 00:31:27,119
Un ejemplo es el cromagar SC. El cromagar SC se utiliza mucho y, sobre todo, en el método que veremos de filtración de membrana,

214
00:31:28,700 --> 00:31:41,099
¿Por qué? Porque Escherichia coli da unas colonias de un color violeta, azul, muy oscuro, muy intenso. El resto de colonias que vemos aquí, que son rosáceas, son coliformes.

215
00:31:41,099 --> 00:32:00,099
De tal manera que con una sola siembra y un cultivo de 24 horas podemos diferenciar y contar cuántas unidades formadoras de colonias tenemos en la muestra de agua que son de Escherichia coli o las que son de coliformes totales.

216
00:32:04,009 --> 00:32:11,470
Pues este cromagar ECC se utiliza mucho en el método de filtración por membrana, que lo veremos más adelante.

217
00:32:11,470 --> 00:32:39,500
El caldo, ECC, en cambio, este se utiliza para el método de filtración. Sin embargo, este caldo se utiliza para el método de cuantificación por el número más probable. Lo veremos más adelante, ¿de acuerdo? En el tema. Pero bueno, ahora que nos vayan sonando, ¿de acuerdo?

218
00:32:39,500 --> 00:33:06,240
Bien, aparte de los medios diferenciales, tenemos más medios, más tipos de medios según su utilización. Los medios de multiplicación, como su nombre indica, se utilizan para poder obtener a partir de la muestra mayor cantidad de células, de bacterias, y poder expandir y detectar mejor las bacterias presentes en la muestra.

219
00:33:06,240 --> 00:33:11,240
¿De acuerdo? Sería como un paso previo a luego cultivarlas en medios selectivos o en medios diferenciales.

220
00:33:12,420 --> 00:33:25,119
Un ejemplo es el medio BHI, que es un caldo, caldo de infusión cerebro-corazón, que se utiliza mucho porque es como un caldo general,

221
00:33:25,680 --> 00:33:32,160
pero en el cual una gran mayoría de las bacterias se dividen y se multiplican muchísimo.

222
00:33:32,160 --> 00:33:40,440
¿De acuerdo? Esto tiene otros usos en microbiología clínica, no tanto en aguas, pero bueno, solamente que lo conozcamos.

223
00:33:42,200 --> 00:33:46,319
Los medios de conservación, como su nombre indica, se utilizan para conservar.

224
00:33:47,380 --> 00:33:53,880
O sea, nosotros a partir de la muestra, que nos llegó por ejemplo en un bote Pirex o en el recipiente adecuado,

225
00:33:54,200 --> 00:34:01,819
hemos hecho una serie de análisis, pero nosotros una vez hemos identificado y aislado la bacteria,

226
00:34:01,819 --> 00:34:17,400
muchas veces nos conviene conservarla y la podemos conservar a menos 80, congeladas, o incluso a menos 196 grados centígrados, congeladas, para luego poder estudiarla más adelante, ¿de acuerdo?

227
00:34:17,400 --> 00:34:37,880
Pues para ello necesitamos medios de conservación. Estos medios de conservación pues ya actualmente se utilizan crioviales que serían de este tipo, son unos viales pequeñitos que ya veis que vienen con unas pequeñas esferas y un medio de cultivo que permite la conservación con un crioconservante en su composición.

228
00:34:37,880 --> 00:34:53,940
Esta es la característica fundamental, que poseen un crío conservante que permite mantener las células congeladas y vivas, ¿de acuerdo? Alargar su viabilidad mientras están congeladas, ¿de acuerdo?

229
00:34:53,940 --> 00:35:11,519
Además tenemos también los medios de transporte. Los que más se utilizan son Stuart Amish y el Caribler y se utilizan para transportar muestras. Por ejemplo, en microbiología clínica, pero también en aguas.

230
00:35:11,519 --> 00:35:22,500
A veces nos interesa mucho coger una muestra, una muestra in situ, coger una muestra y para ello utilizamos este tipo de torundas.

231
00:35:23,480 --> 00:35:34,480
Tenemos aquí la torunda, es una torunda estéril, la empapamos en la muestra de agua in situ y la introducimos dentro de este tubo.

232
00:35:35,320 --> 00:35:39,460
En este tubo lo que tenemos aquí es un medio de transporte.

233
00:35:39,460 --> 00:36:02,840
¿Cuál es la finalidad? Sencillamente cogeríamos nuestra turunda estéril, la impregnamos in situ con la muestra, la introducimos dentro del medio de transporte y sirve para eso, para transportarla desde el punto donde se ha recogido la muestra para que las bacterias lleguen viables, lleguen vivas al laboratorio.

234
00:36:02,840 --> 00:36:16,159
Esto se realiza, por ejemplo, cuando el sitio de recogida de la muestra, in situ, está muy lejos del laboratorio y quizá vaya a tardar más de 24 horas en llegar al laboratorio.

235
00:36:16,880 --> 00:36:27,800
Entonces, este medio de transporte, el objetivo fundamental que cumple es permitir y conservar la viabilidad de esas bacterias que están presentes en la muestra hasta llegar al laboratorio.

236
00:36:29,119 --> 00:36:30,500
¿De acuerdo? Muy bien.

237
00:36:30,500 --> 00:36:36,340
Vamos a ver ahora en este apartado algunos de los medios que más se utilizan

238
00:36:36,340 --> 00:36:43,360
Vamos a ver, para aerobios, que son la gran mayoría de microorganismos que se analizan en aguas

239
00:36:43,360 --> 00:36:46,000
Entonces empezamos por los medios comunes

240
00:36:46,000 --> 00:36:51,300
Los medios comunes o generales tenemos el agar nutritivo, que se utiliza muchísimo

241
00:36:51,300 --> 00:36:54,900
Aquí en esta imagen, si os dais cuenta, se ha sembrado

242
00:36:54,900 --> 00:37:00,099
Seguramente esto es una muestra de agua de una charca, por ejemplo

243
00:37:00,099 --> 00:37:18,199
Tal cual se ha cogido, se ha sembrado a lo mejor unos 100 microlitros. Se ha hecho una siembra por extensión o en superficie, como ya veremos más adelante, y si os dais cuenta aquí tenemos muchísimos microorganismos muy variopintos solamente observando la morfología de las colonias.

244
00:37:18,199 --> 00:37:35,780
Por ejemplo, esta colonia claramente es filamentosa, por tanto esto es un hongo, ¿de acuerdo? Pero las que no son filamentosas, si os dais cuenta en esta de aquí, pues se puede estudiar que los bordes son muy diferentes que esta, que esta, además tiene pigmentación en medio pero no en la parte exterior, etc.

245
00:37:35,780 --> 00:37:48,920
Esta imagen es sencillamente para que veáis que en este agar nutritivo crecen de forma normal una gran cantidad de microorganismos, no solamente bacterianos, sino fúngicos, etc.

246
00:37:49,480 --> 00:37:55,820
Otro ejemplo es el agar soja tripticasa, o TSA, le llaman.

247
00:37:55,820 --> 00:38:06,239
Este es un agar base, de hecho el agar tripticasa soja o soja tripticasa se utiliza mucho como agar base y luego se suplementa y se enriquece.

248
00:38:06,400 --> 00:38:12,960
A partir de él se puede obtener, por ejemplo, medios enriquecidos, pero tal cual es un medio común.

249
00:38:16,300 --> 00:38:25,619
Medios enriquecidos. Los medios enriquecidos ya hemos visto que están enriquecidos y llevan algún tipo de componente que permite cultivar microorganismos exigentes.

250
00:38:25,619 --> 00:38:50,159
Los medios enriquecidos para aerobios que más se utilizan son el agar sangre y el agar chocolate. Ambos están suplementados con sangre. En este caso es agar columbia con un 5% de sangre de cordero, el CNA.

251
00:38:50,159 --> 00:39:12,300
La sangre de cordero tal cual. La sangre de cordero tiene un montón de componentes que permiten el crecimiento de bacterias que son un pelín, digamos, exigentes. En concreto, en microbiología clínica, no tanto en aguas, se utiliza también para diferenciar especies de Staphylococcus.

252
00:39:12,300 --> 00:39:30,679
¿Por qué? Porque se estudia la hemólisis. Es decir, estas bacterias, por ejemplo, en este caso, esta colonia, la colonia es el puntito que se ve marrón en medio o verde, no sé muy bien, depende de cómo lo veáis, y alrededor, si os dais cuenta, hay un halo blanquecino.

253
00:39:30,679 --> 00:39:40,679
Ese halo blanquecino es porque secretan una serie de factores que elisan los eritrocitos, los glóbulos rojos y producen este halo blanquecino.

254
00:39:41,880 --> 00:39:50,679
Bueno, pues en base al tipo de hemólisis tenemos algunos que son alfa-hemolíticos, otros son beta-hemolíticos y otros son gamma-hemolíticos.

255
00:39:51,760 --> 00:39:58,099
Esto ahora a nosotros no nos interesa en el cultivo de, en el análisis de aguas, pero bueno, que lo conozcamos.

256
00:39:58,099 --> 00:40:03,599
El agar sangre y el agar chocolate es muy parecido

257
00:40:03,599 --> 00:40:07,500
Sencillamente que aquí en el agar chocolate lo suplementamos con sangre

258
00:40:07,500 --> 00:40:10,599
Pero sangre que ha sido calentada y desnaturalizada

259
00:40:10,599 --> 00:40:14,260
Por eso no se ve con este aspecto rojizo sino este aspecto marronoso

260
00:40:14,260 --> 00:40:17,500
Y de ahí el nombre de agar chocolate entre comillas

261
00:40:17,500 --> 00:40:23,800
Este se utiliza mucho, por ejemplo, para especies de hemófilus

262
00:40:23,800 --> 00:40:45,670
¿De acuerdo? Hemófilus necesitan, dependiendo de la especie, el factor 5 de la coagulación, el factor 10 de la coagulación o ambos, ambos. Y esto lo añadimos con la sangre desnaturalizada. ¿De acuerdo? Bien.

263
00:40:45,670 --> 00:41:02,039
¿Qué más? El agarclé, que ya lo hemos visto. El agarclé es un medio selectivo, además es diferencial y se utiliza para el estudio de muestras clínicas procedentes de posibles infecciones urinarias.

264
00:41:02,039 --> 00:41:19,780
Dependiendo de si las bacterias, las colonias son amarillentas y acidifican el medio, por eso se ve el medio también amarillento en lugar de verde, pues sabemos que son fermentadoras de lactosa y si las colonias son verdosas, significa que no fermentan lactosa.

265
00:41:20,440 --> 00:41:26,539
El Mueller-Hinton se utiliza en la clínica para hacer antibiogramas o pruebas de susceptibilidad antimicrobial.

266
00:41:27,099 --> 00:41:30,659
No se utiliza mucho en el control de aguas.

267
00:41:31,380 --> 00:41:32,179
Muy bien.

268
00:41:33,639 --> 00:41:36,760
Medios que son, además de selectivos, diferenciales.

269
00:41:36,840 --> 00:41:38,059
Ya hemos visto el agar maconque.

270
00:41:38,539 --> 00:41:43,880
En el agar maconque se inhibe el crecimiento de todas las bacterias gram positivas

271
00:41:43,880 --> 00:41:49,880
y se permite el crecimiento de aquellas bacterias que son gram negativas.

272
00:41:49,880 --> 00:41:54,579
Entre ellas se utiliza mucho para el estudio de enterobacterias.

273
00:41:54,900 --> 00:42:00,659
Dentro de las enterobacterias tenemos dos grandes grupos.

274
00:42:00,659 --> 00:42:17,659
Aquellas enterobacterias que son capaces de fermentar la lactosa, estas bacterias que son capaces de fermentar la lactosa producen una acidificación del medio y sus colonias aparecen de un color rosáceo.

275
00:42:17,659 --> 00:42:35,059
Por tanto, aquí hemos crecido dos tipos de enterobacterias, la estría central y la estría de la derecha, y sabemos que como sus colonias y su crecimiento es rosáceo, sabemos que son lactosa positivas, es decir, fermentan la lactosa.

276
00:42:35,059 --> 00:42:49,340
En cambio, en este lado tenemos, hemos sembrado una bacteria y como sus colonias y su crecimiento es incoloro, sabemos que no ha sido capaz de fermentar la lactosa, por tanto es lactosa negativa.

277
00:42:49,340 --> 00:42:56,480
Además, como ya veremos más adelante, si os dais cuenta, entre estas dos bacterias que fermentan lactosa

278
00:42:56,480 --> 00:43:03,119
Hay una bacteria, esta de aquí, que además secreta un pigmento al medio de cultivo

279
00:43:03,119 --> 00:43:05,320
Esta podría ser Klebsiella, por ejemplo

280
00:43:05,320 --> 00:43:11,449
Entonces, bueno, con una simple siembra y cultivo en MacConkey

281
00:43:11,449 --> 00:43:16,710
No solamente hemos seleccionado el crecimiento de las gran negativas

282
00:43:16,710 --> 00:43:20,670
Sino que además, solamente por el aspecto de las colonias

283
00:43:20,670 --> 00:43:23,570
Sabemos si son lactosa positiva o lactosa negra.

284
00:43:24,349 --> 00:43:30,369
Algo parecido ocurre con el agar salmonella sigela, que ya lo hemos visto antes.

285
00:43:31,230 --> 00:43:41,110
Que nos da estas colonias de color oscuras, siempre que sea la que ha crecido salmonella, porque produce ácido sulfídrico.

286
00:43:44,289 --> 00:43:49,110
Podemos utilizar el agar SS o podemos utilizar el agar ectoen.

287
00:43:49,110 --> 00:44:01,250
Es muy parecido a la anterior y también nos permite diferenciar si la bacteria que ha crecido exige la salmonella por la coloración oscura de las columnas.

288
00:44:01,670 --> 00:44:08,739
Otro ejemplo de medio selectivo y diferencial es el agar levín o EMB.

289
00:44:09,699 --> 00:44:20,070
EMB viene de eosina y azul de metileno.

290
00:44:21,070 --> 00:44:22,269
Contiene estos dos colorantes.

291
00:44:22,269 --> 00:44:38,750
Esto le permite, este medio permite inhibir el crecimiento de las granpositivas y dentro de las grannegativas enterobacterias, dependiendo del aspecto que tengan sus colonias, pues sabremos si fermentan o no unos azúcares u otros.

292
00:44:38,750 --> 00:44:55,750
En concreto, os pongo el ejemplo de si observamos este tipo de colonias verdes, muy oscuras o negras, pero que si lo miramos al reflejo tiene un brillo metálico verde, estas colonias son inequívocamente de Escherichia coli.

293
00:44:55,750 --> 00:45:14,650
Bien. ¿Qué más? El agarte 6. El agarte 6 se utiliza mucho. Esto significa triple sugar iron, porque contiene hierro y tres azúcares que puede fermentar.

294
00:45:14,650 --> 00:45:34,170
Ya veis aquí que es el mismo medio de cultivo y en cada uno de estos cuatro tubos se han crecido cuatro bacterias diferentes. Fijaos qué aspecto después de cultivarlas tan diferentes. Lo veremos en detalle cuando veamos las pruebas de identificación.

295
00:45:34,170 --> 00:46:02,300
Pero bueno, ya os adelanto que con este agar nos permite determinar qué bacterias fermentan o no la lactosa, si esas bacterias son capaces de fermentar otros azúcares, si esa bacteria que ha crecido es capaz de producir ácido sulfídrico, en este caso fijaos que queda en medio de cultivo negro,

296
00:46:02,300 --> 00:46:27,239
Por tanto, esta bacteria con el citrato sódico que tiene el agar es TSI, sabemos que produce ácido sulfídrico y el cuarto parámetro que nos permite evaluar es si produce o no produce gas. Obviamente, esta bacteria ha producido gas. Aquí, esta burbuja es gas, gas que ha producido esta bacteria durante la fermentación. Lo veremos más adelante.

297
00:46:27,239 --> 00:46:48,579
¿De acuerdo? Agarcha mammanitol, pues el agarcha mammanitol, o manitol salado también se le llama, contiene un 7,5% de cloruro sódico. Es una concentración altísima de sales, tan alta que aquí no crece ninguna bacteria, a excepción de Staphylococcus.

298
00:46:48,579 --> 00:46:58,320
Por tanto, es un medio selectivo que inhibe el crecimiento de todas las bacterias menos los estafilococos, que son los únicos que pueden crecer a esta concentración de sales.

299
00:46:58,320 --> 00:47:23,179
Pero es que además es diferencial, porque tiene una serie de componentes que nos permiten diferenciar y ver que si ha acidificado el medio, que se acidifica el medio, que es lo que tenemos aquí de este color amarillento, porque tiene manitol, que es un carbohidrato, si es capaz de fermentar el manitol y acidificar el medio, sabemos que es un Staphylococcus aureus.

300
00:47:23,179 --> 00:47:43,360
Y si no, sabemos que es epidermidis. Esto en control de aguas no tiene tanta importancia, en la clínica es muy importante. Otros medios selectivos, el medio de NEASA, que también se utiliza para estafilococcus, pero no en aguas, entonces lo vamos a dejar aquí.

301
00:47:43,360 --> 00:48:04,659
Pero la garbilis esculina es importante porque es un medio selectivo y diferencial para el cultivo y la identificación de enterococcus. En concreto, este es uno de los parámetros microbiológicos que se deben evaluar en aguas, si hay o no hay enterococcus, especialmente enterococcus fecalis.

302
00:48:04,659 --> 00:48:13,659
Lo sabemos porque tiene esculina y solo Enterococcus es capaz de hidrolizar la esculina dando este precipitado de color negruzco.

303
00:48:15,260 --> 00:48:22,659
Además de este medio, bilis esculina, para identificar Enterococcus, tenemos también el Slaneth barley.

304
00:48:24,780 --> 00:48:34,889
El agarce trimida, estos de aquí no son tan importantes porque no se utilizan en aguas, pero el agarce trimida sí que se puede llegar a utilizar.

305
00:48:34,889 --> 00:49:02,630
Es una garbase que además contiene este antibiótico. Cetrimida es un antibiótico para el cual solamente Pseudomonas es resistente. Por tanto, todas estas colonias que han crecido aquí, que proceden de la muestra que hemos sembrado, podemos decir inequívocamente que son colonias procedentes de Pseudomonas.

306
00:49:02,630 --> 00:49:06,789
Pseudomonas aeruginosa, fluorescence, pero del género pseudomonas.

307
00:49:06,869 --> 00:49:17,289
Esto es importante porque en aguas recreativas y en depósitos hay que evaluar si hay o no hay presencia de pseudomonas.

308
00:49:19,949 --> 00:49:24,809
La gargranada, el owesten jensen son importantes en la clínica, pero no en aguas.

309
00:49:24,809 --> 00:49:35,130
Y un medio de aislamiento para anaerobios es el Schadler, que nos permite crecer aquellos microorganismos que son anaerobios.

310
00:49:37,650 --> 00:49:45,570
De medios cromogénicos ya hemos visto los más importantes y los que se utilizan mucho en el análisis de agua.

311
00:49:46,570 --> 00:49:54,949
Estos son, por ejemplo, un ejemplo concreto de agarres cromogénicos que se utilizan para infecciones del tracto urinario.

312
00:49:55,389 --> 00:49:57,570
Pero bueno, a nosotros nos interesan los que ya hemos visto.

313
00:49:58,250 --> 00:49:58,550
¿De acuerdo?

314
00:50:00,599 --> 00:50:02,000
Medios de cultivo líquidos.

315
00:50:02,199 --> 00:50:02,800
Los caldos.

316
00:50:03,179 --> 00:50:06,360
Bueno, pues ya hemos visto el caldo selenito, que es un caldo selectivo.

317
00:50:07,420 --> 00:50:09,159
El caldo de tío glicolato.

318
00:50:09,159 --> 00:50:22,150
Es un caldo igual que el caldo, el agua de peptona o el caldo nutritivo.

319
00:50:26,699 --> 00:50:36,199
Son caldos que se utilizan para, estos tres de aquí, se utilizan de forma general, son caldos comunes, generales, medios de cultivo líquidos, generales.

320
00:50:36,840 --> 00:50:44,559
A diferencia del caldo selenito que sí que es específico y es selectivo para salmón.

321
00:50:44,559 --> 00:50:48,440
El caldo Middelbrock se utiliza mucho en la clínica, pero no tanto en la clínica.

322
00:50:49,699 --> 00:51:00,699
Bien, y con esto acabamos esta parte de los medios de cultivo, tipos de medios de cultivo y su preparación en el laboratorio de análisis microbiológico de aguas.