1
00:00:03,379 --> 00:00:17,699
Bien, lo que os iba a contar, que os he subido nuevos ejercicios, a ver esto por qué no sale aquí en distancia, sobre la recta de calibrado, ¿vale?

2
00:00:17,699 --> 00:00:30,440
El archivo con la teoría, con las transparencias que estoy utilizando en clase, os lo voy a subir hoy porque es que hay alguna cosa, os lo iba a subir, pero he modificado alguna cosa que no se entendía bien,

3
00:00:30,440 --> 00:00:38,700
Entonces, como hoy ya vamos a terminar con la parte teórica, según si tenéis alguna duda la corrijo y ya os lo subo después, ¿vale?

4
00:00:39,939 --> 00:00:51,340
Entonces, en ejercicios os he añadido en esta carpeta, que es donde voy metiendo todo, si aquí os pongo la descripción, y tenemos estos de aquí que son ejercicios de calibración, ¿vale?

5
00:00:51,340 --> 00:01:09,879
Entonces, bueno, son ocho ejercicios, me parece, que vamos a empezar a hacer siete ejercicios que empezaremos a hacer aquí hoy en clase y el resto os los dejo para que los hagáis y si tenéis alguna duda, son todos bastante parecidos pero con sus matices.

6
00:01:09,879 --> 00:01:23,359
¿Vale? Tenemos tres tipos en calibración. La calibración por patrones externos, que es la que vimos el otro día, y luego tenemos adiciones estándar y patrón interno, que las vamos a ver hoy.

7
00:01:24,140 --> 00:01:36,280
Tenéis un par de ejercicios de cada para practicar, ¿vale? Entonces, vamos a ello. Bueno, vamos a dar un mini repaso de los parámetros de calidad de un método analítico, ¿vale?

8
00:01:36,280 --> 00:01:48,260
Porque luego esto lo vamos a hilar con ciertos parámetros de nuestra recta de calibrado, ¿vale? Pero vamos a recordar que son cosas que ya hemos visto, hemos nombrado, algunas hemos definido y hemos incluso cuantificado, ¿no?

9
00:01:48,260 --> 00:02:08,300
Con la primera parte de estadística descriptiva que vimos, que son los parámetros de calidad que tiene un método analítico. Entonces, tenemos unos parámetros estadísticos y otros que son complementarios, ¿vale? Normalmente vamos a trabajar con los estadísticos en cuestión de cálculos, ¿vale?

10
00:02:08,300 --> 00:02:22,460
Y dentro de los estadísticos tenemos los supremos, que son la exactitud, que acordaos que la exactitud es lo cercano que está el resultado de mi análisis al valor real y la representatividad.

11
00:02:22,460 --> 00:02:37,460
¿Qué quiere decir esto? Que mi análisis realmente me esté dando los resultados, me esté proporcionando los resultados que yo estoy evaluando, que esté utilizando la técnica que me está dando la respuesta que yo busco que sea representativa de mi problema analítico.

12
00:02:38,300 --> 00:02:48,840
Parece un poco obviedad, pero es un parámetro que se considera. Y luego tenemos otra serie de parámetros que son muy importantes y que podemos cuantificar de alguna manera.

13
00:02:49,180 --> 00:02:57,180
Ya hemos visto, por ejemplo, la precisión, que si os acordáis la relacionábamos con la desviación que tenían una serie de medidas.

14
00:02:57,979 --> 00:03:05,520
Cuanto más alejados estaban nuestras medidas entre ellas, nuestros puntos de la diana, menor precisión teníamos.

15
00:03:05,520 --> 00:03:16,199
¿Cómo medimos la dispersión que tienen los puntos? Con las medidas dispersivas, como eran la varianza, el coeficiente de variación, la desviación típica, etc.

16
00:03:16,199 --> 00:03:28,659
Luego tenemos otros parámetros que es la sensibilidad. La sensibilidad es lo sensible que es un método, valga la redundancia, un método analítico.

17
00:03:28,659 --> 00:03:40,580
Las pequeñas variaciones en las condiciones, en la concentración del analito dan diferencias en la respuesta muy grandes.

18
00:03:40,580 --> 00:03:56,520
Eso es que un método es muy sensible, que es capaz de distinguir entre dos concentraciones muy cercanas, por ejemplo. Si es un método que es poco sensible y yo estoy evaluándolo, no va a tener la suficiente concreción para distinguirme entre dos valores que estén muy cercanos.

19
00:03:56,520 --> 00:04:15,520
En cambio, un método que es sensible sí, ¿vale? Luego tenemos el límite de detección y el límite de cuantificación, ¿vale? ¿Qué son estos límites? Creo que también lo hemos nombrado ya, pero el límite de detección es la cantidad mínima que podemos detectar de un analito, ¿vale?

20
00:04:15,520 --> 00:04:32,139
O sea, es la cantidad mínima que nos va a dar algún tipo de respuesta, un instrumento nos va a dar algún tipo de respuesta a esa cantidad. Por debajo de esa cantidad no vamos a ver nada, no somos capaces de detectar si hay analito o no hay analito, ¿vale?

21
00:04:32,139 --> 00:04:58,800
Y luego tenemos el límite de cuantificación. ¿Qué nos dice el límite de cuantificación? Es la cantidad mínima que podemos detectar con un cierto nivel de precisión. Esto sería que yo puedo detectar que hay o no hay a partir de una concentración, pero necesito que haya un poquito más para yo poder cuantificar cuánto tengo exactamente.

22
00:04:59,519 --> 00:05:02,939
Es la diferencia entre límite de detección y límite de cuantificación.

23
00:05:03,540 --> 00:05:05,139
Por lo tanto, ¿cuál de los dos será mayor?

24
00:05:08,730 --> 00:05:10,050
El de cuantificación siempre.

25
00:05:10,410 --> 00:05:14,050
El de detección es la primera vez que me sale una señal,

26
00:05:14,050 --> 00:05:20,949
pero que no tiene la potencia suficiente para que yo pueda cuantificarla.

27
00:05:21,110 --> 00:05:22,990
Y cuantificación es que ya tengo un poquito más,

28
00:05:23,089 --> 00:05:26,990
tengo una señal más definida y puedo decir cuánto tengo de mi analito.

29
00:05:27,649 --> 00:05:30,750
Luego tenemos el intervalo lineal y el intervalo dinámico.

30
00:05:30,750 --> 00:05:44,610
¿Qué es el intervalo lineal? Pues esto es muy importante porque hemos estado viendo con nuestro calibrado que nosotros tenemos unas respuestas que son lineales frente a unas concentraciones, ¿no?

31
00:05:44,610 --> 00:06:03,290
El otro día poníamos un ejemplo que yo tenía una disolución de un patrón de concentración 0, 2, 4, 6 y 8 y medía PPM, por ejemplo, y medía la absorbancia y me daba unos puntos que en una línea recta, ¿no? Si os acordáis.

32
00:06:03,970 --> 00:06:13,769
En ese intervalo, o sea, entre estas concentraciones que yo he dicho, en este caso, por ejemplo, 0 y 8, yo sé que mi respuesta es una línea recta, pero yo a partir de ese punto no sé lo que pasa.

33
00:06:14,610 --> 00:06:23,850
Quiero decir, a partir de ese punto, a lo mejor, en vez de seguir siendo una línea recta, de repente empieza a ser exponencial o cae en picado, etc.

34
00:06:24,129 --> 00:06:33,490
Entonces, el intervalo lineal es ese intervalo, ese trozo de concentraciones, o sea, ese trozo en el eje de las X en el que yo sé que mi respuesta es una línea recta

35
00:06:33,490 --> 00:06:44,230
y que realmente yo puedo utilizar, como hacíamos el otro día, midiendo una señal, puedo calcular la concentración de un analito siempre que esté dentro de ese intervalo.

36
00:06:44,610 --> 00:06:50,790
Fuera ya, pues no sé lo que pasará, porque no sé cómo va a seguir a partir de esa concentración mi línea recta.

37
00:06:50,910 --> 00:06:52,649
A lo mejor se convierte en otra cosa, ¿no?

38
00:06:53,269 --> 00:07:01,189
Y el intervalo dinámico es ese pequeño trozo que hay entre que el intervalo lineal deja de ser lineal, ¿no?

39
00:07:01,189 --> 00:07:03,689
Es como el punto de transición.

40
00:07:03,689 --> 00:07:08,149
Esto de intervalo dinámico no es tan importante el concepto, ¿vale?

41
00:07:08,170 --> 00:07:12,350
El intervalo lineal sí y límite de detección y cuantificación también.

42
00:07:13,250 --> 00:07:36,089
Luego, la selectividad. ¿Qué es la selectividad? Pues como de selectivo es mi método. ¿Esto qué quiere decir? Que si yo tengo un método, yo utilizo un reactivo que reacciona con muchas, muchas cosas, estoy perdiendo ese poder analítico porque realmente no estoy sabiendo si lo que me ha reaccionado es el analito que yo quiero o cualquier otro porque reacciona con muchos.

43
00:07:36,089 --> 00:07:48,089
En cambio, si es un método que es selectivo, yo sé que está reaccionando solamente con lo que a mí me interesa, con mi analito, y por lo tanto, pues lo puedo cuantificar.

44
00:07:49,769 --> 00:08:01,529
Luego, la robustez. ¿Qué es la robustez? Pues la tendencia, la no tendencia más bien que tiene un método a cambiar cuando cambiamos las condiciones.

45
00:08:01,529 --> 00:08:14,389
Cuanto más robusto sea, menos se van a ver afectados los resultados si cambian un poco las condiciones, que puede ser que varíe sensiblemente la temperatura o que varíe cualquier otro parámetro.

46
00:08:15,209 --> 00:08:30,069
Si un método es muy robusto, no le va a afectar mucho. En cambio, si no lo es, un pequeño cambio nos va a dar resultados muy distintos al resultado que consideramos real, al resultado más exacto.

47
00:08:30,069 --> 00:08:58,070
Entonces, lo ideal es que un método sea robusto para que pueda resistir a esas pequeñas variaciones que muchas veces son inevitables. Y luego tenemos otros parámetros que son ya más operativos, pueden medir la calidad de un método analítico, podemos establecer la calidad de un método analítico, pero ya no vamos a hacer esta evaluación matemática y digamos que son más complementarios.

48
00:08:58,070 --> 00:09:07,809
Entonces, tenemos operativos, rapidez, complejidad, grado de automatización, higiene y seguridad.

49
00:09:08,549 --> 00:09:18,289
Obviamente, si estamos evaluando un método, si un método no es lo suficientemente rápido, puede que no nos sirva, por muy preciso, muy exacto que sea.

50
00:09:18,289 --> 00:09:27,129
Si tenemos que estar cuatro días para hacer un análisis rutinario, es un método que vamos a tener que modificar o que sustituir por otro.

51
00:09:27,129 --> 00:09:50,169
Luego lo mismo, la complejidad instrumental o el higiene y la seguridad, si es un método que requiere el uso de reactivos que sean muy tóxicos o muy perjudiciales para la persona que los está manipulando, eso lo podemos evaluar como un parámetro, como calidad del método.

52
00:09:50,169 --> 00:10:06,549
Y luego obviamente los económicos, que son el coste de inversión y de aplicación. Coste de inversión, pues lo que nos cuesta el material que necesitamos, el equipo. Y luego el de aplicación, pues cada vez que lo utilizamos, el gasto que nos está repercutiendo.

53
00:10:07,529 --> 00:10:19,269
Ejemplo, que yo creo que esto ya lo vimos también y el que digo siempre, una impresora, que comprarla sale relativamente barato, puedes comprar una impresora por 30 euros, pero luego cuando se te acaba la tinta es muy, muy caro mantenerla.

54
00:10:19,269 --> 00:10:41,129
Sería el coste de inversión y el coste de aplicación. Esto como recapitulación, ¿por qué he contado todo esto otra vez? Porque a partir de nuestra recta de calibrado vamos a poder evaluar los parámetros de la sensibilidad, el límite de detección y el límite de cuantificación.

55
00:10:41,129 --> 00:10:45,669
entonces vamos a ello

56
00:10:45,669 --> 00:10:48,289
y el intervalo lineal también

57
00:10:48,289 --> 00:10:52,149
si, si hacemos suficientes

58
00:10:52,149 --> 00:10:54,909
pruebas, si, claro que si

59
00:10:54,909 --> 00:10:56,950
si seguimos normalmente

60
00:10:56,950 --> 00:11:01,110
hacemos una serie de patrones

61
00:11:01,110 --> 00:11:04,450
que suelen estar por debajo de ese intervalo

62
00:11:04,450 --> 00:11:05,950
en el que empieza a cambiar, pero por supuesto

63
00:11:05,950 --> 00:11:09,529
si seguimos haciendo patrones de concentración superior

64
00:11:09,529 --> 00:11:15,649
y vemos un punto en el que cambia, ya tenemos nuestro intervalo lineal, sí, sí, efectivamente.

65
00:11:17,110 --> 00:11:26,009
Entonces, bueno, esto es más de lo mismo, ¿no? Lo que hemos dicho, la exactitud, la precisión, bueno, repetibilidad y reproducibilidad,

66
00:11:26,009 --> 00:11:31,269
que también esto lo hemos hablado ya, estoy casi segura, solo para que lo sepáis y para recordarlo,

67
00:11:31,269 --> 00:11:46,549
que es una manera de evaluar cualitativamente la precisión, repetibilidad es que podamos repetir nuestro experimento y nos dé unos resultados consistentes, unos resultados muy parecidos.

68
00:11:46,549 --> 00:11:58,450
Cuando no tenemos una variabilidad, si yo, Elena, realizo un procedimiento y al día siguiente lo vuelvo a realizar,

69
00:11:58,610 --> 00:12:04,350
o al rato, entonces tengo las mismas condiciones, el mismo operador, el mismo equipo, los mismos reactivos, etc.

70
00:12:06,909 --> 00:12:13,809
Si lo que yo hago me da los mismos resultados las dos veces que lo he hecho, estaría evaluando la repetibilidad.

71
00:12:13,809 --> 00:12:36,429
En cambio, la reproducibilidad tiene un matiz que es una variación mayor. Eso significa que yo puedo obtener estos mismos resultados, pero haciendo este exponimiento en otro instituto, otra persona y con los mismos reactivos y el mismo procedimiento, porque es lo que estamos evaluando, el mismo método.

72
00:12:36,429 --> 00:12:49,929
Entonces, bueno, si ese ensayo se realiza y los resultados son muy parecidos, estaríamos evaluando, sería reproducible, ¿no? La reproducibilidad.

73
00:12:49,929 --> 00:13:11,110
Vale, ahora la sensibilidad, ¿qué es lo que hemos dicho? Que es la capacidad de un método para distinguir entre valores que sean muy parecidos, ¿no? O sea, si tengo dos concentraciones muy cercanas entre ellas, si tengo un método que es poco sensible, me va a dar la misma medida de la señal, entonces no voy a poder distinguir la una de la otra.

74
00:13:11,110 --> 00:13:30,269
En cambio, si mi método es muy sensible, sí que voy a poder distinguir entre ellas. ¿Y cómo la podemos evaluar? La podemos evaluar con la pendiente de la recta de calibrado. La sensibilidad se establece como la pendiente de nuestro calibrado, con esas unidades.

75
00:13:30,990 --> 00:13:41,409
Si os preguntan, que lo tenemos en algún ejercicio de los que he puesto, cuál es la sensibilidad del método, tú haces tu recta de calibrado y tu sensibilidad es la B en las unidades que sean.

76
00:13:41,409 --> 00:13:51,169
Si estás representando, por ejemplo, una concentración en ppm frente a una absorbancia, tu pendiente es B ppm.

77
00:13:51,169 --> 00:14:00,350
vez, ¿vale? Y por sí sola no es un indicador de la calidad muy preciso, muy completo, entonces

78
00:14:00,350 --> 00:14:05,629
se suele complementar con el límite de detección y el límite de cuantificación para evaluar,

79
00:14:05,690 --> 00:14:13,269
¿vale? Pero vamos a ver la sensibilidad. ¿Por qué la pendiente nos indica una sensibilidad

80
00:14:13,269 --> 00:14:22,110
mayor o menor. Pues imaginaos, yo aquí, por ejemplo, esta de aquí está más inclinada,

81
00:14:22,250 --> 00:14:26,669
más inclinada, o sea, cuesta más subir esta montaña que esta, tiene una pendiente más

82
00:14:26,669 --> 00:14:32,330
grande. Esta de aquí tiene una pendiente más pequeña. Hemos dicho que la sensibilidad

83
00:14:32,330 --> 00:14:37,629
es mayor cuanto mayor sea la pendiente. ¿Por qué es esto? Porque imaginaos, vamos a poner

84
00:14:37,629 --> 00:14:45,970
un caso concreto, que yo tengo una muestra de 6 ppm y otra muestra que su concentración

85
00:14:45,970 --> 00:14:53,990
son 8 ppm. Voy a empezar con el que tiene alta sensibilidad de arriba. Si yo subo aquí,

86
00:14:54,669 --> 00:15:03,509
6 ppm se corresponden con esta señal de aquí más o menos, alrededor de 9, y 8 ppm si subo

87
00:15:03,509 --> 00:15:07,690
Aquí se corresponden con una señal de 12.

88
00:15:08,230 --> 00:15:18,789
O sea, dos ppm de concentración significan de 9 a 12 esta diferencia de señal medida.

89
00:15:19,629 --> 00:15:26,289
O sea, realmente aquí hay un trozo grande, hay una diferencia significativa que se puede apreciar muy fácilmente

90
00:15:26,289 --> 00:15:29,570
entre esta distancia de aquí y esto de aquí.

91
00:15:29,570 --> 00:15:32,190
Cuando yo mida voy a tener esta distancia de diferencia.

92
00:15:32,190 --> 00:15:58,450
¿Vale? Ahora, imaginaos que quiero hacer lo mismo. Voy a medir la señal de dos muestras que tengo, que una tiene 6 ppm de concentración y la otra 8. Y lo hago con el método este, el que está en color amarillo. ¿Vale? 6 ppm me dan una señal de aproximadamente 3, ¿no? Y 8 ppm me dan una señal de 4. ¿Vale?

93
00:15:58,450 --> 00:16:22,250
O sea, hay una diferencia, una unidad de señal analítica de diferencia. En cambio, en este método teníamos tres de diferencia, ¿vale? O sea, cuando yo tengo concentraciones aquí que estén muy cercanas va a ser mucho más difícil discernirlas midiendo una señal que cuando tengo concentraciones cercanas aquí, ¿no?

94
00:16:22,250 --> 00:16:38,190
Os he puesto el caso de 6 y 8, pero imaginaos que hacemos esto a escala y tenemos una muestra que tiene 6,3 y otra que tiene 6,5, que queremos distinguir en este trocito de aquí.

95
00:16:39,070 --> 00:16:45,470
Aquí prácticamente no vamos a notar la diferencia en la señal, en cambio aquí sí que vamos a tener una diferencia mayor.

96
00:16:45,470 --> 00:17:03,470
¿Vale? Entonces, cuando tenemos nuestro calibrado, gracias a nuestra recta de calibrado, podemos ver cómo es la sensibilidad de un método o comparar, pues aquí mismo si vemos esto, sabríamos que este método, el método azul, es más sensible que el método naranja.

97
00:17:03,470 --> 00:17:09,890
naranja. Ahora, el intervalo de linealidad, como bien ha dicho, no sé quién ha sido

98
00:17:09,890 --> 00:17:16,789
de vosotras, también lo podemos ver haciendo un calibrado. Normalmente nosotros, lo que

99
00:17:16,789 --> 00:17:24,849
vimos el otro día, siempre todos los calibrados que hemos hecho han estado siempre dentro

100
00:17:24,849 --> 00:17:29,329
del intervalo lineal, pero sí que es verdad que puede ser un ejercicio cualquiera que

101
00:17:29,329 --> 00:17:33,890
Y aquí te den un calibrado y justo el último punto esté por aquí arriba.

102
00:17:34,309 --> 00:17:38,230
Tú vas haciendo tus puntos y de repente tu calibrado se va.

103
00:17:38,630 --> 00:17:44,910
Pues es porque a partir de ahí, la respuesta ya no es lineal, ya no se comporta como una línea recta.

104
00:17:45,089 --> 00:17:51,309
Entonces, en ese punto, tú ya no puedes utilizar tu ecuación de la recta que has establecido

105
00:17:51,309 --> 00:17:55,109
para hacer los cálculos de concentración a partir de la señal.

106
00:17:55,109 --> 00:18:09,910
Entonces, bueno, en esta gráfica lo tenemos aquí, tenemos nuestro intervalo lineal, que es el trozo en el que es lineal, y dinámico, que es cuando todavía lo podemos llegar, no cometemos un error tan grande si lo consideramos.

107
00:18:10,309 --> 00:18:21,869
Y a partir de un punto en el que hay una desviación mayor de la permitida, pues ya estamos hablando de un… que ya no es lineal nuestro método, ¿vale?

108
00:18:21,869 --> 00:18:35,390
Luego, la selectividad, pues ya lo hemos definido, la capacidad del método para proporcionar una señal analítica originada por el analito de interés, sin que ésta se dé afectada por otros compuestos presentes, ¿vale?

109
00:18:35,390 --> 00:18:56,130
O sea, si yo tengo, lo que hemos dicho antes, un complejante que forma complejos con muchos iones distintos, pues no me sirve para evaluar un ion en concreto. En cambio, si tengo uno que sea muy selectivo, que sea específico para el analito que yo estoy queriendo determinar, lo voy a poder hacer.

110
00:18:56,130 --> 00:19:08,130
Entonces, la selectividad es esa capacidad del método de proporcionar una señal originada solo por el arreglito de interés y no con los demás interferentes.

111
00:19:08,130 --> 00:19:24,950
Aquí, bueno, esto lo vimos al principio, pero tampoco viene mal repetirlo, los errores en el proceso de medida, ¿no? Errores sistemáticos. Este es nuestro valor real, ¿vale?

112
00:19:24,950 --> 00:19:51,369
Y luego tenemos errores sistemáticos, que son el B y el C, que son el B es proporcional porque se va alejando cada vez más de nuestro valor real, el C es aditivo, es constante, porque siempre se desvía en la misma proporción, y el D es una combinación de ambos.

113
00:19:51,369 --> 00:19:56,089
se desvía de una manera constante

114
00:19:56,089 --> 00:19:58,630
y a su vez se va alejando

115
00:19:58,630 --> 00:20:01,230
esto como recordatorio

116
00:20:01,230 --> 00:20:06,029
la robustez que es la capacidad de un método

117
00:20:06,029 --> 00:20:08,210
para tolerar pequeñas modificaciones

118
00:20:08,210 --> 00:20:13,450
y vamos ahora al límite de detección

119
00:20:13,450 --> 00:20:14,950
y el límite de cuantificación

120
00:20:14,950 --> 00:20:16,390
que hemos definido

121
00:20:16,390 --> 00:20:20,089
lo que son conceptualmente

122
00:20:20,089 --> 00:20:25,049
Y vamos a ver cómo podemos calcularlos a partir de un calibrado.

123
00:20:25,670 --> 00:20:33,630
Entonces, son parámetros que nos determinan la capacidad de análisis de un método analítico.

124
00:20:33,910 --> 00:20:37,410
Estamos evaluando la calidad de los métodos.

125
00:20:37,670 --> 00:20:44,990
Entonces, nos definen la sensibilidad, que es la mínima cantidad de analito que puede producir una señal significativa.

126
00:20:46,049 --> 00:20:47,910
¿Esto qué significa?

127
00:20:47,910 --> 00:21:06,410
Cuando yo tengo, cuando estoy realizando cualquier ensayo, cuando estoy midiendo una señal, yo tengo un ruido, este ruido de aquí de fondo, entonces si yo tengo un analito y su señal está por aquí en este trozo, yo no voy a ser capaz de detectarlo.

128
00:21:06,410 --> 00:21:27,609
Yo no sé si realmente tengo analito o eso es ruido instrumental. Entonces, hay un parámetro que está establecido según unos criterios que se han establecido así, que nos dice que a partir de una cierta distancia en la que nos alejamos de este ruido instrumental, sí que podemos detectar nuestro analito.

129
00:21:27,609 --> 00:21:45,990
¿No? Entonces, siempre vamos a tener, pues tenemos nuestra concentración, esto de aquí es nuestro ruido y si os dais cuenta, en esta gráfica, aquí, aunque yo tenga analito, soy incapaz de distinguirlo de ese ruido, ¿vale?

130
00:21:46,990 --> 00:22:03,289
Aquí vamos avanzando y llega un punto en el que ya hay una distancia prudencial, que ahora veremos cómo se evalúa matemáticamente y no con palabras, hay una distancia prudencial entre ese ruido que es señal de fondo que no tiene nada que ver con mi analito y mi analito realmente, ¿vale?

131
00:22:03,289 --> 00:22:13,609
Entonces, aquí, en este punto, yo lo defino como límite de detección y a partir de ese punto yo puedo decir si tengo analito o no tengo analito.

132
00:22:14,049 --> 00:22:19,569
Lo que no puedo decir es cuánto tengo, ¿vale? Esto es como un test COVID o un test de embarazo.

133
00:22:20,009 --> 00:22:23,349
Puedo decir si sí o si no, pero no puedo decir cuánto, ¿vale?

134
00:22:23,829 --> 00:22:31,549
Y luego tenemos el límite de cuantificación, que hay una distancia mayor y en el que ya a partir de aquí yo te puedo decir,

135
00:22:31,549 --> 00:22:43,849
Ya no te digo solo si sí o si no, ya te puedo decir qué cantidad de analito tengo. Después llega un punto en el que acaba nuestro intervalo de linealidad, se satura, etc. Esto para que lo veáis gráficamente.

136
00:22:44,849 --> 00:22:54,650
Entonces, límite de detección. Esto lo tenéis todo también en vuestros apuntes que tenéis en el aula virtual, los que vienen de base.

137
00:22:55,289 --> 00:23:06,829
El límite de detección es la concentración de analito que proporciona una señal en el instrumento significativamente diferente de la señal del blanco o ruido de fondo.

138
00:23:06,829 --> 00:23:19,490
El límite de detección es la mínima concentración de analito en una muestra que se puede detectar en un proceso de análisis con un nivel aceptable de confianza, pero no necesariamente cuantificada.

139
00:23:20,150 --> 00:23:28,009
Es necesario para medidas cualitativas en las que solo necesita saber si el analito está o no está presente, pero no en qué cantidad.

140
00:23:28,009 --> 00:23:39,009
Y el límite de cuantificación, por definición, es la concentración mínima de analito que puede determinarse con un nivel aceptable de exactitud y precisión.

141
00:23:40,009 --> 00:23:51,809
Es el límite inferior para medidas cuantitativas precisas como he puesto la detección cualitativa. En este punto, a partir de aquí, de aquí hacia arriba, o sea, esta concentración y más, las puedo detectar.

142
00:23:51,809 --> 00:24:02,269
Lo que no puedo es las que estén por debajo. El conocer este valor nos orienta a la hora de elegir un método de cuantificación u otro de un analito en una muestra.

143
00:24:03,049 --> 00:24:17,690
¿Qué pasa si estoy entre cero y mi límite de detección? No puedo saber si tengo analito o no. Si estoy entre mi límite de detección y mi límite de cuantificación, puedo saber si sí o si no, pero no puedo saber cuánto.

144
00:24:17,690 --> 00:24:39,130
Y si estoy por encima de mi límite de cuantificación, puedo saber qué cantidad tengo, qué concentración. ¿Vale? ¿Y cómo se sabe esto? Porque se ha establecido un, bueno, pues la IUPAC ha definido, ha establecido unos parámetros para poder definir este límite de detección y este límite de cuantificación. ¿Vale?

145
00:24:39,130 --> 00:25:00,069
¿Y esto cómo es? Bueno, pues el límite de detección es la I del límite de detección, o sea, la señal que nos da el límite de detección es la I de la media de la señal del blanco, que ahora hacemos un recordatorio de lo que son los blancos, más tres veces la desviación estándar del blanco, ¿vale?

146
00:25:00,069 --> 00:25:27,490
Y el límite de cuantificación es la señal del blanco más 10 veces la señal del blanco, ¿vale? O sea, se calculan de la misma manera, pero en el caso del límite de detección se multiplica por 3 la desviación del blanco, desviación estándar o desviación típica, acordaos que son sinónimos y que es la raíz cuadrada de la varianza, que es ese cuadrado, ¿vale?

147
00:25:27,490 --> 00:25:38,869
En este caso se multiplica por 3 la SUP y en este caso se multiplica por 10, siempre es más grande el límite de cuantificación que el límite de detección, ¿vale?

148
00:25:41,130 --> 00:25:43,210
Entonces, bueno, en la práctica...

149
00:25:43,210 --> 00:25:47,710
Elena, ¿la señal del blanco es el ruido de fondo?

150
00:25:47,710 --> 00:26:06,750
Sí, porque realmente nosotros en nuestro blanco lo que estamos haciendo es medir todos los… no sé el río de fondo exactamente, está muy ligado, pero realmente tú en tu blanco puedes tener unos interferentes.

151
00:26:06,750 --> 00:26:20,410
Imagínate que nosotros estamos haciendo un ensayo, estamos midiendo conductimetría, por conductimetría la conductividad de una disolución de cloruro de sodio en agua.

152
00:26:20,410 --> 00:26:35,410
Nuestro blanco es el agua, el agua va a tener una cierta conductividad que va a ser obviamente menor que cuando añadimos sal, pero va a estar ahí esa pequeña cantidad que tenemos que considerar.

153
00:26:36,750 --> 00:26:54,549
Entonces, realmente lo que estamos haciendo es el ruido, pero no es el ruido instrumental, ¿vale? Porque estamos considerando todos los factores. Estamos considerando también el factor de lo que puede contribuir nuestro disolvente, por ejemplo, a señalar nuestra técnica en concreto.

154
00:26:55,430 --> 00:27:03,809
En este caso yo, por ejemplo, voy a hacer una medida de conductimetría en disoluciones de cloruro de sodio

155
00:27:03,809 --> 00:27:14,869
y voy a hacerme mis patrones con lo que dijimos el otro día, al 0, al 0,1, al 0,2, al 0,3% de cloruro de sodio en agua.

156
00:27:16,210 --> 00:27:21,849
Para saber qué aportación me está dando ese agua a la conductividad, hago un blanco.

157
00:27:21,849 --> 00:27:43,990
El blanco es coger mi vaso tal cual y echarle agua destilada. Entonces, la conductividad que me dé esa agua destilada es el I sub B. Yo hago 10 medidas, por ejemplo, imagínate y me da 0,01, 0,015, 0,012, 0,012, 0,018, etc.

158
00:27:43,990 --> 00:28:03,329
Yo hago la media de todas esas medidas y la desviación estándar. Cojo esa media y multiplico por 3 la desviación estándar y esa va a ser la señal más pequeña que me va a poder detectar mi instrumento para distinguirlo de ese blanco, ese ruido instrumental.

159
00:28:07,220 --> 00:28:07,960
Vale, gracias.

160
00:28:07,960 --> 00:28:24,140
Entonces, en la práctica esto ya haremos ejercicios cuando acabemos con esta parte para no meter tanto lío, cuando acabemos con la parte de calibración pura meteremos algún ejercicio de límites de detección, ¿vale?

161
00:28:24,140 --> 00:28:40,599
Porque en la práctica, si no tenemos los datos, se puede sustituir este valor de la desviación del blanco, la desviación estándar de esas señales del blanco que hemos medido, por la desviación estándar del ajuste de mínimos cuadrados de la recta de calibrado, ¿vale?

162
00:28:40,599 --> 00:28:51,299
Que se calcula con esta ecuación de aquí. Pero lo que os digo ahora, vamos a quedarnos con los conceptos de lo que es el límite de detección y el límite de cuantificación y luego los calculamos, ¿vale?

163
00:28:51,299 --> 00:29:20,559
Vale, entonces, por ejemplo, esto es un ejemplo un poco sencillo, simplista, pero bueno, imaginaos que hemos cogido, hemos medido 24 veces nuestra señal del blanco, en el caso que hemos dicho ahora, hemos cogido agua destilada y hemos medido la conductividad 24 veces y hemos hecho la media de las medidas que nos ha dado y la desviación estándar y nos ha dado estos valores de aquí, ¿no?

164
00:29:20,559 --> 00:29:24,779
Por ejemplo, ¿cómo calcularíamos la señal mínima, el límite de detección?

165
00:29:25,339 --> 00:29:33,660
Multiplicando el valor promedio del blanco más tres veces la desviación estándar del blanco y me da esto.

166
00:29:34,160 --> 00:29:36,640
Ahora te digo, ¿y cómo calcularía el de cuantificación?

167
00:29:37,279 --> 00:29:40,119
Exactamente igual, pero cambiando este 3 por un 10.

168
00:29:41,220 --> 00:29:47,240
Porque yo, a partir de cierta altura que se diferencia de esto,

169
00:29:48,319 --> 00:29:50,500
mira, aquí tenemos mezclado el blanco y el ruido.

170
00:29:50,559 --> 00:30:07,380
Para quien me lo ha preguntado, el ruido sería esta que está representada en negro y el blanco sería lo que está representado en rojo, que se solapan un poco.

171
00:30:07,380 --> 00:30:27,359
Pero tenemos esas dos contribuciones, tanto el ruido de fondo que tenga en el instrumento como el resto de interferentes que yo tenga dentro de mi blanco que realmente están interfiriendo de alguna manera en la señal, la están aumentando ligeramente y no lo está aumentando mi analito.

172
00:30:27,359 --> 00:30:49,779
Este pequeño trocito de aquí no corresponde a mi analito, corresponde al blanco. Por eso, si este trozo de aquí lo multiplico por tres, ya tengo una distancia lo suficientemente amplia para poder distinguir perfectamente y sin ningún tipo de duda que aquí no tengo analito y aquí sí tengo analito.

173
00:30:49,779 --> 00:31:05,220
Si yo tuviese una señal por aquí, no lo podría decir porque está por debajo de mi límite de detección. Esto de aquí de SKIN, olvidaos que es que he cogido este gráfico porque he visto que se veía muy bien, pero nada, esto lo voy a borrar de hecho.

174
00:31:05,220 --> 00:31:13,720
Vale, glosario, repetimos términos que hay veces que los damos por hecho

175
00:31:13,720 --> 00:31:19,359
Entonces un blanco, lo que hemos dicho es una muestra que no tiene el analito de interés

176
00:31:19,359 --> 00:31:26,759
En este caso, si yo estoy haciendo disoluciones porque estoy evaluando la conductividad de disoluciones de cloruro de sodio

177
00:31:26,759 --> 00:31:31,440
Mi blanco van a ser muestras de agua destilada, de agua desionizada

178
00:31:31,440 --> 00:31:42,160
Y su función es servir como referencia para ver si tenemos posibles interferencias, podemos obtener una línea base o señal de referencia, etc.

179
00:31:42,980 --> 00:31:54,680
Luego, el intervalo de linealidad, que ya lo hemos dicho también, es el rango de concentraciones en el cual la respuesta del método analítico es directamente proporcional a la concentración del analito.

180
00:31:54,680 --> 00:32:07,880
O sea, yo puedo hacer mi ajuste por mínimos cuadrados y en ese intervalo yo sé que la respuesta de mi instrumento, mi señal, va a ser proporcional a la concentración que yo tenga de mi analito.

181
00:32:09,599 --> 00:32:12,779
Más allá de ese rango, la relación puede volverse no lineal.

182
00:32:13,940 --> 00:32:23,859
Y ahora vamos a lo que ya habíamos empezado el otro día, pero quería presentaros lo que era una recta de calibrado antes de ahondar en los límites y en la sensibilidad.

183
00:32:24,559 --> 00:32:32,220
Entonces, lo que dijimos, calibración instrumental o analítica, que es la que estamos ahora nosotros, la que vamos a trabajar, ¿no?

184
00:32:32,220 --> 00:32:43,160
Que son el conjunto de operaciones que establece la relación entre los valores indicados por un instrumento, o sea, la señal, y valores conocidos de una magnitud química.

185
00:32:43,559 --> 00:32:48,839
En nuestro caso vamos a utilizar la concentración, ¿vale? Casi siempre se utiliza la concentración.

186
00:32:48,839 --> 00:33:04,660
Entonces, acordaos que teníamos nuestro ajuste por mínimos cuadrados, que el ajuste este lo que nos hace es, nuestros puntos les busca una línea recta que encaje de la mejor manera posible abarcándolos a todos, ¿vale?

187
00:33:04,660 --> 00:33:26,420
Entonces, si nuestros puntos realmente están muy alineados, hay una correlación muy grande, una correlación que es una relación entre dos variables, la x y la y, vamos a tener un parámetro r cuadrado, o r, muy cercano a 1.

188
00:33:26,420 --> 00:33:32,980
Cuanto más cercano a 1 esté significa que mejor ajustada está nuestra recta

189
00:33:32,980 --> 00:33:37,519
O sea que nuestros puntos realmente, experimentalmente los puntos que he obtenido

190
00:33:37,519 --> 00:33:42,299
Se parecen mucho, mucho, mucho al modelo matemático ideal de una línea recta

191
00:33:42,299 --> 00:33:44,660
Eso lo evalúo con r cuadrado

192
00:33:44,660 --> 00:33:50,440
Lo elevamos al cuadrado porque acordaros que si la pendiente es positiva o negativa

193
00:33:50,440 --> 00:33:54,680
Pues mi r también puede ser desde menos 1 hasta más 1

194
00:33:54,680 --> 00:34:07,700
¿Vale? Entonces, lo evaluamos con r al cuadrado. Aquí lo veis que, bueno, pues el valor absoluto de r igual a 1, si r o r al cuadrado es igual a 1, significa que tengo correlación total.

195
00:34:08,139 --> 00:34:18,099
O sea, para 0, 0, para 1, 1, para 2, 2, para 3, 3, mi recta es absolutamente perfecta. Esto es el caso ideal que nos sucede. ¿Vale?

196
00:34:19,079 --> 00:34:27,960
¿Qué es lo que nosotros solemos obtener en el laboratorio, en nuestros laboratorios con los métodos que nosotros vamos a utilizar?

197
00:34:28,500 --> 00:34:38,000
Vamos a obtener unos coeficientes de correlación muy cercanos a 1, idealmente lo que buscamos es que sean mayores a 0,99, ¿vale?

198
00:34:38,000 --> 00:34:45,659
O sea, un R cuadrado de 0,93 hay algo que evaluar porque es una correlación muy mala, ¿vale?

199
00:34:46,400 --> 00:34:55,800
Entonces, acordaos que tenemos aquí nuestros puntos experimentales, que yo, estas concentraciones de aquí, cuando estamos haciendo un calibrado por patrones externos,

200
00:34:55,800 --> 00:35:07,019
que es el más básico, el más sencillo, el que es más rápido, porque tenemos que hacer menos procedimientos intermedios,

201
00:35:07,599 --> 00:35:15,199
lo que hacemos es, con unas concentraciones conocidas, y esto es conocido porque lo he hecho yo, o sea, yo tengo mis disoluciones,

202
00:35:15,199 --> 00:35:17,619
de una concentración perfectamente conocida.

203
00:35:18,159 --> 00:35:20,559
Y a esas disoluciones que yo he preparado en mis frascos,

204
00:35:20,719 --> 00:35:30,420
o sea, yo tengo cinco matraces con cinco concentraciones que yo he preparado.

205
00:35:30,579 --> 00:35:36,940
A cada uno de ellos le mido una respuesta instrumental con el instrumento que esté utilizando.

206
00:35:37,619 --> 00:35:43,639
Y yo ya voy a tener unos puntos reales de mi disolución esta me da esta señal.

207
00:35:43,639 --> 00:36:07,400
Pues hago aquí un punto, mi disolución esta me da esta señal, otro punto, etc. ¿Vale? Que son mis puntos azules, que son puntos reales. Luego yo voy a hacer un ajuste matemático para obtener esta línea de aquí, que lo que me hace el ajuste por mínimos cuadrados, esta línea roja, es darme la ecuación que me representa estos puntos, ¿no?

208
00:36:07,400 --> 00:36:24,519
O sea, si yo tengo una ecuación y luego sustituyo uno de estos valores reales, me va a dar una… perdón, si sustituyo, por ejemplo, una señal que me ha dado una concentración de aquí, me va a dar muy, muy, muy parecido, ¿no?

209
00:36:24,519 --> 00:36:28,199
siempre que tenga un ajuste, un R cuadrado bueno, ¿vale?

210
00:36:28,199 --> 00:36:33,159
Entonces acordaos que el R cuadrado es lo que me cuantifica el ajuste, el coeficiente R,

211
00:36:33,860 --> 00:36:37,539
y luego la ecuación de mi recta, la ecuación de una recta, siempre es igual,

212
00:36:37,679 --> 00:36:42,980
Y es igual a BX más A, ¿vale? Y es igual a A más BX, da lo mismo.

213
00:36:42,980 --> 00:36:51,460
Lo importante es que la B, lo que multiplica la X es la pendiente, ¿vale?

214
00:36:51,460 --> 00:36:53,559
y la A, la ordenada en el origen.

215
00:36:54,059 --> 00:36:57,980
Acordaos que ya lo hemos visto en esta clase al principio,

216
00:36:58,599 --> 00:37:01,239
que la B me indica la sensibilidad de mi método.

217
00:37:01,239 --> 00:37:03,239
O sea, que si yo tengo dos rectas de calibrado,

218
00:37:03,639 --> 00:37:05,420
puedo ver si una B es mayor que la otra,

219
00:37:05,800 --> 00:37:09,179
pues que la sensibilidad va a ser mayor.

220
00:37:09,420 --> 00:37:11,199
¿Por qué? Pues por lo que hemos dicho.

221
00:37:12,099 --> 00:37:16,440
Mayor pendiente, va a haber mayor distancia entre dos concentraciones

222
00:37:16,440 --> 00:37:19,019
en la señal instrumental que me dan.

223
00:37:19,019 --> 00:37:25,679
Menor pendiente, va a ser mucho más difícil discernir una señal para dos concentraciones que están cercanas.

224
00:37:26,659 --> 00:37:30,239
Entonces, ¿cómo hacíamos el calibrado? Por patrones externos.

225
00:37:30,619 --> 00:37:36,179
Nos hacíamos nuestros patrones, cogíamos una disolución madre y la íbamos diluyendo.

226
00:37:36,920 --> 00:37:41,780
A lo mejor la disolución madre la tenemos que preparar porque no la tenemos,

227
00:37:41,960 --> 00:37:46,679
entonces tendremos que pesar una masa exacta que hayamos calculado, etc.

228
00:37:46,679 --> 00:38:02,639
Y hacemos nuestras soluciones estándar con unas concentraciones crecientes. Partimos de cero, sí, vamos a incluir el blanco y vamos añadiendo analito en un orden creciente.

229
00:38:03,159 --> 00:38:09,519
Luego, una vez que tenemos hecho esos patrones, vamos a medir la señal que me da cada uno de ellos.

230
00:38:09,519 --> 00:38:17,119
De todas las disoluciones que yo he preparado, que suelen ser 5 o 6, mido la señal de cada una de ellas.

231
00:38:17,500 --> 00:38:24,559
Y luego represento estas concentraciones, que yo ya sé porque las he calculado y las he preparado yo, con estas señales que acabo de medir.

232
00:38:25,400 --> 00:38:33,239
Con eso hago mi gráfica y puedo calcular mi recta de calibrado con el método de mínimos cuadrados,

233
00:38:33,380 --> 00:38:37,079
que acordaos que en la calculadora se hace como regresión lineal.

234
00:38:37,500 --> 00:38:43,940
Ahí ya voy a tener mi parámetro b, que es la pendiente, mi parámetro a, que es la ordenada en el origen,

235
00:38:43,940 --> 00:38:50,320
y la r cuadrada, que es el ajuste, lo bien ajustada que están mis puntos a esa línea recta,

236
00:38:50,679 --> 00:38:52,980
a esa ecuación matemática que yo acabo de calcular.

237
00:38:53,880 --> 00:39:03,219
¿Qué pasa luego? Que yo tengo una muestra de la que no tengo ni idea de la concentración, yo le mido la señal, una muestra de que sé que tiene ese analito, ¿vale?

238
00:39:04,139 --> 00:39:07,380
Tampoco es magia, pero bueno, estamos trabajando con los analitos, ¿no?

239
00:39:08,420 --> 00:39:15,280
No sé qué concentración tiene, ¿vale? Pues le mido esa señal y lo interpolo en la recta de calibrado.

240
00:39:15,280 --> 00:39:31,760
O sea, yo estoy haciendo señal, que es la Y, frente a concentración, que es la X, tengo A y tengo B, ¿no? Pues ahora, si mido una señal, tengo Y, porque es la señal que acabo de medir, tengo A y tengo B.

241
00:39:31,760 --> 00:39:40,840
Solo me queda despejar la X y la X me va a dar la concentración que tiene esa muestra, ¿vale?

242
00:39:42,860 --> 00:39:54,420
¿Cosas que nos podían pasar aquí? Pues que a lo mejor yo meto mis datos en la calculadora, calculo mi recta de calibrado y de repente voy a ver la R cuadrada y me dice que es 0,86.

243
00:39:54,420 --> 00:40:17,579
Y digo, ostras, hay algo ahí que no está bien, ¿no? ¿Qué puede ser? Pues que me haya equivocado o que alguno de estos puntos, que puede ser el último porque se ha acabado el intervalo lineal, o uno de estos, intermedio, porque yo he cometido un error al medir cual cuantifica, pues alguno de estos puntos está por aquí arriba, ¿no?

244
00:40:17,579 --> 00:40:30,460
Entonces, me estropea mi línea recta, ya no tengo un ajuste tan perfecto. ¿Qué hago? Elimino ese punto y vuelvo a calcular mi R cuadrado. Si ese R cuadrado ahora me da de 0,99, pues bien.

245
00:40:30,460 --> 00:40:48,599
Bien, ¿qué pasa? Que si yo lo he representado y tengo un punto aquí, otro aquí, otro aquí, pues tendré que repetir mi calibrado. Esto es cuando tenemos que eliminar un solo punto porque he podido cometer un error o lo que decimos, el punto final, porque está por encima de ese intervalo en el que yo tengo una línea recta.

246
00:40:48,599 --> 00:41:06,880
¿Vale? ¿Cuándo podemos utilizar un calibrado por patrones externos? Pues cuando tenemos casos muy ideales. Las muestras y los patrones tienen una composición y matriz, que es todo lo que no es mi analito pero que está en mi muestra, que sean muy similares.

247
00:41:06,880 --> 00:41:16,519
el analito tiene que tener una respuesta lineal en ese rango, no tiene que haber interferencias, es el caso ideal cuando utilizamos patrones externos.

248
00:41:17,579 --> 00:41:24,420
Y ahora nos vamos al siguiente calibrado cuando no tenemos todas estas condiciones ideales, cuando ya tenemos efecto de la matriz, etc.

249
00:41:24,420 --> 00:41:35,400
Y este es el calibrado por adiciones estándar. Os enseño aquí primero la gráfica, pero primero vamos a ver cómo procedemos.

250
00:41:36,880 --> 00:41:51,260
¿Cómo hacemos adiciones estándar? Pues es una técnica de calibración que mejora la precisión de las mediciones cuando pueden tener interferencias de la matriz, es decir, efectos de componentes presentes que pueden afectar la respuesta del analito.

251
00:41:51,860 --> 00:42:04,179
Por ejemplo, el otro día que yo hice un calibrado de patrones externos con una muestra de vino y alguna compañera me dijo, pero esto no sería un poco genérico, un poco generalista y totalmente de acuerdo.

252
00:42:04,639 --> 00:42:16,039
Dependiendo del tipo de análisis, si hay interferentes porque es una muestra muy compleja, el vino igual sí que puede ser que está ahí en el límite de que se puedan hacer patrones externos o no.

253
00:42:16,820 --> 00:42:29,880
Pero cuando tenemos muestras que son más complejas porque tienen una mezcla y no es un analito en un disolvente y ya, tenemos que utilizar un calibrado distinto al de los patrones externos.

254
00:42:29,880 --> 00:42:48,159
Pues bueno, por suelos, alimentos, agua, muestras de agua complejas, sangre, etc. Matrices que sean complejas. Entonces, bueno, el efecto matriz, lo que os he dicho, la matriz está compuesta por todos los elementos presentes en la muestra, además del analito.

255
00:42:48,159 --> 00:43:09,480
Y el efecto de la matriz es una interferencia que ocurre en análisis químico cuando los componentes afectan a la respuesta del instrumento. ¿Esto qué quiere decir? Es una interferencia muy grande. Cuando yo estoy midiendo y mi señal, la señal que me está dando no se corresponde con la de mi analito, sino que se corresponde con la de mi analito y otras muchas cosas.

256
00:43:09,480 --> 00:43:17,480
Entonces, yo no soy capaz de cuantificar qué parte de esa señal es de mi analito y por eso hago un calibrado distinto, que es el de patrón interno.

257
00:43:19,320 --> 00:43:22,960
Patrón interno, no, perdonadme, adiciones estándar, por eso no os lo he subido.

258
00:43:23,340 --> 00:43:29,760
Adiciones estándar, patrón interno también nos sirve para eliminar los efectos de la matriz, pero se realiza de una manera diferente.

259
00:43:30,000 --> 00:43:32,719
Ahora estamos con adiciones estándar. ¿Cómo lo hacemos?

260
00:43:32,719 --> 00:43:55,719
Preparamos una muestra. Después añadimos concentraciones crecientes de estándar al analito. Vamos a ponerlo aquí con un dibujo que se ve más fácil. Tenemos nuestra disolución patrón, nuestra disolución madre a partir de la cual vamos a ir haciendo los patrones y aquí tenemos nuestra muestra.

261
00:43:55,719 --> 00:44:21,780
¿Cómo hacemos esto? Lo que hacemos es añadir muestra a nuestros patrones, la misma cantidad de muestra. O dicho de otra manera, tenemos distintos matraces con una cantidad constante de mi muestra, que es esta franja amarilla, de lo que yo quiero evaluar, y ahí le voy echando concentraciones crecientes de mi disolución madre.

262
00:44:21,780 --> 00:44:33,679
¿Vale? Es como lo que hemos hecho antes del patrón externo, es hacer esta parte de aquí, o sea, echar distintos volúmenes de disolución madre y enrasar con agua, porque luego enraso todo esto, todos tienen el mismo volumen, ¿vale?

263
00:44:33,679 --> 00:44:53,539
Entonces, lo que hago es, añado a cada uno de los patrones, este sería, imagínate, esta es mi disolución madre, esto sería cero de disolución madre, concentración cero, esto sería disolución uno, esto disolución dos ppm, esto tres ppm.

264
00:44:53,539 --> 00:45:06,519
La concentración de mi estándar va aumentando y la concentración de mi muestra se queda invariable porque siempre he hecho la misma cantidad sobre el mismo volumen total.

265
00:45:08,039 --> 00:45:17,579
Entonces, lo que hago es lo que os acabo de decir. Añadir cantidades diferentes de patrón a una serie de alícuotas de la muestra con el mismo volumen.

266
00:45:17,579 --> 00:45:36,260
Y todos los patrones se diluyen hasta un volumen determinado. Adiciones estándar y patrón interno a veces es un poco lioso. Entonces, en adiciones estándar, haced vuestra regla mnemotécnica, que tenemos misma cantidad de muestra, distinta cantidad de nuestro patrón, que va creciendo.

267
00:45:36,260 --> 00:45:56,000
Igual que hacíamos en el calibrado de patrón externo, ¿vale? Por patrón externo. Entonces, ¿qué hacemos? Nosotros representamos la señal, porque luego así hemos preparado nuestros patrones y luego les medimos su señal a cada uno de ellos.

268
00:45:56,000 --> 00:46:02,960
A este le mido su señal, a este, a este y a este, a este matraz que contiene muestra y patrón, ¿vale?

269
00:46:04,460 --> 00:46:19,880
Medimos la señal y lo que hacemos, la gráfica que hacemos, lo que metemos a nuestra calculadora y lo que dibujamos gráficamente es la señal en el eje de la cis, como siempre, frente a la concentración que yo he añadido de mi estándar, ¿vale?

270
00:46:19,880 --> 00:46:30,159
La concentración que yo he añadido a mi muestra frente a la señal que me ha dado, ¿vale?

271
00:46:30,539 --> 00:46:33,659
Ahora, ¿cuál va a ser la concentración real de mi muestra?

272
00:46:34,800 --> 00:46:40,179
Va a ser el cruce de esta línea de mi ajuste.

273
00:46:40,340 --> 00:46:49,840
O sea, yo a esto hago la concentración agregada, o sea, lo que he añadido de mi patrón frente a la señal

274
00:46:49,840 --> 00:46:57,019
Y hago mi ajuste por mínimos cuadrados igual, calculo mi recta con la forma y es igual a bx más a.

275
00:46:57,619 --> 00:47:02,199
Ahora, ¿cómo puedo calcular yo la concentración de mi muestra?

276
00:47:02,500 --> 00:47:10,420
Pues la concentración de mi muestra es el cruce con el eje de la cis, este cruce de aquí, ¿vale?

277
00:47:10,420 --> 00:47:18,599
Que es lo mismo que igualar mi ecuación, esta ecuación de aquí, a cero, ¿no?

278
00:47:18,659 --> 00:47:20,280
El eje de la Y igual a cero.

279
00:47:20,820 --> 00:47:22,719
Cero es igual a A más BX.

280
00:47:23,119 --> 00:47:28,000
Por lo tanto, X, que es lo que yo quiero calcular, es igual a A dividido entre B.

281
00:47:28,139 --> 00:47:32,260
Esta de aquí, este cruce, es la concentración de mi muestra.

282
00:47:32,840 --> 00:47:36,920
Por lo tanto, ¿cómo hago un calibrado? Por adiciones estándar.

283
00:47:36,920 --> 00:47:45,539
Lo primero, calculo cuál es la concentración del patrón que yo estoy añadiendo a mi muestra.

284
00:47:46,119 --> 00:47:50,900
Represento esa concentración de patrón frente a la señal que me da.

285
00:47:51,340 --> 00:47:54,920
Exactamente igual que hacíamos con el patrón externo.

286
00:47:55,960 --> 00:47:58,000
Luego calculo mi recto de calibrado.

287
00:47:58,000 --> 00:48:08,059
Y ahora lo que yo quiero calcular es la concentración de mi muestra sin estándar.

288
00:48:08,300 --> 00:48:14,179
Pues lo que hago es igualar esto a cero y divido mi ordenada en el origen entre mi pendiente.

289
00:48:18,500 --> 00:48:26,500
Elena, ¿también se puede preparar estos patrones de adiciones estándar disolviendo el patrón sólido en muestra?

290
00:48:26,500 --> 00:48:28,940
¿el patrón sólido

291
00:48:28,940 --> 00:48:30,280
en la misma

292
00:48:30,280 --> 00:48:32,519
diluyendo al mismo volumen final

293
00:48:32,519 --> 00:48:33,159
quieres decir?

294
00:48:34,179 --> 00:48:34,780
sí, con muestra

295
00:48:34,780 --> 00:48:37,960
¿con muestra o con

296
00:48:37,960 --> 00:48:40,480
a ver, repítame la pregunta

297
00:48:40,480 --> 00:48:40,980
por favor

298
00:48:40,980 --> 00:48:44,699
disolver, si fuera un patrón

299
00:48:44,699 --> 00:48:45,739
sólido

300
00:48:45,739 --> 00:48:48,260
se puede disolver directamente pesándolo

301
00:48:48,260 --> 00:48:50,099
con la disolución de la muestra

302
00:48:50,099 --> 00:48:52,400
vale, o sea, lo que estás diciendo

303
00:48:52,400 --> 00:48:54,179
es en vez de disolverlo y hacer

304
00:48:54,179 --> 00:48:55,679
una disolución madre

305
00:48:55,679 --> 00:49:10,659
Y luego a partir de ahí hacer distintas diluciones, tú dices, coger, pues si has calculado que necesitas un gramo en 100 mililitros, dos gramos en 100 mililitros, etcétera, echarlos directamente y luego enrasar, ¿no?

306
00:49:11,760 --> 00:49:12,280
Sí.

307
00:49:12,280 --> 00:49:31,079
Vale, pues si te digo la verdad, no se hace. Yo creo que no es correcto porque debes tener, no lo sé, a lo mejor el hecho de que no esté homogeneizada la disolución puede influir luego, no lo sé, normalmente se hace siempre a partir de una disolución patrón.

308
00:49:31,079 --> 00:49:52,940
Pero técnicamente yo creo que sí que se podría hacer, dependiendo de la solubilidad que tenga nuestro producto también. Por practicidad, el estar midiendo distintas masas en una balanza es bastante más tedioso que ir cogiendo volúmenes con una pipeta e ir añadiendolos a los matraces.

309
00:49:53,900 --> 00:49:59,880
Entonces, en teoría sí que se podría hacer, pero si te digo la verdad, yo no lo he visto hacer nunca.

310
00:50:00,260 --> 00:50:06,539
Entonces, lo voy a consultar con mis compañeras a ver qué me dicen, pero yo te diría que no es una buena práctica.

311
00:50:07,039 --> 00:50:12,119
Pero si nos ponemos teóricas, al final el resultado que vas a tener va a ser el mismo,

312
00:50:12,119 --> 00:50:14,440
solo que vas a introducir a lo mejor más margen de error.

313
00:50:14,440 --> 00:50:24,440
Pero el hacer aquí una disolución e ir diluyéndola o ir haciendo las disoluciones con una masa concreta…

314
00:50:25,559 --> 00:50:38,159
Claro, pero tú ten en cuenta que, por ejemplo, cuando te haces esta primera disolución patrón, tú imagínate que estamos trabajando con un compuesto de hierro con sal, que es lo más fácil para que nos ubiquemos.

315
00:50:38,159 --> 00:50:50,800
Y tú quieres hacer una batería de diluciones que va desde 0,1 hasta 1% de porcentaje en masa de cloruro de sodio.

316
00:50:51,179 --> 00:50:56,840
Si tú haces una disolución madre y la vas diluyendo, la incertidumbre en la masa la has incluido solo una vez.

317
00:50:57,039 --> 00:51:05,579
En cambio, si lo vas haciendo todas las veces, te cabe la posibilidad de que, a ver, siempre puedes equivocarte con un volumen,

318
00:51:05,579 --> 00:51:32,579
Pero ya podrías equivocarte con una masa y con un volumen, estarías induciendo mucho más error. Entonces, yo creo que aparte de por practicidad, porque en el laboratorio sería bastante más tedioso estar haciendo esas medidas y luego diluyendo, creo que también el hecho de que midamos una masa y que si nos hemos equivocado en la disolución madre, ese mismo error lo vamos a ir arrastrando a todos nuestros matraces y al final estamos compensándolo.

319
00:51:33,579 --> 00:51:38,579
Pero vamos, ahora sí lo voy a preguntar, pero como práctica te digo yo que no se hace experimentalmente.

320
00:51:38,800 --> 00:51:46,800
Vale, y en todo caso la disolución patrón madre se diluye con muestra, o sea, se pesa el analito y se diluye con la disolución muestra.

321
00:51:47,139 --> 00:51:56,929
No, la disolución madre la hacemos con, que lo que estamos intentando determinar, porque las curvas de calibrado son para un analito concreto,

322
00:51:56,929 --> 00:52:03,630
Pues estamos determinando hierro 3 más o cobre 2 más en unas muestras de agua

323
00:52:03,630 --> 00:52:08,949
Pues yo voy a hacer una disolución patrón de cobre 2 más, de concentración, yo que sé, 0,1 molar

324
00:52:08,949 --> 00:52:14,610
Aquí voy a tener una muestra que yo sé que tiene cobre, porque lo que yo voy a determinar es cobre

325
00:52:14,610 --> 00:52:23,550
Entonces aquí tengo mi disolución 0,1 molar y he hecho aquí 0 mililitros, aquí 1 mililitro, aquí 2 y aquí 3, por ejemplo

326
00:52:23,550 --> 00:52:34,449
Y en raso hasta este volumen de agua. Entonces, yo voy a tener unas concentraciones de, lo tendríamos que calcular, volumen por concentración es igual a volumen por concentración.

327
00:52:35,510 --> 00:52:49,409
Entonces, a partir del volumen que yo eché de disolución madre y el volumen final, yo puedo calcular la concentración de patrón que tengo en cada uno de estos matraces.

328
00:52:49,409 --> 00:53:09,369
En cada uno de estos mataces yo voy a tener una concentración de cobre que corresponde a mi disolución madre, a mis patrones como tal que yo voluntariamente he creado y voy a tener otra cantidad de cobre que corresponde a la muestra de la que yo no sé qué concentración tiene.

329
00:53:09,369 --> 00:53:21,650
Por eso, nosotros estamos partiendo, cuando hacemos el calibrado, como de un punto, estamos partiendo de que en el punto acero nosotros ya tenemos una concentración.

330
00:53:22,250 --> 00:53:37,110
¿Cuándo va a ser la señal, va a corresponder única y exclusivamente a mi muestra y no al calibrado? En el punto en el que esto se cruce con el eje de las X.

331
00:53:37,110 --> 00:53:40,750
¿Vale? Entonces, de las i es, perdón

332
00:53:40,750 --> 00:53:45,349
Entonces, en el momento en el que yo iguale

333
00:53:45,349 --> 00:53:48,829
i igual a cero, ¿vale? i igual a cero

334
00:53:48,829 --> 00:53:52,369
x es igual a a por t o por b, porque aquí es el punto de i igual a cero

335
00:53:52,369 --> 00:53:57,289
y la concentración de mi muestra, de la muestra que en este caso era la naranja

336
00:53:57,289 --> 00:54:00,889
esta de aquí, es esto de aquí

337
00:54:00,889 --> 00:54:04,429
y esto yo lo he calculado, o sea, tengo el valor de a y tengo el valor de b

338
00:54:04,429 --> 00:54:31,780
Porque he hecho mi calibrado con mis patrones, pero es que mis patrones tienen una pequeña cantidad de muestra, que es esto de aquí que no se considera. Esto es un poco lioso a lo mejor, pero bueno, ya veréis que ahora en la aplicación práctica, si tenemos claro, si somos capaces de distinguir en un ejercicio que estamos haciendo un calibrado por adiciones estándar en vez de por patrón externo, ¿vale?

339
00:54:31,780 --> 00:54:35,940
que es fácil de distinguir, quiero decir, fácil una vez que ya lo has visto muchas veces,

340
00:54:36,480 --> 00:54:39,760
ya no vamos a tener problema porque lo único que tenemos que pensar es,

341
00:54:39,860 --> 00:54:44,699
vale, yo sé que tengo que hacer un ajuste, yo tengo que hacer un ajuste matemático de esta forma.

342
00:54:45,199 --> 00:54:50,320
Ahora, ¿cuál es mi X y cuál es mi Y? Mi Y siempre es mi señal, eso es muy fácil.

343
00:54:50,320 --> 00:54:57,360
Ahora, ¿cuál es mi X? La X en el caso de los patrones externos son todas las concentraciones

344
00:54:57,360 --> 00:55:01,420
de los patrones que yo he creado. He hecho este, este, este, este y este.

345
00:55:01,780 --> 00:55:14,420
En el caso de las adiciones estándar, lo mismo, son la concentración de los patrones que yo he creado y que los he añadido a mi muestra, pero esta X es esa concentración, ¿vale?

346
00:55:14,420 --> 00:55:41,679
¿Qué pasa? Que cuando yo quiero calcular en patrones externos lo que hago es medir la señal de mi muestra aparte, ¿no? O sea, yo tengo mi muestra, le mido la señal e interpolo aquí fuera y cuando tengo adiciones estándar lo que hago es hacer todo esto de aquí y, o sea, coger mi muestra, añadirle a distintos matraces con mi muestra estos patrones de concentración creciente

347
00:55:41,679 --> 00:55:50,380
y luego, cuando hago mi recta de calibrado y ecuación, igualar esa I a cero y ya tengo la concentración de esa muestra.

348
00:55:51,579 --> 00:56:01,920
Y esto se utiliza cuando no podemos utilizar un patrón externo porque tenemos interferencias de la matriz,

349
00:56:02,059 --> 00:56:07,639
porque no tenemos un sistema que sea tan ideal como para utilizar los patrones externos.

350
00:56:07,639 --> 00:56:21,300
Entonces, recurrimos a esta curva de calibrado de adiciones estándar. ¿Qué pasa con esta curva? Pues que es más tediosa. Los cálculos no, porque al final son prácticamente los mismos, pero ten en cuenta que para cada muestra tenemos que hacer esto.

351
00:56:21,300 --> 00:56:39,559
En cambio, cuando yo hago un calibrado por patrones externos, imagínate que yo tengo luego cuatro muestras que analizar. Pues meto las cuatro muestras en mi ecuación, aquí, tengo cuatro muestras, mido cuatro muestras distintas y mido de la primera y me da una señal.

352
00:56:39,559 --> 00:57:01,739
Meto la señal que me ha dado en la Y y despejo la X. La siguiente muestra, vuelvo a medir. Meto aquí lo que me dé y despejo la X. Y así sucesivamente. En cambio, si yo quiero hacer esto con adiciones estándar, tendré que, para cada una de mis muestras, echarla en cinco matraces distintas la misma cantidad de muestra, que es esta franja naranja.

353
00:57:01,739 --> 00:57:14,099
Después, echar patrón en cantidades crecientes, medir la señal que me da cada uno de estos matraces, esto para cada una de mis muestras

354
00:57:14,099 --> 00:57:27,820
Entonces, por eso digo que patrones externos, si lo podemos utilizar, es perfecto porque es mucho más rápido, mucho más versátil en el sentido que con hacer un calibrado podemos evaluar distintas muestras

355
00:57:27,820 --> 00:57:42,019
Y bueno, pues eso, operativamente va a ser más rápido porque no tenemos que hacer tanto paso intermedio, etc. Y cuando no lo podemos utilizar ya recurrimos a otras alternativas, como es esta de aquí de adiciones estándar.

356
00:57:42,019 --> 00:57:56,599
¿Vale? Aplicaciones que tienen, pues eso, muestras con matrices complejas, suelos, alimentos, agua, sangre, tejidos, donde los componentes de la matriz pueden afectar a la señal que proporciona el analito.

357
00:57:57,500 --> 00:58:05,199
Efectos de interferencias significativas, cuando los patrones externos no son suficientes porque las interferencias afectan a la linealidad, etc.

358
00:58:05,199 --> 00:58:17,199
Por una precisión requerida en condiciones que sean variables. Cuando se requiere precisión en concentraciones muy bajas del analito y pequeñas variaciones de la matriz nos pueden influir en esos resultados, ¿vale?

359
00:58:17,199 --> 00:58:41,360
Esto nosotros tenemos que saber evaluar un poco así por encima, que si tenemos una muestra que es muy compleja no podemos utilizar un calibrado por patrón externo, pero a nivel práctico, práctico no, a nivel examen quiero decir, a vosotros se os proporcionan unos datos de un calibrado ya hecho.

360
00:58:41,360 --> 00:59:00,280
O sea, no se os va a decir que establezcáis vosotros cómo hacer el calibrado en este módulo. Luego, no sé, en instrumental, porque sabéis que los que lo tengáis matriculado, la parte esta de calibración se da también en análisis instrumental, porque obviamente es donde se aplica y se utiliza muchísimo.

361
00:59:00,280 --> 00:59:15,199
Pero lo tenemos también metido en el currículo que tenemos que dar en calidad. Entonces, bueno, los que tengáis las dos matriculadas, pues suerte porque lo veis por partida doble y los que no, pues ya lo veréis el año que viene cuando tengáis instrumental, ¿vale?

362
00:59:15,199 --> 00:59:38,900
Entonces, pensé que no se iba a dar tiempo a más. Bueno, nos queda un último calibrado que vamos a ver, que es el calibrado por patrón interno, ¿vale? ¿Qué aplicaciones tiene? Este, como norma general, se aplica muchísimo, se aplica casi siempre en técnicas cromatográficas, ¿vale?

363
00:59:38,900 --> 00:59:57,119
Entonces, si en el examen o cuando os enfrentáis a un ejercicio veis que se está analizando por cromatografía de gases, no sé qué, tú ya piensa, o sea, que se te enciende un poquito la bombilla, que muy probablemente tu ejercicio sea de patrón interno.

364
00:59:57,119 --> 01:00:17,079
¿Vale? Entonces, ¿cuándo aplicamos este tercer tipo de calibrado, el patrón interno? Pues cuando hay una variabilidad en el sistema de análisis. Por ejemplo, en cromatografía de gases o líquidos, donde las fluctuaciones en la inyección pueden afectar a la señal. ¿Vale? Os digo eso, que patrón interno y cromatografía de la mano.

365
01:00:17,079 --> 01:00:35,639
Bueno, interferencias de la matriz, pues lo mismo que hemos visto con adiciones estándar, ¿vale? Cuando queremos mejorar la precisión, lo mismo que hemos dicho, cuando es difícil mantener condiciones idénticas en todas las mediciones, el patrón interno, que ahora veremos cómo lo hacemos, compensa esas mediciones, ¿vale?

366
01:00:35,639 --> 01:00:42,380
y es muy común en cromatografía de gases, en HPLC, espectrometría de masas, etc.

367
01:00:42,679 --> 01:00:47,579
Donde el patrón interno nos ayuda a corregir las variaciones en el sistema

368
01:00:47,579 --> 01:00:51,659
y nos asegura que tengamos unos resultados que sean más confiables.

369
01:00:57,659 --> 01:01:02,780
Entonces, patrón interno. ¿Qué tenemos que hacer para hacer nuestro calibrado de patrón interno?

370
01:01:02,780 --> 01:01:07,760
Lo primero, tenemos que seleccionar un patrón interno. ¿Qué es un patrón interno?

371
01:01:07,780 --> 01:01:20,440
Un patrón interno es una sustancia que tiene un comportamiento muy parecido al analito en cuestión, pero que da una señal analítica diferente.

372
01:01:21,099 --> 01:01:29,519
O sea, tengo que buscar un patrón que se comporte de una manera igual que mi analito se va a comportar, pero que no se me puedan confundir las señales.

373
01:01:29,519 --> 01:01:52,320
¿Vale? Y ahora, ¿cómo hacemos nuestro calibrado? Vamos a poner los matraces, igual que con adiciones estándar, que es más fácil de ver. ¿Vale? Tenemos nuestra disolución de nuestro patrón interno, perdón, nuestra disolución madre y tenemos nuestra disolución de nuestro patrón interno.

374
01:01:52,320 --> 01:02:08,000
¿Vale? Disolución madre del analito que queremos identificar. Imagínate que nosotros estamos buscando litio más. Esto de aquí es mi disolución de litio más, mi disolución patrón madre.

375
01:02:08,559 --> 01:02:16,820
Ahora, mi patrón interno es un analito que se comporta muy parecido al litio, pero que da una señal distinta, ¿vale?

376
01:02:16,820 --> 01:02:20,599
Que lo puedo distinguir la una de la otra, pero que su comportamiento va a ser muy similar.

377
01:02:21,119 --> 01:02:25,800
Entonces, pues vamos a ver, que no sé si es el caso, sodio, sodio más, litio más y sodio más, ¿vale?

378
01:02:26,280 --> 01:02:31,500
Tengo mi patrón interno y lo que hago es, de patrón interno, siempre la misma cantidad, ¿vale?

379
01:02:31,500 --> 01:02:37,400
Del que no quiero identificar, del que no estoy analizando, sino el que me está ayudando, me he calibrado,

380
01:02:37,400 --> 01:02:54,780
La misma cantidad. Y del patrón voy añadiendo un poquito más, igual que antes, ¿no? Hago mi patrón con concentraciones crecientes. Pensad, acordaos de la fórmula C1 por V1 es igual a C2 por V2.

381
01:02:54,780 --> 01:03:05,980
Yo tengo aquí mi disolución madre con una concentración determinada y voy a ir cogiendo un volumen y enrasando a otro volumen final.

382
01:03:06,239 --> 01:03:13,500
Entonces yo puedo calcular qué concentración voy a tener de esta disolución de aquí en cada uno de mis matraces.

383
01:03:14,219 --> 01:03:21,880
Y lo mismo con el patrón interno. En realidad, del patrón interno en todos los matraces voy a tener exactamente la misma concentración.

384
01:03:21,880 --> 01:03:39,900
Porque el volumen final en todos es el mismo y la cantidad que yo he hecho de mi patrón interno, que es, acordaos, esa sustancia que yo añado para ayudarme, pero que no es mi analito, entonces ese patrón interno siempre voy a echar la misma cantidad.

385
01:03:39,900 --> 01:04:03,920
¿Vale? ¿Qué hace? Pues a mi muestra, luego yo hago esto de aquí, ¿ok? Y a mi muestra le añado también esta misma cantidad de patrón interno. ¿Vale? Imaginaos que aquí tengo un matraz más en el que tengo mi muestra y patrón interno. ¿Vale?

386
01:04:03,920 --> 01:04:11,800
¿Qué hago? Mido la señal del analito y la del patrón interno en cada uno de mis patrones, de mis estándares y de mis muestras, ¿vale?

387
01:04:12,019 --> 01:04:15,519
O sea, yo voy a medir por cromatografía y voy a tener dos picos, ¿no?

388
01:04:15,780 --> 01:04:19,900
Uno correspondiente a mi analito, uno correspondiente a mi patrón interno.

389
01:04:20,260 --> 01:04:22,619
Eso para cada una de mis muestras, ¿vale?

390
01:04:23,480 --> 01:04:24,440
¿Qué es lo que voy a hacer?

391
01:04:25,699 --> 01:04:32,820
Hacer una división, una relación entre la señal que me da mi analito y la señal que me da mi patrón interno,

392
01:04:32,820 --> 01:04:51,380
El que yo he añadido, ¿vale? ¿Qué hago? Hago mi representación gráfica para hacer mi línea recta. En este caso, lo que es mi señal, ¿vale? Es la señal de mi analito entre la señal de mi patrón interno.

393
01:04:51,380 --> 01:04:54,699
O sea, lo que estoy representando es la relación de señales en el eje de la cis.

394
01:04:55,460 --> 01:05:02,420
Imaginaos que en una muestra mi analito me da 5 y el patrón me da 3.

395
01:05:02,599 --> 01:05:04,719
Pues mi primer punto sería 5 entre 3.

396
01:05:07,860 --> 01:05:11,179
Entonces, lo que hago es la gráfica de la relación de señales

397
01:05:11,179 --> 01:05:16,599
frente a la relación entre la concentración de mi analito y mi patrón interno,

398
01:05:16,739 --> 01:05:18,059
que esta siempre va a ser la misma.

399
01:05:18,059 --> 01:05:25,639
y hago con esos datos, son los que yo meto en mi calculadora como eje de las Y y eje de las X

400
01:05:25,639 --> 01:05:27,340
para hacer mi recta de calibrado.

401
01:05:28,860 --> 01:05:33,500
Ahora, me traen una muestra al laboratorio y yo quiero saber qué hacer con ella.

402
01:05:33,659 --> 01:05:38,639
Pues a mi muestra yo le añado esa misma cantidad de patrón interno y mido la señal.

403
01:05:38,860 --> 01:05:43,539
¿Qué voy a tener? La señal de mi analito y la señal de mi patrón interno.

404
01:05:43,539 --> 01:05:57,460
Hago una entre la otra y lo meto en mi recta de calibrado, ¿vale? Y lo que me dé lo interpono y calculo la concentración de mi analito.

405
01:05:57,460 --> 01:06:12,400
Vale, creo que no nos da tiempo a hacer ejercicios hoy, ¿qué tal os habéis enterado?

406
01:06:12,400 --> 01:06:20,400
Mucho lío, lo tenéis que repasar, Sonia, ¿has levantado la mano o no?

407
01:06:20,400 --> 01:06:21,400
¿Has escrito?

408
01:06:21,400 --> 01:06:26,539
Tampoco, bueno, voy a cortar ya la grabación.