1
00:00:08,880 --> 00:00:14,400
Los enterotubos son sistemas de 12 sectores que contienen medios de cultivo que permiten

2
00:00:14,400 --> 00:00:19,940
identificar bacterias de la familia de las enterobacterias y también algunas otras que

3
00:00:19,940 --> 00:00:26,120
sean gran negativas y oxidasa negativas. El sistema permite inocular simultáneamente

4
00:00:26,120 --> 00:00:32,439
todos los medios de cultivo y ejecutar 15 reacciones bioquímicas. Según la interpretación

5
00:00:32,439 --> 00:00:38,100
de estas reacciones bioquímicas como positivas o negativas, tras la incubación se obtiene

6
00:00:38,100 --> 00:01:10,030
una codificación numérica que permitirá identificar al microorganismo sembrado. Los reactivos se pueden

7
00:01:10,030 --> 00:01:16,010
comprar ya preparados pero también pueden hacerse en el laboratorio. El reactivo de COVAX se prepara

8
00:01:16,010 --> 00:01:21,890
disolviendo el perimetilaminobenzaldehido en alcohol y luego se añade lentamente el ácido.

9
00:01:22,489 --> 00:01:27,849
Así preparado debe tener un color amarillo paja y si se observa en cualquier momento un color

10
00:01:27,849 --> 00:01:33,269
marrón oscuro no debe utilizarse. Se debe preparar en vitrina de gases y se almacena

11
00:01:33,269 --> 00:01:40,670
en un frasco de color topacio y en refrigeración. Los reactivos Borges-Proskauer 1 y 2 pueden ser

12
00:01:40,670 --> 00:01:46,569
preparados como se indica en el vídeo. Después de su preparación son estables durante algunas

13
00:01:46,569 --> 00:01:52,269
semanas en frasco color topacio, cerrados herméticamente y mantenidos en refrigeración.

14
00:01:53,150 --> 00:02:09,590
El microorganismo a identificar ha de ser de aislamiento reciente.

15
00:02:10,129 --> 00:02:15,370
Si procede de cultivos con más de 48 horas, pueden dar lugar a resultados erróneos.

16
00:02:16,030 --> 00:02:21,469
Antes de sembrar el microorganismo, es necesario realizar una tinción de gram y la prueba de la oxidasa.

17
00:02:21,969 --> 00:02:26,550
Podrán ser sembradas las bacterias gram negativas que sean oxidasa negativas.

18
00:02:26,550 --> 00:02:36,949
Para ilustrar esta práctica se utilizarán los sistemas de la marca Entero Pluritest de la casa comercial Leofilchem

19
00:02:36,949 --> 00:02:47,340
Se toma un sistema Entero Pluritest y se anota la identificación de la muestra y la fecha de ejecución

20
00:02:47,340 --> 00:03:01,530
A continuación se desenroscan ambos capuchones del sistema, trabajando junto al mechero

21
00:03:01,530 --> 00:03:20,699
Utilizando la punta del hilo de inoculación colocada bajo el capuchón blanco y sin flamear, se toma una colonia bien aislada, teniendo cuidado de no penetrar en el agar que la sustenta

22
00:03:20,699 --> 00:03:24,819
Se debe observar una cantidad visible de inóculo en la punta

23
00:03:24,819 --> 00:03:38,870
Se inocula el sistema tirando del hilo por el extremo opuesto, girándolo y extrayéndolo a través de todos los sectores del sistema

24
00:03:38,870 --> 00:04:02,370
Después se reintroduce el hilo con un movimiento giratorio hasta la muesca de rotura

25
00:04:02,370 --> 00:04:19,319
Se rompe el hilo por la muesca plegándolo

26
00:04:19,319 --> 00:04:24,540
La parte del hilo que queda dentro del sistema mantiene el ambiente anaerobio necesario

27
00:04:24,540 --> 00:04:30,079
para las reacciones de los compartimentos glucosa, lisina y ornitina

28
00:04:30,079 --> 00:04:35,139
Utilizando la parte del hilo que ha quedado rota y que no se ha depositado en ningún sitio

29
00:04:35,139 --> 00:04:40,759
continuando en la mano del operador se agujerea la película de plástico por los orificios

30
00:04:40,759 --> 00:04:49,620
correspondientes de los sectores adonitol, lactosa, arabinosa, sorbitol, vp, dulcitol pa, urea y

31
00:04:49,620 --> 00:05:00,519
citrato para aportar un ambiente aerobio. La punta se desecha a bolsa de autoclave y ya por último se

32
00:05:00,519 --> 00:05:15,360
enroscan los dos capuchones. El entero tubo inoculado se incuba colocándolo horizontalmente

33
00:05:15,360 --> 00:05:21,660
o de forma vertical en una gradilla, a 36ºC durante 18-24 horas.

34
00:05:22,139 --> 00:05:24,019
Así acaba la primera sesión de trabajo.

35
00:05:27,509 --> 00:05:30,990
Tras la incubación, se observa el viraje de color de los sectores

36
00:05:30,990 --> 00:05:33,709
y se interpretan los resultados con la tabla junta.

37
00:05:38,000 --> 00:05:42,240
Se van transcribiendo los resultados obtenidos a la hoja de recogida de datos.

38
00:05:42,800 --> 00:05:45,220
Para constatar como positivo el test gas,

39
00:05:45,639 --> 00:05:48,759
se debe observar si la cera está separada del medio o no.

40
00:05:48,759 --> 00:05:50,500
En este caso es positivo.

41
00:05:50,740 --> 00:06:28,519
Se siguen apuntando los resultados, como positivos o negativos, según el color observado.

42
00:06:28,519 --> 00:06:33,980
Para las pruebas de indol y vp es necesario añadir reactivos. Para ello hay que agujerear

43
00:06:33,980 --> 00:06:38,660
la película de plástico. Lo más seguro para esto es utilizar una punta de pipeta

44
00:06:38,660 --> 00:06:44,720
estéril. Se hace un orificio de aproximadamente 3 o 4 mm de diámetro.

45
00:06:44,720 --> 00:06:51,759
Para el test del indol se añaden 3 o 4 gotas de reactivo de COVAX en el sector H2S indol.

46
00:06:51,759 --> 00:06:58,180
realizan la campana de gases. La reacción positiva sería la aparición de una coloración rosa-roja

47
00:06:58,180 --> 00:07:12,050
antes de 10-15 segundos. En este caso es negativa. Para el test de Bohr-Sproch-Cower se añade en el

48
00:07:12,050 --> 00:07:22,250
compartimento VP3 o 4 gotas del reactivo de VP1 y a continuación 2 o 3 gotas del reactivo VP2.

49
00:07:22,250 --> 00:07:28,769
La reacción positiva sería la aparición de una coloración roja antes de 20 segundos.

50
00:07:29,449 --> 00:07:39,800
En este caso es positiva.

51
00:07:43,740 --> 00:07:46,259
Ya solo resta obtener el código numérico.

52
00:07:46,779 --> 00:07:51,319
Los 15 test bioquímicos se encuentran divididos en 5 grupos que contienen 3 test

53
00:07:51,319 --> 00:07:53,860
y a cada uno se le asigna un valor de positividad.

54
00:07:54,399 --> 00:07:59,160
4 para el primer test positivo de cada grupo, 2 para el segundo y 1 para el tercero.

55
00:07:59,160 --> 00:08:02,500
En caso de que el test sea negativo se le asigna 0.

56
00:08:03,100 --> 00:08:07,259
Se suma entonces los valores para cada grupo y sostiene un código de 5 cifras.

57
00:08:07,939 --> 00:08:12,779
Este código se busca en el manual que la casa comercial pone a disposición de los clientes

58
00:08:12,779 --> 00:08:15,699
y que se puede consultar en la página web indicada.

59
00:08:16,540 --> 00:08:23,199
En el caso analizado, el código obtenido ha sido el 64163,

60
00:08:23,740 --> 00:08:26,600
correspondiendo a la especie Enterobacter cloacae.

61
00:08:30,199 --> 00:08:34,480
Los enterotubos, una vez analizados, se depositan en doble bolsa de autoclave

62
00:08:34,480 --> 00:08:38,600
y se llevan al mismo a 121 grados durante 15 minutos.

63
00:08:39,259 --> 00:08:42,259
Luego la bolsa se anuda y se desecha.