1
00:00:12,910 --> 00:00:23,269
En este vídeo vamos a estudiar la última parte del tema, sobre todo lo que hace referencia a la traducción del RNA mensajero a DNA.

2
00:00:25,449 --> 00:00:36,590
Y después veremos en la segunda parte las enzimas más importantes de origen sobre todo bacteriano que podemos utilizar en biología molecular.

3
00:00:37,109 --> 00:00:39,909
Sobre todo nos centraremos en las endonucleasas de restricción.

4
00:00:39,909 --> 00:00:46,090
Antes de comenzar el proceso de la traducción hay que recordar la estructura que tienen los aminoácidos

5
00:00:46,090 --> 00:00:52,310
Fijaos, esta es la estructura de un aminoácido, una estructura genérica en la cual tenemos un carbono central

6
00:00:52,310 --> 00:00:58,689
que a través de sus cuatro valencias forma cuatro enlaces covalentes

7
00:00:58,689 --> 00:01:05,010
Siempre, siempre, y esto es muy importante, en una primera posición tendremos un átomo de hidrógeno

8
00:01:05,010 --> 00:01:23,069
Si recordáis, en una segunda posición tendremos un grupo amino que tiene características básicas y en la posición completamente opuesta tendremos un grupo químico ácido carboxílico que, al contrario que el grupo amino, tiene características ácidas.

9
00:01:23,069 --> 00:01:45,129
De ahí su nombre, ácido carboxílico. Y en la cuarta valencia, si recordáis, tenemos un radical químico. Entonces, dependiendo de qué aminoácido, qué aminoácido de los 20 aminoácidos que va a formar parte de las proteínas, dependiendo de qué aminoácido, este radical que lo tenemos aquí en azul es diferente.

10
00:01:45,129 --> 00:02:08,270
Entonces, tenemos 20 radicales diferentes, siendo el más sencillo el de la glicina. La glicina en este radical es sencillamente otro hidrógeno. Desde la glicina, que es el más sencillo, a radicales muy complejos, incluidos algunos que tienen, por ejemplo, el triptófano, tienen anillos en su estructura.

11
00:02:09,110 --> 00:02:38,180
Dependiendo de este radical tenemos diferentes grupos de aminoácidos. Tenemos aminoácidos que son apolares, donde todo el radical está formado por cadenas hidrocarbonadas, una serie de aminoácidos que los han pintado, están aquí en este recuadro verde, que tienen características polares, sobre todo porque tienen grupos hidroxilo, grupo hidroxilo, o tienen un grupo amino, ¿de acuerdo?

12
00:02:38,180 --> 00:02:56,919
Un grupo sulfidrilo, SH, y después tenemos otros dos grupos más de aminoácidos, unos con características ácidas, donde tenemos el glutamato y el aspartato, y tres aminoácidos con características básicas, la arginina, la lisina y la histidina.

13
00:02:56,919 --> 00:03:14,240
¿De acuerdo? Aquí en esta tabla que tenéis en el libro, tenemos que cada uno de los aminoácidos lo podemos abreviar con un código de tres letras. ¿De acuerdo? De tal manera que ya no tenemos que decir que una proteína está formada por ácido aspartico, sino que está formada por ASP.

14
00:03:14,240 --> 00:03:24,900
El código de una letra no lo vamos a ver, no es el que se suele utilizar, se suele utilizar el código de tres letras. Este código de tres letras es muy importante y lo tenemos que saber, conocer.

15
00:03:25,900 --> 00:03:38,060
¿De acuerdo? Una vez que ya conocemos la estructura que tienen los aminoácidos, nos podemos dar cuenta de por qué a este proceso celular le llamamos traducción.

16
00:03:38,060 --> 00:03:59,360
Y es que tenemos que pasar de un lenguaje donde la estructura química predominante son los nucleótidos, que está formado por una pentosa, un grupo fosfato y una base nitrogenada, a un lenguaje químico completamente diferente, que es el de los aminoácidos para poder formar polipeptidos y proteínas.

17
00:03:59,360 --> 00:04:08,159
Por tanto, la traducción es el proceso por el cual a partir de un mensajero, un RNA mensajero, se va a sintetizar una proteína

18
00:04:08,159 --> 00:04:12,379
¿Dónde se lleva a cabo el proceso de la traducción? Y esto es muy importante

19
00:04:12,379 --> 00:04:14,919
Se lleva a cabo en el citoplasma

20
00:04:14,919 --> 00:04:19,079
Acordaos que el pre-mRNA estaba en el núcleo

21
00:04:19,079 --> 00:04:26,540
El mensajero ya maduro ha salido al citoplasma a través de los poros nucleares

22
00:04:26,540 --> 00:04:35,629
¿Cómo traducimos un lenguaje de bases nitrogenadas en un lenguaje de aminoácidos?

23
00:04:35,730 --> 00:04:38,430
Necesitamos un diccionario que nos ayude a traducirlo

24
00:04:38,430 --> 00:04:43,470
Esa especie de diccionario, entre comillas, es lo que llamamos el código genético

25
00:04:43,470 --> 00:04:47,149
Entonces, para entender bien el código genético

26
00:04:47,149 --> 00:04:52,230
Hemos de conocer que en la secuencia de un RNA mensajero

27
00:04:52,230 --> 00:04:55,029
Aquí tenemos representado un RNA mensajero muy pequeño

28
00:04:55,029 --> 00:04:58,170
Desde su extremo 5' hasta su extremo 3'

29
00:04:58,170 --> 00:05:05,569
prima, recordad que aunque no esté representado, aquí tenemos la caperuza 5 prima del 7-metilguanosina,

30
00:05:06,250 --> 00:05:12,350
aquí tenemos la colapolia y entre medias no encontraremos secuencia de intrones.

31
00:05:14,089 --> 00:05:21,290
Este RNA mensajero con su secuencia, que sabemos que es la secuencia complementaria a la hebra 3

32
00:05:21,290 --> 00:05:28,870
prima, cinco prima del gen que tenemos en el DNA. Esta secuencia, los ribosomas, que son los

33
00:05:28,870 --> 00:05:35,750
orgánulos que van a leer el mensajero, lo van a leer en grupos de tres nucleótidos. Cada grupo

34
00:05:35,750 --> 00:05:45,550
de tres nucleótidos del mensajero es lo que llamamos un codón. Pues bien, el código genético

35
00:05:45,550 --> 00:05:52,610
es el diccionario, entre comillas, que nos va a relacionar la secuencia de cada codón, de cada

36
00:05:52,610 --> 00:05:59,949
grupo de tres nucleótidos del mensajero con el aminoácido que codifica. De tal manera que si en

37
00:05:59,949 --> 00:06:08,550
el mensajero yo me encuentro la secuencia UUU, el ribosoma entiende que tiene que introducir un

38
00:06:08,550 --> 00:06:15,810
aminoácido de fenilalanina. Pero si me encuentro, por ejemplo, ACC, el ribosoma sabrá que tiene que

39
00:06:15,810 --> 00:06:27,470
introducir un aminoácido treonina, ¿de acuerdo? En el código genético tenemos 64 codones, 64 codones, por las

40
00:06:27,470 --> 00:06:37,250
combinaciones de cuatro nucleótidos que los vamos cogiendo de tres en tres, 64. Los 64 codones no codifican todos

41
00:06:37,250 --> 00:06:46,110
para aminoácidos. De tal manera que tenemos un codón de inicio. ¿Por qué le llamamos

42
00:06:46,110 --> 00:06:51,149
codón de inicio? ¿Por qué? Porque va a ser el codón donde se va a enganchar, como

43
00:06:51,149 --> 00:06:56,290
vamos a ver ahora, se va a anclar el ribosoma y a partir de aquí se va a empezar a traducir

44
00:06:56,290 --> 00:07:05,230
la proteína. Por tanto, todas las proteínas, su mensajero comienza con la secuencia AUG.

45
00:07:05,230 --> 00:07:24,490
Por tanto, todas las proteínas comenzarán con el aminoácido metionina y esto es muy importante. Todas las proteínas eucariotas comenzarán con metionina. Todas las proteínas procariotas empiezan con una metionina un poquito especial, que es lo que llamamos la formilmetionina.

46
00:07:24,490 --> 00:07:27,970
Es una metionina que está modificada químicamente.

47
00:07:28,910 --> 00:07:34,910
Además de conocer que existe un codón de inicio y siempre es el mismo,

48
00:07:35,689 --> 00:07:39,610
hemos de saber que el ribosoma llegará a un momento que tiene que parar.

49
00:07:39,889 --> 00:07:45,670
¿Dónde para? Parará cuando encuentre la secuencia de un codón de stop.

50
00:07:46,230 --> 00:07:52,430
Estos tres codones de los 64 no codifican, como veis, para ningún aminoácido.

51
00:07:52,430 --> 00:08:12,990
Cuando el ribosoma encuentre cualquiera de estos tres codones, UAA, UAG, UGA, sabe que tiene que parar la traducción y no va a introducir en este codón de stop o stop codón, en este codón de paro o de stop, no va a introducir ningún aminoácido más.

52
00:08:12,990 --> 00:08:23,149
Por tanto, de los 64 codones, solamente 61, que son la gran mayoría, codifican para aminoácidos.

53
00:08:23,149 --> 00:08:45,070
Un punto importante, si nos fijamos en la estructura de este mensajero pequeño que aquí en este esquema, si os dais cuenta, hemos dicho que la traducción va a comenzar desde el codón de inicio al codón de paro o de stop, el stop codon.

54
00:08:45,070 --> 00:09:06,549
Esta secuencia que iría en este ejemplo desde esta A hasta esta A es lo que llamamos la secuencia codificante del mensajero. ¿Por qué? Porque todos estos codones van a codificar para aminoácidos y participan en la traducción y en la formación y síntesis de la proteína.

55
00:09:06,549 --> 00:09:20,429
Pero si os dais cuenta, tenemos una región hacia 5' desde el codón de inicio hacia 5' y desde el codón de stop hacia 3' que no se va a traducir.

56
00:09:21,509 --> 00:09:32,610
Estas secuencias del mensajero las llamamos 5' y 3' UTR, UTR es Untranslated Regions, es decir, regiones no traducidas.

57
00:09:32,610 --> 00:09:47,570
Las 5' UTR y 3' UTR son secuencias no codificantes, ¿de acuerdo? Tienen otras funciones en el mensajero que en este curso no nos interesan y no las vamos a ver, ¿de acuerdo?

58
00:09:47,570 --> 00:10:06,350
De tal manera que este mensajero, siguiendo el código genético, su secuencia por estos cuatro codones, permiten la síntesis de un péptido, polipeptido pequeño, formado por tres aminoácidos, metionina, isoleucina, serina.

59
00:10:06,350 --> 00:10:23,350
De tal manera que el último, acordaos que en el stop codon, ya lo veremos ahora en el proceso, no se introduce ningún aminoácido. Son codones no codificantes. ¿De acuerdo? No van a dar lugar a la introducción de ningún aminoácido más.

60
00:10:23,350 --> 00:10:32,480
más. Dicho esto, vamos a pasar a describir ahora qué componentes son necesarios,

61
00:10:32,659 --> 00:10:36,379
componentes celulares, qué maquinaria celular es necesaria para llevar a cabo

62
00:10:36,379 --> 00:10:43,399
la traducción y el proceso de traducción. Pero antes vamos a ver que el código

63
00:10:43,399 --> 00:10:49,220
genético tiene unas características propias, es decir, este diccionario tiene

64
00:10:49,220 --> 00:10:53,600
cuatro características muy importantes que tenemos que conocer. La primera es un

65
00:10:53,600 --> 00:10:57,899
código genético universal. ¿Esto qué significa? Que este código genético es

66
00:10:57,899 --> 00:11:04,600
idéntico en todos los organismos. ¿De acuerdo? ¿Hay excepciones? Sí, cuatro

67
00:11:04,600 --> 00:11:10,720
excepciones. ¿De acuerdo? Por ejemplo, en virus. Hay algunos virus que tienen un

68
00:11:10,720 --> 00:11:17,700
código genético diferente. Eso significa que, a lo mejor en algún virus, CUU, en

69
00:11:17,700 --> 00:11:23,519
lugar de codificar para leucina, codifica para isoleucina. ¿De acuerdo? Pero eso

70
00:11:23,519 --> 00:11:29,860
excepciones contadas. Por eso decimos que el código genético es universal y propio de todos los

71
00:11:29,860 --> 00:11:36,179
organismos, compartido por todos los organismos vivos. En segundo lugar, no es ambiguo. Es decir,

72
00:11:36,720 --> 00:11:44,620
cada codón codifica para un aminoácido concreto. Es decir, CUU codificará siempre para una leucina.

73
00:11:45,179 --> 00:11:53,299
Y si aquí encontramos AUC, sabemos que corresponde a una isoleucina y jamás el ribosoma podrá

74
00:11:53,299 --> 00:12:00,340
meter una serina, una estirina o cualquier otro aminoácido. La tercera característica es que es

75
00:12:00,340 --> 00:12:05,840
degenerado, es decir, la mayor parte de los aminoácidos están codificados por más de un

76
00:12:05,840 --> 00:12:13,419
codón. Aquí lo vemos por ejemplo, la leucina es un caso clarísimo. Por ejemplo, la leucina está

77
00:12:13,419 --> 00:12:23,279
codificada por tres codones. Es decir, tenemos 61 codones para 20 aminoácidos. Por tanto, es

78
00:12:23,279 --> 00:12:31,460
degenerado. Los codones que codifican para el mismo aminoácido se llaman codones sinónimos. Es decir,

79
00:12:32,360 --> 00:12:37,980
estos dos codones son sinónimos porque codifican para la fenilalanina y estos seis son sinónimos

80
00:12:37,980 --> 00:12:41,460
porque codifican para la leucina, ¿de acuerdo?

81
00:12:41,559 --> 00:12:45,460
Y por último, el código genético es continuo y no solapado,

82
00:12:45,679 --> 00:12:47,899
es decir, en la cadena del mensajero

83
00:12:47,899 --> 00:12:53,860
los codones se van a disponer de forma continua,

84
00:12:54,080 --> 00:12:56,919
uno al lado del otro, no solapado,

85
00:12:57,340 --> 00:12:59,980
no hay espacios entre ellos,

86
00:13:00,419 --> 00:13:02,840
no hay secuencia no codificante entre ellos,

87
00:13:02,840 --> 00:13:05,460
sino que entre el codón de inicio y el codón de stop

88
00:13:05,460 --> 00:13:15,279
La secuencia codificante es continua y el ribosoma irá desde aquí hasta este punto sintetizando la proteína. ¿De acuerdo?

89
00:13:16,120 --> 00:13:23,159
¿Qué componentes celulares, qué maquinaria celular es necesaria para llevar a cabo el proceso de traducción?

90
00:13:23,159 --> 00:13:40,220
Por supuesto necesitamos el mensajero, necesitamos los aminoácidos, vamos a necesitar RNAs de transferencia que si os acordáis son aquellos RNAs portadores de los aminoácidos, los que van a atraer los aminoácidos.

91
00:13:40,220 --> 00:13:47,100
Vamos a necesitar una serie de enzimas que van a catalizar la unión de un aminoácido con el siguiente

92
00:13:47,100 --> 00:13:51,179
Que es la peptidil transferasa, la vamos a ver ahora después

93
00:13:51,179 --> 00:13:53,279
Y necesitamos los ribosomas

94
00:13:53,279 --> 00:13:54,240
¿Qué son los ribosomas?

95
00:13:54,519 --> 00:13:58,360
Son los orgánulos celulares que van a llevar a cabo todo el proceso

96
00:13:58,360 --> 00:14:03,379
Me voy a detener un poquito en los ribosomas para recordaros la estructura que tienen

97
00:14:03,379 --> 00:14:07,000
Todos los ribosomas están formados por dos subunidades

98
00:14:07,000 --> 00:14:13,059
Una subunidad pequeña y una subunidad grande, ¿de acuerdo?

99
00:14:13,200 --> 00:14:20,240
La subunidad pequeña, en este esquema más simplificado, la subunidad pequeña tiene un sitio de unión al mensajero,

100
00:14:20,620 --> 00:14:26,259
de tal manera que el mensajero se va a disponer en esta zona de aquí, siguiendo esta línea,

101
00:14:27,059 --> 00:14:32,179
y en este punto interacciona con la subunidad menor.

102
00:14:32,179 --> 00:14:48,679
La subunidad mayor es de mayor tamaño, por supuesto, y lo que nos interesa en el proceso de traducción es que en su estructura contiene tres huecos, tres huecos, el hueco A, el P y el E.

103
00:14:48,679 --> 00:15:04,500
El hueco A, su nombre viene de aminoacil tRNA. Aquí va a entrar el nuevo ARN de transferencia que tiene el aminoácido que se tiene que unir a la cadena. Ahora lo vamos a ver.

104
00:15:04,500 --> 00:15:30,360
En el sitio P estará el RNA de transferencia anterior. Lo vamos a ver ahora después. Su nombre es por lo de peptidil-TRNA, ¿de acuerdo? Porque aquí vamos a tener el TRNA unido a la cadena peptídica y aquí el TRNA unido al aminoácido, es decir, al aminoácido nuevo que se tiene que unir.

105
00:15:30,360 --> 00:15:48,299
Y el sitio E es más pequeño y estará el tRNA, un tRNA libre, sin aminoácido. Lo vamos a ver. Su nombre es TES-EXIT. Aquí estará el tRNA que tiene que salir porque ya ha unido su aminoácido. Lo vamos a ver en un momento.

106
00:15:48,299 --> 00:16:17,490
¿De acuerdo? Aquí en este dibujo lo tenéis. El tRNA que ya unió su aminoácido se sitúa en el sitio E para liberarse. De ahí el nombre de exit site. En el sitio P vamos a tener el tRNA que está unido a la cadena polipeptídica que se está uniendo y en el sitio A el tRNA que trae el nuevo aminoácido que se tiene que unir a esta cadena polipeptídica.

107
00:16:17,490 --> 00:16:46,879
¿De acuerdo? Vamos a ver ahora el proceso. El proceso tiene tres fases. La fase de iniciación, fase de elongación y una fase de terminación. ¿Qué es lo que ocurre en la fase de iniciación de la traducción? Acaba de llegar el RNA mensajero procedente del núcleo, estamos en el citoplasma y lo primero que ocurre es que al mensajero se le acopla la subunidad menor, ¿de acuerdo? A través del sitio de unión al mensajero.

108
00:16:46,879 --> 00:16:51,720
¿Dónde se une? ¿En 5 prima? ¿Se une en 3 prima? No

109
00:16:51,720 --> 00:16:59,340
El mensajero, perdón, la subunidad menor se va a unir a la altura del codón AUG

110
00:16:59,340 --> 00:17:05,440
Acordaos que el codón AUG es el primer codón, el codón de inicio, el que va a codificar para metionina

111
00:17:05,440 --> 00:17:10,059
Una vez la subunidad menor se ha unido al mensajero

112
00:17:10,059 --> 00:17:15,000
Viene el primer RNA de transferencia

113
00:17:15,000 --> 00:17:32,980
Este primer RNA de transferencia es el que porta la metionina y como anticodón lleva el complementario AUG, es decir, es el tRNA de transferencia que lleva como anticodón UAC.

114
00:17:32,980 --> 00:17:41,059
Una vez llega este TRNA que se le llama de inicio, el TRNA de inicio que es el que lleva la metionina

115
00:17:41,059 --> 00:17:53,319
Y una vez se han formado los puentes de hidrógeno, este complejo macromolecular formado por el mensajero, la subunidad menor y el TRNA de inicio

116
00:17:53,319 --> 00:17:58,519
A todo este complejo lo llamamos complejo de iniciación

117
00:17:58,519 --> 00:18:07,960
¿Qué es lo que ocurre ahora? A este complejo de iniciación se le va a acoplar la subunidad mayor

118
00:18:07,960 --> 00:18:18,420
De tal manera que este primer RNA de transferencia con la metionina quede enclavado dentro del sitio P

119
00:18:18,420 --> 00:18:23,819
¿De acuerdo? Entonces no puede quedar en el sitio E, no puede quedar en el sitio A

120
00:18:23,819 --> 00:18:33,759
sino que la subunidad mayor, PLONK, se acopla de manera que este RNA de transferencia quede aquí en el sitio P.

121
00:18:34,940 --> 00:18:35,519
¿De acuerdo?

122
00:18:36,299 --> 00:18:44,299
Una vez ya están acopladas la subunidad mayor, la subunidad menor o la subunidad mayor con el complejo de iniciación,

123
00:18:44,519 --> 00:18:47,279
comienza la segunda fase, que es la fase de elongación.

124
00:18:47,619 --> 00:18:49,019
¿Por qué se le llama fase de elongación?

125
00:18:49,019 --> 00:18:54,420
Porque a esta metionina ahora se le va a ir añadiendo más aminoácidos

126
00:18:54,420 --> 00:18:58,400
y entonces esta cadena se va a ir elongando, se va a ir haciendo cada vez más larga.

127
00:18:58,960 --> 00:18:59,579
¿De acuerdo?

128
00:19:02,980 --> 00:19:03,599
Muy bien.

129
00:19:04,000 --> 00:19:04,940
¿Qué es lo que ocurre ahora?

130
00:19:05,220 --> 00:19:08,960
Imaginaos que en esta cadena, en este esquema, solamente tiene la metionina.

131
00:19:10,200 --> 00:19:11,500
Solamente tendría la metionina.

132
00:19:11,579 --> 00:19:14,279
Olvidaos que no tiene cuatro, sino que tiene solamente uno.

133
00:19:14,640 --> 00:19:18,119
Es el primer RNA de transferencia.

134
00:19:18,119 --> 00:19:37,099
Lo que ocurre ahora es, en el sitio A, la primera parte de la fase de elongación es que en el sitio A van a ir entrando RNAs de transferencia que portan aminoácidos. ¿Qué aminoácido van a llevar estos RNAs de transferencia? Eso está codificado por el anticodón.

135
00:19:37,099 --> 00:19:42,380
Acordaos que hay una enzima que es la aminoacil-TRNA sintetasa

136
00:19:42,380 --> 00:19:45,539
Que tiene un brazo que chequea el anticodón

137
00:19:45,539 --> 00:19:47,920
Y dependiendo de la secuencia del anticodón

138
00:19:47,920 --> 00:19:53,579
Coloca el aminoácido correspondiente según el código genético

139
00:19:53,579 --> 00:19:55,400
¿De acuerdo? Que acabamos de ver

140
00:19:55,400 --> 00:19:57,799
Entonces, llega el primer TRNA

141
00:19:57,799 --> 00:19:59,400
Entra aquí

142
00:19:59,400 --> 00:20:04,720
Si la secuencia es complementaria y por tanto se forman los puentes de hidrógeno

143
00:20:04,720 --> 00:20:06,140
Se queda

144
00:20:06,140 --> 00:20:23,200
Si no, sale. Otro RNA de transferencia entraría hasta que entre el RNA que sea complementario y se puedan formar los puentes de hidrógeno complementarios entre anticodón y codón.

145
00:20:23,319 --> 00:20:26,440
Codón, anticodón, igual que ocurría en este caso.

146
00:20:27,200 --> 00:20:31,200
Codón, anticodón, son complementarios, se formarán los puentes de hidrógeno.

147
00:20:31,200 --> 00:20:49,259
Si se forman los puentes de hidrógeno, este tRNA nuevo queda anclado en el sitio A y ya no se puede ir. ¿Por qué? Porque la unión, dijimos que era muy fuerte, si os acordáis, la unión de los puentes de hidrógeno entre dos, las uniones complementarias, ¿de acuerdo?

148
00:20:49,259 --> 00:21:17,980
Entonces, este tRNA ya se queda aquí. El siguiente paso es que va a venir una enzima. ¿Qué enzima es? Es la peptidil transferasa. ¿Qué hace esta enzima? La peptidil transferasa, ¿qué es lo que va a hacer? Corta la cadena polipeptídica, en este caso solamente decíamos que había una metionina, corta este enlace y hace el enlace peptídico entre la metionina y el siguiente aminoácido.

149
00:21:17,980 --> 00:21:31,720
De tal manera que ahora esa metionina, olvidaos de estos de aquí porque estamos al principio, esta metionina quedaría enganchada a través del enlace peptídico al siguiente aminoácido y al tRNA de transferencia nuevo.

150
00:21:32,900 --> 00:21:36,519
¿De acuerdo? ¿Se entiende? Espero que sí.

151
00:21:37,180 --> 00:21:42,720
Entonces, ¿qué es lo que ocurre ahora? Ahora ocurre lo que llamamos el proceso de translocación.

152
00:21:42,720 --> 00:21:52,019
se desensamblan ligeramente subunidad mayor, subunidad menor, se desensamblan de tal manera

153
00:21:52,019 --> 00:22:00,099
que la subunidad mayor y la subunidad menor dan un salto en dirección 3' hacia allá, en dirección

154
00:22:00,099 --> 00:22:09,299
3' y es un salto exacto, de tal manera que es un salto de tres nucleótidos. Si en esta estructura

155
00:22:09,299 --> 00:22:13,940
se produce el desensamblaje entre la subunidad mayor y la subunidad menor

156
00:22:13,940 --> 00:22:19,079
y damos un salto hacia 3' de un triplete

157
00:22:19,079 --> 00:22:25,039
eso lo que hace es que este RNA de transferencia que estaba en el sitio P

158
00:22:25,039 --> 00:22:27,880
ahora después del salto estará en el sitio E

159
00:22:27,880 --> 00:22:34,940
y este RNA de transferencia que estaba formado por la metionina y el siguiente aminoácido

160
00:22:34,940 --> 00:22:38,480
que estaba en el sitio A ahora quedará en el sitio P

161
00:22:38,480 --> 00:22:55,660
Aquí lo tenemos. De manera que ahora el sitio A queda libre. Este quedaría ocupado por este tRNA, el P quedaría ocupado por este tRNA y el sitio que queda libre es el sitio A.

162
00:22:55,660 --> 00:23:05,519
El tRNA de transferencia que ha quedado en el sitio E, como ya no tiene aminoácido, se va

163
00:23:05,519 --> 00:23:08,779
Por eso se le llama sitio de éxit, se iría

164
00:23:08,779 --> 00:23:11,099
Y volvemos a comenzar

165
00:23:11,099 --> 00:23:16,990
Si os acordáis, hemos dicho que ahora lo que vamos a tener es

166
00:23:16,990 --> 00:23:25,369
Al principio teníamos una metionina, ahora vamos a tener una metionina con el nuevo aminoácido que se había unido

167
00:23:25,369 --> 00:23:32,269
entonces, en el sitio A, una vez que en el sitio E ya se ha ido el terreno de transferencia

168
00:23:32,269 --> 00:23:36,289
al sitio A vuelven a ir entrando terrenos de transferencias

169
00:23:36,289 --> 00:23:41,210
hasta que uno de ellos forme los puentes de hidrógeno complementarios

170
00:23:41,210 --> 00:23:44,309
forma los puentes de hidrógeno complementarios

171
00:23:44,309 --> 00:23:47,250
llega la peptidiltransferasa nuevamente

172
00:23:47,250 --> 00:23:52,390
corta el enlace entre la cadena polipeptídica que se está formando

173
00:23:52,390 --> 00:23:57,970
y este tRNA de transferencia y hacen enlace peptídico con el nuevo aminoácido.

174
00:23:58,769 --> 00:23:58,950
Plum.

175
00:23:59,849 --> 00:24:05,410
Se produce el proceso de translocación, el tRNA que ha quedado libre se va

176
00:24:05,410 --> 00:24:15,670
y el sitio A vuelve a quedar libre para que puedan volver a entrar nuevos tRNAs con sus aminoácidos.

177
00:24:16,529 --> 00:24:16,769
¿De acuerdo?

178
00:24:17,450 --> 00:24:18,410
¿Hasta cuándo?

179
00:24:18,410 --> 00:24:27,670
hasta que en el sitio A el triplete que aparece sea un codón de stop, uno de los tres codones de stop.

180
00:24:27,670 --> 00:24:31,589
¿Qué es lo que ocurre? Entramos ya en la fase de terminación.

181
00:24:32,450 --> 00:24:42,569
Cuando aquí en el sitio A se detecta la presencia de un codón de stop, uno de estos tres, no entra ningún RNA de transferencia, no pueden entrar.

182
00:24:42,569 --> 00:25:02,289
No hay ningún RNA de transferencia que tenga un anticodón que sea complementario a estas tres secuencias. No existe. Por tanto, como no puede entrar en el sitio a ningún RNA, lo que entran son lo que llamamos factores de liberación.

183
00:25:02,289 --> 00:25:19,240
Entonces los factores de liberación que hacen una vez entra el factor de liberación o los factores de liberación llevan a cabo dos funciones. La primera cortan el enlace entre este tRNA y el último aminoácido.

184
00:25:19,240 --> 00:25:35,619
Al cortar este enlace, el polipéptido, esta cadena de aminoácidos polipeptídica, ya queda libre en el citoplasma y en segundo lugar, perdón, y el tRNA también queda libre y ya sale.

185
00:25:35,619 --> 00:25:50,299
Y la segunda función que llevan a cabo los factores de liberación es el desensamblaje de todo el complejo, de tal manera que subunidad mayor, subunidad menor se desensamblan, el mensajero queda libre y los factores de liberación también.

186
00:25:51,299 --> 00:26:13,599
Es importante tener en cuenta que ahora puede volver a comenzar con este mensajero que ha quedado libre todo el proceso otra vez, es decir, la subunidad menor podría ir a buscar el auge, volver a unirse que entre el primer RNA de transferencia con la metionina y volver a comenzar todo el proceso.

187
00:26:13,599 --> 00:26:43,549
Es decir, que a través, a partir de un mensajero, este proceso de traducción puede ocurrir muchas veces, una detrás de otra, de forma prácticamente simultánea. ¿De acuerdo? Os he puesto también aquí otro esquema, paso a paso, fase a fase, por si os ayuda también a entenderlo mejor, pero básicamente es lo mismo. En la fase de iniciación, en la fase de elongación y en la fase de terminación. Todos estos esquemas los tenéis ya subidos en la plataforma.

188
00:26:43,549 --> 00:26:55,259
El último apartado del tema es referente a una serie de enzimas que vamos a utilizar muchísimo en el laboratorio de biología molecular.

189
00:26:55,259 --> 00:27:13,119
El primer grupo y en el que más nos vamos a detener, me voy a detener, son las nucleasas, y en concreto unas nucleasas que se denominan endonucleasas de restricción, que las veremos en el tema 6, en el tema 6, en el tema 7 creo, de clonación génica, genética.

190
00:27:13,119 --> 00:27:36,460
Las utilizamos muchísimo para clonar genes. Las nucleasas son enzimas que cortan ácidos nucleicos, es decir, fragmentan una molécula de ácido nucleico. Dependiendo de qué ácido nucleico se trate, tenemos RNAs y DNAs, nucleasas de ARN o nucleasas de DNA.

191
00:27:36,460 --> 00:27:41,559
De la misma manera, también las podemos clasificar dependiendo del tipo de cadena que cortan.

192
00:27:41,839 --> 00:27:45,380
Pueden ser nucleasas bicatenarias o monocatenarias.

193
00:27:45,960 --> 00:27:50,319
La clasificación que más nos interesa es dependiendo del punto de corte.

194
00:27:50,660 --> 00:27:56,940
Dependiendo del punto de corte tenemos dos tipos de nucleasas, las exonucleasas y las endonucleasas.

195
00:27:56,940 --> 00:28:15,019
Las exonucleasas, como su nombre indica, son aquellas que van a empezar a fragmentar y a cortar los enlaces fosfodiéster desde los extremos de la molécula o desde 5' nucleótido a nucleótido o desde 3' nucleótido a nucleótido.

196
00:28:15,019 --> 00:28:26,079
Las endonucleasas pueden cortar la molécula de DNA o de RNA en cualquier punto, desde los extremos o en cualquier punto de su longitud.

197
00:28:26,680 --> 00:28:37,579
Hay algunas endonucleasas, que son las que más nos interesa, que pueden cortar aleatoriamente en cualquier punto de la molécula de ácido nucleico.

198
00:28:38,119 --> 00:28:44,519
Sin embargo, hay otras que tienen un punto específico de corte, una secuencia específica de corte.

199
00:28:44,519 --> 00:29:13,660
Esa secuencia específica de corte que reconocen y donde cortan es lo que llamamos diana de restricción, ¿de acuerdo? Por tanto, los enzimas de restricción o endonucleasas de restricción no cortan en cualquier sitio de la molécula de DNA o RNA, sino que cortan en unas dianas de restricción, en unas secuencias concretas específicas dentro de la molécula de DNA o de RNA, ¿de acuerdo?

200
00:29:16,410 --> 00:29:23,609
Es decir, esto representa una endonucleasa de restricción que reconoce específicamente esta secuencia

201
00:29:23,609 --> 00:29:29,569
y entonces cortaría. En este caso, corta después de la G, de la primera G5'.

202
00:29:29,569 --> 00:29:36,829
¿De acuerdo? Si aquí corta, tendríamos el extremo 5', esta sería la G5', después corta.

203
00:29:37,390 --> 00:29:43,769
En esta hebra, el extremo 5' lo tenemos aquí, 5', G, entonces produciría el corte.

204
00:29:43,769 --> 00:29:48,069
de tal manera que cortan las dos hebras, es una endonucleasa bicatenaria

205
00:29:48,069 --> 00:29:53,930
y dejaría en este caso extremos cohesivos, que vamos a ver ahora qué es eso.

206
00:29:55,069 --> 00:29:58,150
¿Cómo son las endonucleasas de restricción?

207
00:29:58,670 --> 00:30:02,470
Pues estas endonucleasas de restricción, ya hemos dicho que reconocen una secuencia específica

208
00:30:02,470 --> 00:30:04,190
que la llamamos diana de restricción.

209
00:30:04,769 --> 00:30:09,289
La mayoría de ellas pertenecen a las bacterias y las hemos aislado de las bacterias, ¿por qué?

210
00:30:09,849 --> 00:30:12,089
Porque son un sistema de defensa.

211
00:30:12,089 --> 00:30:20,089
Hay muchos bacteriófagos, virus, que cuando atacan a las bacterias introducen su material genético dentro de las bacterias.

212
00:30:20,809 --> 00:30:31,089
De tal manera que hay muchas bacterias que han desarrollado endonucleasas de restricción para detectar DNA exógeno, es decir, que no sea propio, y poder fragmentarlo.

213
00:30:31,750 --> 00:30:36,890
De esta manera, aunque el virus haya infectado a la célula, no se puede propagar dentro de ella.

214
00:30:36,890 --> 00:30:44,049
La primera de ellas se descubrió en Escherichia coli en los años 60.

215
00:30:44,170 --> 00:30:48,349
Estos investigadores esperaban que cortasen en cualquier sitio del DNA

216
00:30:48,349 --> 00:30:51,250
Pero se dieron cuenta que no, que era específica

217
00:30:51,250 --> 00:30:53,849
Era EcoR1, la veremos ahora después

218
00:30:53,849 --> 00:30:57,769
Y a partir de ellos, del año 60, se empezaron a aislar y a purificar

219
00:30:57,769 --> 00:31:00,509
Muchísimas de estas enzimas de restricción

220
00:31:00,509 --> 00:31:04,029
La secuencia de reconocimiento, la diana de restricción

221
00:31:04,029 --> 00:31:08,029
Suele ser una secuencia pequeñita

222
00:31:08,029 --> 00:31:10,170
Entre 4 y 8 nucleótidos

223
00:31:10,170 --> 00:31:11,509
Muy pequeña

224
00:31:11,509 --> 00:31:16,930
y su característica fundamental es que tienen que ser secuencias que llamamos palindrómicas.

225
00:31:17,890 --> 00:31:25,710
En lingüística un palíndrome es una palabra que se lee igual hacia la derecha que hacia la izquierda.

226
00:31:25,710 --> 00:31:38,329
Si os dais cuenta, en esta secuencia, en dirección 5'-3' en una hebra se lee idéntico que en dirección 5'-3' de la hebra complementaria.

227
00:31:38,329 --> 00:31:57,930
G, G, C, C, C, G, G, G, C, C, C. Por tanto, esta secuencia es palindrómica. Por ejemplo, estos son ejemplos concretos de palabras palindrómicas. Oso, radar, reconocer, se lee igual hacia la derecha que hacia la izquierda, etc.

228
00:31:57,930 --> 00:32:09,150
Cuando hablamos de DNA, estamos refiriendo que siempre en dirección 5'-3' se den igual en una hebra y en la hebra complementaria.

229
00:32:09,829 --> 00:32:10,650
¿De acuerdo?

230
00:32:11,950 --> 00:32:25,210
Entonces, existen miles, miles no lo sé, pero cientos seguro, seguro, cientos de nucleases de restricción, estas son las que más se utilizan, el CORRE1, BAMH1, GIND3, hay muchas más.

231
00:32:25,210 --> 00:32:29,069
Cada una de ellas tiene una secuencia de reconocimiento

232
00:32:29,069 --> 00:32:30,930
Es decir, una diana de restricción

233
00:32:30,930 --> 00:32:34,890
Y en esa diana de restricción cortan en un punto específico

234
00:32:34,890 --> 00:32:37,470
Por ejemplo, ALU1 corta justo en medio

235
00:32:37,470 --> 00:32:41,829
Pero BAMH1, ECR1 cortan al principio

236
00:32:41,829 --> 00:32:44,609
También podrían cortar al final, como por ejemplo PST1

237
00:32:44,609 --> 00:32:46,170
¿De acuerdo?

238
00:32:47,410 --> 00:32:49,730
Entonces, dentro de la secuencia de restricción

239
00:32:49,730 --> 00:32:51,329
Cortan en un punto específico

240
00:32:51,329 --> 00:32:53,849
O en medio, o a la izquierda, o a la derecha

241
00:32:53,849 --> 00:32:55,589
¿De acuerdo?

242
00:32:56,589 --> 00:32:59,809
Dependiendo de si corta en medio o corta en un extremo

243
00:32:59,809 --> 00:33:06,869
Los extremos que nos quedan en las moléculas de DNA una vez se ha cortado

244
00:33:06,869 --> 00:33:11,890
Pueden ser extremos romo, siempre y cuando el enzima haya cortado en medio

245
00:33:11,890 --> 00:33:16,849
O extremos cohesivos si corta a la izquierda o a la derecha

246
00:33:16,849 --> 00:33:22,529
Es decir, un enzima que corta justo en medio después de cortar

247
00:33:22,529 --> 00:33:29,910
quedan extremos que llamaríamos limpios esto es lo que llamamos extremos romo sin embargo eco r1

248
00:33:29,910 --> 00:33:35,869
que ya hemos visto que corta al principio después de la primera g en dirección 5 prima 3 prima

249
00:33:35,869 --> 00:33:42,309
cortaría aquí pero en la hebra complementaria cortaría aquí de tal manera que una vez cortadas

250
00:33:42,309 --> 00:33:47,890
las moléculas no quedan con extremos romo sino que quedan con extremos que llamamos cohesivos en

251
00:33:47,890 --> 00:33:55,130
una de las hebras, normalmente la hebra 3'-5' queda una cola, una cola colgando. Ya veremos

252
00:33:55,130 --> 00:34:01,289
en el tema 7, cuando veamos la clonación de genes, la importancia que tiene utilizar

253
00:34:01,289 --> 00:34:06,829
enzimas con extremos cohesivos, ¿de acuerdo? Si os dais cuenta, esta secuencia y esta secuencia

254
00:34:06,829 --> 00:34:14,210
por supuesto son complementarias porque antes estaban unidas por complementariedad, ¿de

255
00:34:14,210 --> 00:34:35,610
¿De acuerdo? Aplicaciones, miles de aplicaciones, ¿de acuerdo? En ingeniería genética, en pruebas de paternidad, en medicina forense, nosotros las vamos a utilizar muchísimo en lo que llamamos la tecnología del DNA recombinante para clonar genes, ¿de acuerdo? Para clonar genes en plásmidos, por ejemplo, introducir genes en células, etcétera, etcétera.

256
00:34:35,610 --> 00:34:57,550
Os he puesto unas cuantas diapositivas de aplicaciones. Esta es la que nosotros utilizaremos más y vamos a ver más a detalle en clase. La clonación, las técnicas de clonación, ¿de acuerdo? Para la cual necesitamos vectores de clonación que suelen ser plásmidos o genomas de virus, ¿de acuerdo? Pero esto lo veremos más despacio ya en el tema 7, ¿de acuerdo?

257
00:34:57,550 --> 00:35:03,650
Estas diapositivas de aplicaciones las tenéis para que les podáis echar un vistazo.

258
00:35:04,090 --> 00:35:08,630
Haremos ejercicios de mapas de restricción, pero ahora no nos interesa, ¿de acuerdo?

259
00:35:09,010 --> 00:35:12,510
Otras enzimas que empleamos muchísimo, las polimerasas.

260
00:35:13,469 --> 00:35:18,309
La adenia polimerasa es el enzima clave para la reacción de PCR.

261
00:35:19,170 --> 00:35:22,130
Entonces, una PCR, si no tenemos polimerasas, no podemos hacer nada.

262
00:35:22,590 --> 00:35:26,510
¿Cuáles son las más utilizadas? Sobre todo la Pol-1, la polimerasa 1.

263
00:35:26,510 --> 00:35:29,210
También se puede utilizar la polimerasa 3

264
00:35:29,210 --> 00:35:33,630
Las polimerasas requieren, que lo veremos en el tema 6, el tema de la PCR

265
00:35:33,630 --> 00:35:36,849
Una serie de elementos para que puedan realizar la PCR

266
00:35:36,849 --> 00:35:41,909
Necesita nucleótidos, necesita un DNA que copiar, DNA molde

267
00:35:41,909 --> 00:35:46,469
Necesita primers, los cebadores y necesita magnesio, cloruro de magnesio

268
00:35:46,469 --> 00:35:53,570
¿Por qué? Porque para poder realizar su función necesitan de cofactor al magnesio

269
00:35:53,570 --> 00:36:01,489
No vamos a entrar en que se diferencian unas polimerasas de otras porque ya lo veremos cuando veamos el tema de la PCL.

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Y otras enzimas pues están las retotranscriptasas que son capaces de sintetizar un DNA, una cadena de DNA a partir de una molécula de RNA utilizando RNA molde.

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Por tanto serían DNA polimerasas RNA dependientes y otra serie de enzimas que utilizamos mucho pero que no las vamos a ver porque se utilizan mucho menos.

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Cuando las vayamos a utilizar, sobre todo las ligasas, en cada tema os iré diciendo qué enzimas se utilizan y qué funciones tienen.

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Por ejemplo, la ligasa también en el tema 7 se utiliza mucho para la clonación de genes.