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UT9 D - Preparación de medios para el cultivo - Contenido educativo

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Subido el 11 de abril de 2026 por Pedro M.

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Bien, pues vamos a ver esta parte del tema, muy importante en el análisis microbiológico de las aguas, que es la preparación de los medios de cultivo. 00:00:01
Vamos a ver algunas generalidades de los medios de cultivo que más se utilizan especialmente para el cultivo de bacterias. 00:00:12
Vamos a seguir este orden, que es el que tenemos en la presentación. 00:00:19
Haré una pequeña introducción, sobre todo de algunos conceptos que son importantes, que tenemos que tener en cuenta. 00:00:24
Y este segundo apartado es muy importante, cómo se clasifican los medios de cultivo según su composición, según el modo de preparación, su consistencia y su utilización. 00:00:31
Bien, en el tercer apartado vamos a ver una descripción de los medios de cultivo que más se utilizan, más habituales, sobre todo en el cultivo de bacterias y haré especial hincapié, aunque lo veremos más adelante, cuáles son los medios de cultivo que se utilizan sobre todo para el recuento y para la identificación y detección de coliformes e indicadores microbiológicos de contaminación. 00:00:46
fecal de las aguas, sobre todo las aguas de consumo, el consumo humano. Esta última parte es una parte de práctica más procedimental que está relacionada con las prácticas de laboratorio que ya estamos haciendo en el laboratorio de análisis microbiológico. 00:01:16
Bien, pues vamos a comenzar. Fijaos, una fase muy importante del análisis microbiológico es poder, in vitro, en el laboratorio, crecer y cultivar los microorganismos que queremos detectar. 00:01:37
Sabemos que los microorganismos crecen fácilmente, especialmente las bacterias, crecen con mucha facilidad siempre y cuando se den todas las condiciones necesarias para su crecimiento, para su división celular. 00:01:53
Desde la atmósfera adecuada, presión parcial de oxígeno, humedad relativa, temperatura óptima, ya sabemos que hay bacterias que crecen a 37 grados, hay bacterias, que es la gran mayoría, pero hay bacterias, como veremos, las heterótrofas, que crecen a 22 grados, otras crecen a 26 grados, incluso las hay que crecen a 42 grados, etc. 00:02:09
Hay que conocer muy bien la temperatura óptima de crecimiento para poder facilitar esas condiciones en el laboratorio. Y especialmente qué elementos y qué compuestos nutritivos necesitan esas bacterias, qué nutrientes necesitan esas bacterias para poder crecer. 00:02:34
Una vez que establecemos el cultivo, las bacterias, a partir de una sola bacteria, una sola bacteria sobre el medio de cultivo, si las condiciones son las adecuadas, se van a generar por bipartición, por división mitótica, bueno, división mitótica no, por bipartición, la división celular prokaryota, se van a generar miles y miles de millones de individuos. 00:02:52
individuos a partir de esa bacteria que cayó en ese punto del medio de cultivo. Estas células 00:03:20
creciendo y acumulándose van a dar lugar a lo que ya conocemos como las colonias. Aquí tenemos 00:03:28
varios ejemplos de colonias de diferentes bacterias. Ya veis que la morfología de las colonias, no 00:03:35
tenemos tiempo de estudiarla, pero ya veis que en la morfología de las colonias ya se puede prever 00:03:43
y sospechar qué bacteria es la que está creciendo. 00:03:48
Daos cuenta que algunas, por ejemplo esta y esta, no tienen pigmentos. 00:03:52
Estas colonias son pigmentadas. 00:03:56
Estas además son colonias muy redonditas, con los bordes muy suaves. 00:04:00
Además tienen un cierto brillo. 00:04:05
Estas son mucho más planas, estas de aquí. 00:04:06
Estas colonias son grandes, estas colonias son mucho más pequeñas. 00:04:09
Pero la idea fundamental es que cualquiera de estas colonias que tenemos aquí 00:04:13
Y procede de una única bacteria que cuando sembramos el medio de cultivo cayó en ese punto del medio de cultivo y a partir de ella se han generado miles de millones de individuos, ¿de acuerdo? 00:04:17
Por lo tanto, son bacterias clónicas. Esto es importante que lo tengamos en cuenta. De ahí el nombre de colonia. Las llamamos colonias porque todas ellas genéticamente son clones que derivan de aquella bacteria. 00:04:33
Muy bien. Esto es importante y me detengo un poquito porque ya veremos más adelante que para el recuento, para saber cuántas bacterias o cuántos coliformes, cuántos enterococos, por ejemplo, hay en una muestra de agua, tenemos que cuantificarlas. 00:04:48
Y para poder cuantificarlas, vamos a contar colonias. ¿Y cómo es posible que contemos colonias y sabemos el número de bacterias? Porque sabemos que cada colonia procede de una sola bacteria. Si yo en el recuento cuento lo que llamamos 50 UFCs, 50 colonias, unidades formadoras de colonias, yo sé que en aquella muestra había 50 bacterias. Y de eso puedo estar totalmente seguro. 00:05:06
¿De acuerdo? Bien, este concepto de colonia es importante 00:05:34
Bien, como ya fuimos viendo en temas anteriores 00:05:39
bueno, en otras partes del tema 00:05:43
la gran mayoría de las bacterias 00:05:46
en este caso de interés clínico 00:05:48
de interés clínico en microbiología clínica 00:05:51
pero de interés clínico también en el análisis de agua 00:05:53
porque si analizamos, hacemos un análisis microbiológico 00:05:56
para poder detectar posibles patógenos de interés 00:06:00
Todas ellas son quimio-heterótrofas desde un punto de vista nutricional. Por tanto, necesitan compuestos orgánicos y a partir de estos compuestos orgánicos van a obtener la energía y la fuente de carbono para todos los procesos que necesitan, procesos metabólicos y fisiológicos que necesitan para su crecimiento y expansión. 00:06:03
Bien, ¿qué sería entonces un medio de cultivo? Pues un medio de cultivo lo podríamos definir como, ya decíamos, como una especie de disolución, un sustrato, una solución de nutrientes que permite el desarrollo de estos microorganismos. 00:06:28
Si estos microorganismos necesitan compuestos orgánicos, pues hay que saber cuáles son todos estos compuestos orgánicos que necesitan, algunos son inorgánicos, para poder juntarlos todos y crear medios de cultivo. 00:06:46
Por tanto, es como una mezcla, puede ser simple o puede ser más compleja, como veremos ahora, una mezcla de nutrientes, especialmente que aportan carbono, que necesitan las bacterias para la síntesis de sus compuestos orgánicos, nitrógeno, azufre y fósforo, ¿de acuerdo? 00:07:01
Y faltaría aquí también el oxígeno, que es muy importante. 00:07:21
Además de todos estos compuestos orgánicos, ya veremos que hay muchos más componentes. 00:07:27
Necesitamos sales, por supuesto, algunos iones metálicos, calcio, magnesio, cofactores, es decir, algunas vitaminas, factores de crecimiento, etc. 00:07:32
Por tanto, ¿qué es un medio de cultivo? No es ni más ni menos que una mezcla, una solución de nutrientes. 00:07:43
que lo vamos a utilizar como sustrato y sobre ese sustrato van a poder crecer nuestras bacterias. 00:07:49
Bien, ¿qué requisitos debe cumplir todo medio de cultivo? 00:07:58
Por un lado, deben ser estériles, por supuesto, si están ya contaminados los medios de cultivo, 00:08:05
entonces no puedo detectar si hay o no hay contaminación en la muestra que me llega al laboratorio. 00:08:12
En segundo lugar, deben estar contenidos en recipientes adecuados, recipientes que mantengan la esterilidad y que sean de fácil manejo. Normalmente, como ya sabemos, o bien vamos a dispensarlo en tubos de cultivo microbiológico o bien en placas Petri. 00:08:17
Tercero, deben poseer todos los nutrientes necesarios para el crecimiento de las bacterias que nos interesan 00:08:40
Y por último, debe contener las condiciones fisicoquímicas adecuadas 00:08:49
En cuanto a pH, en cuanto a humedad, en cuanto a presión osmótica 00:08:56
Es decir, fuerza iónica, concentración de sales 00:09:01
Todas estas condiciones son muy importantes 00:09:05
todos los medios de cultivo deben cumplir estos cuatro requisitos. 00:09:08
Bien, ¿qué tipos de medios de cultivo? 00:09:15
Vamos a ir a las ideas importantes. 00:09:18
Podemos clasificar los medios de cultivo de muchas maneras. 00:09:22
Una primera clasificación es según su composición. 00:09:25
Y según su composición tenemos, por un lado, 00:09:30
lo que llamamos los medios complejos o naturales. 00:09:32
Son los primeros medios de cultivo que se utilizaron. Y esta imagen no está por casualidad. Y es que eran caldos. Caldos hechos a base de extractos vegetales o extractos animales. 00:09:36
Los primeros que se utilizaban eran, pues eso, a partir de carne o a partir de, aunque en mucha menos medida, de extractos vegetales. 00:09:54
El gran problema que tenían estos medios es que es verdad que muchas bacterias podían crecer en estos medios de cultivo, 00:10:04
pero su composición, por supuesto que no es definida, son medios indefinidos. 00:10:10
No conocemos exactamente la concentración de glucosas, de carbohidratos, de lípidos, de proteínas. Por tanto, de un lote de medio complejo a otro lote que producíamos en el laboratorio, no había consistencia, ¿de acuerdo? Y por tanto, no era un método, digamos, muy riguroso. 00:10:17
por tanto 00:10:41
la reproducibilidad era el gran problema 00:10:43
que tenía, claro, yo preparo un caldo 00:10:46
y lo puedo utilizar para muchas veces 00:10:48
porque lo puedo dosificar en alícuotas 00:10:49
cuando se me acaba 00:10:52
tengo que preparar un caldo nuevo 00:10:53
la composición es completamente diferente seguramente 00:10:55
por tanto no 00:10:58
había muchos problemas en reproducir 00:10:59
los resultados, de ahí 00:11:01
que se empezaron a 00:11:03
digamos a diseñar 00:11:06
y a fabricar los medios sintéticos 00:11:07
que son aquellos que contienen en su composición exclusivamente muchas moléculas 00:11:10
y que son directamente asimilables por las bacterias. 00:11:17
Por ejemplo, en lugar de poner proteínas de la carne, se pueden poner directamente los aminoácidos. 00:11:20
La gran ventaja y la gran diferencia con los anteriores es que la composición está perfectamente definida 00:11:27
porque yo peso y yo sé qué cantidad pongo. 00:11:33
Por ejemplo, aquí tenéis un ejemplo, la composición del agarce trimida. Este medio de cultivo, el agarce trimida, se utiliza para el cultivo de pseudomonas, pseudomonas eruginosa, pseudomonas fluorescens, ¿de acuerdo? Tiene este aspecto de aquí. 00:11:38
Y nosotros sabemos, cuando compramos un medio de cultivo de cetrimida, agar cetrimida, sabemos la composición exacta que tiene. Y además nos lo dice el fabricante. De hecho, yo podría comprar pectona, cetrimida, etcétera, etcétera, y fabricarlo yo en el laboratorio. Luego lo esterilizo y ya tendría yo mi medio de cultivo. 00:11:59
Bien, y en tercer lugar tenemos los que llamamos los semisintéticos 00:12:21
Cabe destacar que los anteriores, los sintéticos, son los que más se utilizan actualmente 00:12:27
Sin embargo, algunas bacterias requieren algunos factores de crecimiento específicos, muy específicos 00:12:33
¿De acuerdo? Para poder desarrollarse in vitro 00:12:40
Es por ello que existen medios que llamamos semisintéticos 00:12:43
que aportan factores de crecimiento, pero tampoco de una forma definida, sino dentro de un extracto 00:12:48
orgánico hidrolizado. Puede ser, por ejemplo, un extracto de levaduras, que no es ni más ni menos 00:12:57
que células fúngicas, levaduras, son hongos unicelulares, machacados. Un extracto heliofilizado, 00:13:03
¿de acuerdo? O extracto de algunos tejidos, por ejemplo, o infusión, que lo vamos a ver, 00:13:12
O las peptonas, las peptonas son, lo vamos a ver ahora después, bueno, son proteínas digeridas, ¿de acuerdo? 00:13:17
Aquí tenemos un ejemplo del isovitálex, ¿de acuerdo? 00:13:24
Entonces, en este caso, pues tenemos dos gramos de extracto de carne bovina, pero ese extracto, la composición exacta no sabemos muy bien, 00:13:29
cuánta proteína, un hidrolizado ácido de caseína, que es una proteína, almidón sí que sabemos, cuánta hemoglobina ponemos también lo sabemos y cuánto agar. 00:13:37
Pero aquí tenemos este extracto y este hidrolizado que la composición exacta no la sabemos. 00:13:46
Estos son medios semisintéticos y se utilizan, digamos, como para usos muy concretos. 00:13:51
¿De acuerdo? Bien. 00:13:57
Por último, hay algunas bacterias que no crecen bien en ningún tipo de medio de cultivo. 00:14:03
Lo comento aquí porque es importante que lo conozcáis. 00:14:08
En control de aguas no se utiliza mucho y no es necesario, 00:14:11
Pero quiero que lo conozcamos porque me parece que es importante. Algunas bacterias son, sobre todo aquellas bacterias que son parásitos intracelulares. Son bacterias que no crecen en ningún medio de cultivo porque solo crecen dentro de células vivas. Por tanto, para poderlas cultivar necesitamos establecer un cultivo de células eucariotas e infectarlo. 00:14:16
Este es el caso de las clamidias y las riquetsias 00:14:43
Aquí os he puesto una imagen para que veáis, para poderlas cultivar 00:14:46
Aquí, por ejemplo, tenemos una imagen de células que han sido infectadas con riquetsias 00:14:50
que tienen esta forma de espiralada 00:14:56
Como son parásitos intracelulares, infectamos las células 00:14:58
y aquí dentro de las células las podemos cultivar en el laboratorio 00:15:03
Si no, es imposible 00:15:06
En este caso son clamidias, que son también intracelulares 00:15:07
La siguiente clasificación es según el modo de preparación 00:15:11
y es que podemos preparar el medio de cultivo directamente a partir de la fórmula 00:15:15
Por ejemplo, si tenemos esta fórmula podemos comprar de forma individual todos los componentes 00:15:19
pesar la cantidad adecuada y prepararlo en el laboratorio 00:15:27
Esto no suele ser ya lo habitual 00:15:31
actualmente se suelen comprar o bien los medios deshidratados, liofilizados 00:15:33
tal y como los tenemos en el laboratorio 00:15:41
y a partir de las indicaciones del fabricante 00:15:43
lo preparamos en el laboratorio 00:15:46
o bien ya comprar directamente los medios preparados y esterilizados 00:15:49
en forma ya de placas 00:15:54
y se pueden comprar pues eso, mangas 00:15:56
una manga de 15 placas de agar sangre 00:15:59
Por ejemplo, este sería agarsangre, medio de cultivo. Y ya viene preparado, viene esterilizado y lo único que tenemos que hacer es sembrarlo o sembrar la muestra, una alícuota de la muestra y ponerlo a cultivar. 00:16:03
No suele ser muy habitual, a no ser que sea un laboratorio que mueve una gran cantidad de muestras. 00:16:17
De tal manera que le sale rentable, puede salir rentable comprar ya las placas preparadas y esterilizadas. 00:16:23
Bien, según la consistencia tenemos medios líquidos que clásicamente se les llama caldos 00:16:30
En inglés son broth, lo veremos así como broth 00:16:39
Es un caldo nutritivo, caldo nutritivo compuesto principalmente, la mayoría de ellos, de extracto de carne, peptona, que ya veremos qué es, y agua 00:16:46
¿Y para qué se suelen utilizar? Pues se suelen utilizar mucho para la obtención del tema 00:16:56
Los medios sólidos, la gran diferencia con los caldos es sencillamente que le añadimos un agente gelificante 00:17:04
Gelificante o solidificante, que nos ayuda a darle consistencia 00:17:13
Los que más se utilizan son o bien la gelatina, esta es de origen animal, la gelatina procede del colágeno 00:17:20
de muchos tejidos animales, especialmente huesos, tendones, ligamentos o el agar-agar. 00:17:27
El que más se utiliza es el agar-agar, que es un polisacárido no ramificado 00:17:37
que procede de algas marinas, etcétera, etcétera. 00:17:41
Muy bien, si a un caldo le añadimos un agente gelificante, agar-agar, por ejemplo, o gelatina, 00:17:44
ya tenemos un medio sólido. 00:17:50
Además tenemos los medios semisólidos que se preparan normalmente a partir de los medios líquidos también y agregando una cantidad pequeña del agente solidificante o gelificante, entre 2 y 4 gramos por litro, muy poquito, de tal manera que no llegan a ser sólidos ni tampoco son líquidos, por supuesto. 00:17:51
Y se estudian, o sea, se utilizan únicamente para el estudio de la movilidad de las bacterias. 00:18:14
Tenemos aquí dos tubos con medio semisólido y los hemos sembrado en picadura. 00:18:21
Aquí tenemos nuestro hilo de siembra, ¿recordáis? Con el hilo de siembra. 00:18:27
Lo hemos esterilizado, cogemos una parte de la muestra, el inóculo, insisto que es el hilo de siembra, no es el asa de siembra, y sembramos por picadura. 00:18:31
Lo introducimos aquí dentro. Si no hay movilidad, la bacteria no es flagelada, solo se observa crecimiento en esta parte donde yo he hecho la incisión. Si hay movilidad, lo que veo es que todo el medio es turbio. Eso significa que la bacteria tiene flagelos y movilidad. 00:18:43
Según su utilización, esta es la clasificación más importante. Según su utilización tenemos medios comunes o generales. ¿Qué son los medios comunes o generales? Pues son medios que contienen los componentes mínimos básicos para que crezca la gran mayoría de las bacterias. 00:19:03
Bacterias que llamamos, digamos, no exigentes, ¿de acuerdo? Que no necesitan requerimientos muy especiales. Un ejemplo es el agar nutritivo o agar común, ¿de acuerdo? Igual que está el agar nutritivo, tenemos el caldo nutritivo, que sería el agar nutritivo sin el agente gelificante. 00:19:25
calificante. ¿Para qué utilizamos a veces estos, se utilizan estos medios? Pues para enriquecer una 00:19:47
muestra y para hacer que las bacterias que hay en esa muestra puedan crecer sin problema y luego 00:19:54
ya las estudiaremos a ver qué bacterias hay. Muy bien, cuando ya tenemos bacterias que son exigentes 00:20:00
lo que necesitamos son medios enriquecidos. La gran mayoría de estos medios enriquecidos proceden 00:20:06
de otros medios que son generales o comunes, a los cuales les hemos añadido una serie 00:20:14
de factores críticos indispensables para el crecimiento de microorganismos, bacterias 00:20:19
que son exigentes. Es decir, si no tienen esos factores, esas bacterias no pueden crecer. 00:20:26
Este enriquecimiento se puede conseguir de muchas maneras. Por ejemplo, en algunos se 00:20:34
pueden añadir suero, suero de la sangre, el suero de la sangre con todos los componentes 00:20:39
y proteínas del suero, o leche, o huevo, un extracto de huevo, o bilis, o ácido tioglicólico. 00:20:46
Todos estos factores, o sea, todos estos productos, muchos derivan de la sangre, pues aportan 00:20:55
factores que son indispensables para muchos organismos, microorganismos que son exigentes. 00:21:03
¿De acuerdo? Además, a estos medios enriquecidos incluso hay veces que hay que añadirle suplementos artificiales. ¿De acuerdo? Por ejemplo, el agar chocolate, que es este de aquí abajo, y este es el agar sangre. El agar sangre y el agar chocolate añadimos sangre. ¿De acuerdo? 00:21:07
Lo que más nos interesa no es la sangre en sí, es la hemoglobina, ¿de acuerdo? Y los factores de crecimiento que van en la sangre, ¿de acuerdo? Entonces, el agar sangre es porque añadimos sangre tal cual y sangre de carnero. Y el agar chocolate es porque la sangre va hidrolizada, desnaturalizada, ¿de acuerdo? 00:21:27
Entonces, bueno, esto es un ejemplo de estos medios enriquecidos. Aquí, por ejemplo, pues en microbiología clínica, pues se utilizan mucho para el crecimiento de hemófilus. Hemófilus, influenza o para influenza, todas las especies o especies de hemófilus necesitan factores de la coagulación para poder crecer. El factor 5, el factor 10, ¿de acuerdo? Que están presentes en el plasma actual. 00:21:49
medios selectivos 00:22:20
¿qué son los medios selectivos? 00:22:23
pues los medios selectivos son medios 00:22:25
en los cuales yo voy a poner 00:22:26
componentes que van a 00:22:28
favorecer el crecimiento 00:22:30
de algunas bacterias respecto de otras 00:22:32
por tanto 00:22:35
en estos medios selectivos 00:22:36
yo de alguna manera voy a 00:22:39
seleccionar qué bacterias 00:22:40
van a crecer y cuáles no 00:22:45
muchos de estos 00:22:47
componentes que se añaden a los medios selectivos 00:22:49
facilitan el crecimiento de algunas bacterias 00:22:51
e inhiben activamente el crecimiento de otras. 00:22:55
¿De acuerdo? 00:23:00
Por ejemplo, un ejemplo es el caldo de selenito. 00:23:01
El caldo de selenito tiene selenito de sodio. 00:23:05
El selenito de sodio, que es una sal de selenio, 00:23:08
inhibe el crecimiento de las gram positivas. 00:23:12
Si yo quiero hacer un estudio de enterobacterias 00:23:16
que son gram negativas, 00:23:19
puedo utilizar el caldo de selenito 00:23:20
pero cuando 00:23:25
cuando quiero estudiar salmonella 00:23:26
de todas las enterobacterias 00:23:29
la única que es capaz de crecer es salmonella 00:23:31
por tanto, el caldo de selenito 00:23:34
me permite inhibir a las que son gran positivas 00:23:37
e inhibir a todas las enterobacterias 00:23:40
que son gran negativas 00:23:44
a excepción de salmonella 00:23:45
por tanto, el caldo de selenito 00:23:48
es un medio selectivo para crecer salmonella. 00:23:50
Otro ejemplo es el agar maconkey. 00:23:54
El agar maconkey tiene una serie de colorantes 00:23:59
que inhibe el crecimiento de los gram positivos. 00:24:03
¿Para qué se utiliza el agar maconkey? 00:24:07
Para que puedan crecer específicamente las bacterias gram negativas 00:24:09
y entre ellas las enterobacterias. 00:24:14
El agar maconkey es un agar selectivo 00:24:17
que se utiliza para el crecimiento de enterobacterias. 00:24:19
Pero es que además es diferencial, 00:24:23
que es el siguiente tipo de medios de cultivo. 00:24:26
Y aquí lo vemos. 00:24:29
Aquí se han crecido tres tipos de bacterias. 00:24:30
Tres tipos de bacterias. 00:24:34
Daís cuenta que la morfología del crecimiento es diferente. 00:24:36
Todas ellas son gram-negativas. 00:24:39
Si han crecido es porque son gram-negativas. 00:24:41
Por tanto, todas ellas son enterobacterias. 00:24:44
Pero, como veremos más adelante, además de inhibir el crecimiento de las gran positivas, las gran negativas, dependiendo de su metabolismo, dan un tipo de crecimiento diferente. 00:24:47
Estas bacterias de aquí, que dan colonias o un crecimiento que es incoloro, son bacterias que pueden fermentar la lactosa. 00:25:00
Son lactosa positivas. Y estas de aquí que dan colonia rosa son lactosa negativas. ¿De acuerdo? Esto es importante. Pero es que además dentro de las lactosa negativas, de estas bacterias que son con este crecimiento, si os dais cuenta, las de la derecha alrededor del crecimiento de las colonias, 00:25:11
producen un pigmento que los secretan al medio de cultivo. 00:25:35
Este pigmento que secretan es importante porque nos permite diferenciar dentro de las bacterias 00:25:44
que son lac-negativas, nos permite diferenciar las que producen el pigmento de las que no producen el pigmento. 00:25:56
Esta sería, por ejemplo, Klebsiella y esta de aquí sería E. coli, ¿de acuerdo? 00:26:08
Bien, estos son medios selectivos. 00:26:15
Medios diferenciales son aquellos que además ya nos permiten poner en evidencia características diferenciales dentro de grupos de bacterias 00:26:17
Por ejemplo, vuelvo para atrás, el agar maconkey es un agar selectivo 00:26:29
Porque selecciono las bacterias que crecen, solo las gram negativas 00:26:34
Pero también es diferencial, porque dependiendo del tipo de colonias y del tipo de crecimiento 00:26:39
me permite diferenciar dentro del grupo de las enterobacterias 00:26:46
las que son lactosa positivas de las lactosa negativas. 00:26:50
¿De acuerdo? 00:26:53
Perdón, esto lo he dicho mal. 00:27:01
Estas son las lactosa positivas. 00:27:03
Estas de aquí son las lactosa negativas. 00:27:05
Perdón, ha habido aquí un error. 00:27:07
Sí, sí, sí, sí. 00:27:09
Las que dan la lactosa negativa son incoloras. 00:27:11
Como no son capaces de fermentar la lactosa, 00:27:14
no producen el pigmento, el pigmento que colorea. 00:27:17
Por tanto, estas de aquí son lactosa negativas y estas de aquí son lactosa positivas, ¿de acuerdo? Pues solamente sembrando el MAC con K hemos seleccionado y hemos diferenciado. Dependiendo del tipo de colonias que aparezcan ya podemos saber si son lactosa positivas o lactosa negativas. 00:27:19
Bien, normalmente ¿cómo se consigue esto? Pues añadiendo un montón de azúcares fermentables 00:27:38
como sustratos, de tal manera que dependiendo de qué enzimas metabólicos tengan 00:27:47
y qué azúcares sean capaces de fermentar y cuáles no 00:27:53
van a dar una serie de pigmentaciones y características en las colonias y en el medio de cultivo 00:27:58
que nos permite diferenciarlas 00:28:03
Estos medios de cultivo también se les llaman medios de identificación 00:28:05
Y muchos de estos medios selectivos y diferenciales se utilizan como pruebas de identificación 00:28:10
¿Qué bacteria está? Hay que identificarla con nombre y apellidos, género y especie, incluso subespecie y cepa 00:28:16
Entonces eso lo veremos más adelante en las pruebas de identificación 00:28:23
Muy bien, otros ejemplos de medios diferenciales son el agarclé 00:28:27
El agar clet es un agar también que se utiliza, bueno, el agar clet se utiliza mucho, pero más en la clínica y permite diferenciar, se utiliza sobre todo para muestras de orina, infecciones urinarias, ¿de acuerdo? 00:28:32
Tiene una serie de aminoácidos, tiene cistina y tiene lactosa como carbohidrato, ¿de acuerdo? Y nos permite diferenciar aquellas bacterias que son lactosa positivas, por tanto, lac positivas que la fermentan, de las que son lac negativas. 00:28:47
¿Por qué? Porque aquellas que son lactosa positivas dan unas colonias amarillentas, que serían estas de aquí. Incluso también amarillean el medio de cultivo. Mientras que aquellas que permanecen como verdosas y el medio de cultivo como azul verdoso son las que son negativas. 00:29:06
¿De acuerdo? Bien. O el caldo de etiosulfato sódico y citrato férrico. Esta es una mezcla que se utiliza mucho en el agar SS. El agar SS, que sería este de aquí, es un agar que nos permite diferenciar entre dos tipos de enterobacterias que son primas hermanas, que son Salmonella y Sigela. 00:29:29
Salmonella produce unas colonias de color, bueno, ya veis, muy oscuras, estas de aquí 00:29:53
Y sigela son como transparentes, más translúcidas y además el medio de cultivo no lo acidifica 00:30:03
Aquí cambia el medio de cultivo de color porque salmonella en su fermentación de lactosa acidifica el medio 00:30:10
¿De acuerdo? Bueno, estos son medios de cultivo diferenciales 00:30:19
Muchos de ellos son, ya digo, selectivos y diferenciales. 00:30:24
Y por último tenemos los medios cromogénicos. 00:30:28
Son medios que contienen además en su composición pigmentos. 00:30:33
Y se utilizan mucho como medios diferenciales. 00:30:38
Nosotros utilizaremos, o se utiliza mucho, un medio que es el cromagar, 00:30:42
que permite diferenciar lo que son los coliformes en aguas de E. coli. 00:30:47
Entonces, ¿cómo sabemos el número de coliformes? 00:31:01
¿Cómo sabemos el número de bacterias de la especie Escherichia coli? 00:31:05
Al crecerlas en estos medios cromogénicos, dependiendo de qué bacteria es la que crece, 00:31:10
las colonias son de un color diferente. 00:31:17
Y esto es muy visible, a simple vista se ve. 00:31:19
Veremos alguna plaquita de cromagar específico para análisis de agua y diferenciar coliformes, pero por ejemplo, en ese tipo se observan las colonias de coliformes de un color rosáceo y las de Escherichia coli se observan de un color violeta muy oscuro. 00:31:24
Aquí, por ejemplo, tenemos tres tipos de bacterias que han crecido. Una bacteria ha dado colonias rojas, otras son incoloras y otras son claramente verdes. Pues en este medio de cultivo tenemos Escherichia coli, Proteus y Enterococcus fecalis. Estas dos de aquí tienen mucho interés en contaminación fecal de aguas. 00:31:43
¿De acuerdo? Podríamos utilizar, por ejemplo, este cromagar para sembrar y dependiendo del color de las colonias sabemos si son de Escherichia coli o de Enterococcus. 00:32:07
Todos estos son medios de cultivo diferenciales. Muy bien. 00:32:19
Por otro lado tenemos lo que llamamos los medios de multiplicación. 00:32:25
Son medios que solamente se obtienen o se utilizan para obtener grandes cantidades de células. 00:32:30
¿De acuerdo? Estos se utilizan, por ejemplo, cuando nos llega la muestra y sospechamos que la contaminación es mínima, la contaminación microbiológica es mínima, lo que hacemos es cogemos una alícuota, lo metemos en estos medios de cultivo, que se suelen crecer en tubo o a veces incluso en Erlenmeyers, en gran volumen, 00:32:37
Y lo único que hacemos es, las pocas bacterias que haya por aquí, ponerlas en mucho medio de cultivo, medio de multiplicación, para obtener enormes cantidades de bacterias. Esto en la clínica y en la industria farmacéutica se utiliza, por ejemplo, para obtener vacunas producidas por bacterias. 00:32:57
Y un ejemplo es el caldo, el BHI, que es el caldo de infusión cerebro corazón, ¿de acuerdo? Y es un caldo clásico de infusión, se obtiene por infusión de un extracto de cerebro y de corazón de cordero, ¿de acuerdo? Y son medios de multiplicación. 00:33:18
Los medios de conservación se utilizan para conservar las bacterias, cepas, en el laboratorio. Imaginaos que nos interesa mucho, yo qué sé, por ejemplo, oye, es que esta Escherichia coli queremos estudiarla más a fondo, porque puede ser de una cepa que es la ET, es enterotoxigénica, Escherichia coli enterotoxigénica, que produce unas colitis muy graves, muy graves. 00:33:37
Y vamos a comprobarla y la queremos estudiar también más adelante. Pues la podemos congelar. Para ello, utilizamos crioviales, ¿de acuerdo? Que son con un medio de cultivo especial y aquí las congelamos. Y más adelante las podemos descongelar, volverlas a estudiar, etc. 00:34:04
tráfico. Y los medios de transporte, los que más se utilizan son el Stuart Amis y 00:34:22
el Caribler y normalmente ya vienen preparados con su torunda estéril, vienen dentro de 00:34:30
estos tubos y el medio de transporte solo se utiliza para transportarlo. Y es cuando 00:34:36
tenemos que hacer una toma de muestra in situ, donde hemos tomado la muestra, tenemos ya 00:34:41
que coger ahí una muestra y hacer un análisis microbiológico de una muestra in situ, entonces 00:34:47
con la torunda tomamos la muestra, introducimos la torunda dentro del tubo y en este medio 00:34:54
de transporte se mantiene el microorganismo vivo hasta que llegamos al laboratorio, ¿de 00:35:03
acuerdo? Bien, vamos a ver ahora algunos de los medios de cultivo que se utilizan y 00:35:10
Y lo iré pasando un poquito rápido porque de todos los medios de cultivo nos interesan 7, 8 o 8. 00:35:19
Uno de ellos es el agar nutritivo. 00:35:27
El agar nutritivo es un agar común. 00:35:29
Aquí ya veis, lo que han hecho ha sido sembrar una muestra polimicrobiana. 00:35:31
Y decimos que es polimicrobiana porque después de crecerla 24 horas, 00:35:39
imaginaos la cantidad de microorganismos diferentes que hay aquí. 00:35:43
Esto solamente lo han hecho para que veamos que en este medio de cultivo, en agar nutritivo, que es un medio general, crecen un montón de microorganismos. 00:35:47
Entre ellos, estos son hongos. Esto es una colonia de hongos filamentosos. 00:35:55
Aquí está seguramente también. Pero estas de aquí, estas pequeñitas, seguramente son de bacterias. 00:36:01
Pero habría que ver, habría que ver. ¿De acuerdo? Bien. 00:36:06
Otro es el agar soja tripticasa o tripticasa soja, que este medio de cultivo es el que se suele suplementar con sangre para obtener medios enriquecidos con sangre. 00:36:10
El agar soja triticasa. Bien. De enriquecidos ya hemos hablado. Hemos hablado del agar columbia o agar sangre. ¿De acuerdo? Ese agar columbia, CNA, al cual le hemos añadido un 5% de sangre de cordero. Esto es un medio enriquecido. 00:36:26
En aguas no se utiliza. Aquí se utiliza mucho para diferenciar las especies de estafilococos, por ejemplo, que crecen, y de streptococos, los cocos, sobre todo los cocos granpositivos. ¿Por qué? Porque alrededor, si os dais cuenta, la colonia que ha crecido aquí, alrededor tiene un halo de hemólisis. 00:36:48
digamos que ha digerido la sangre 00:37:11
los eritrocitos de la sangre 00:37:14
entonces la colonia es el punto central 00:37:16
que se ve oscuro 00:37:18
como de un color verdoso o marronoso 00:37:19
y lo que hay alrededor ese halo blanquecino 00:37:22
es una hemólisis 00:37:25
y entonces esto nos permite diferenciar 00:37:26
algunos que son alfa hemolíticos 00:37:28
de los que son beta hemolíticos 00:37:31
y de los que son gamma hemolíticos 00:37:33
esto tiene mucha importancia en clínica 00:37:35
en aguas no 00:37:37
y el lagar chocolate 00:37:39
Es muy parecido, lo único que le añadimos es sangre pero hidrolizada ya, ¿de acuerdo? 00:37:40
Como hemolizada. Por eso la sangre tiene este aspecto marronoso y por eso se le llama, por este aspecto, agar chocolate. 00:37:48
Bien. 00:37:56
Medios enriquecidos. Agar clet, que además también es selectivo. 00:37:58
¿De acuerdo? El agar clet se utiliza para la clínica. 00:38:03
En aguas no se suele utilizar. El agar Moller-Hinton se utiliza para hacer antibiogramas, también en la clínica. Tampoco nos interesa mucho. 00:38:07
Vamos a ver ahora algunos de los que nos interesan. Por ejemplo, los que son medios selectivos y diferenciales a la vez, tenemos el agar McConkie. 00:38:17
Este agar se utiliza específicamente para el cultivo de enterobacterias. Las enterobacterias, como veremos, son gram-negativas y dentro de las enterobacterias a nosotros nos interesa diferenciar muy bien las que son lactosa-positivas y las que son lactosa-negativas. 00:38:27
Unas son las coliformes y las otras son enterobacterias no coliformes. Las coliformes ya sabemos que los utilizamos como indicadores de contaminación fecal de las aguas. 00:38:50
El agar SS, que ya lo hemos visto, se utiliza como prueba confirmativa 00:39:03
Sembramos en agar SS para saber realmente si la bacteria que hemos aislado es salmonella 00:39:10
Si es salmonella tenemos que observar estas colonias que son negras 00:39:15
Porque reducen el azufre, el ácido sulfídrico 00:39:19
Y producen estas colonias de este color oscuro 00:39:25
Si gela, produciría colonias transparentes 00:39:29
Aquí cabe destacar que hay dos tipos de colonias. Las rositas y las transparentes. ¿De acuerdo? Unas son las positivas, las otras son las negativas. Bien. ¿Qué más? Ectoen. El agar ectoen es parecido al anterior, el SS, porque se utiliza también para salmonella y sigela. 00:39:33
¿Hay otro tipo de bacterias que crecen aquí? No, no crecen aquí. Entonces, dependiendo de qué tipo de colonias nos dan, si son negras sabemos que es salmonella, por ejemplo salmonella tifimorium, o si no, son sigela, si son como transparentes. 00:39:57
el agar Levin 00:40:14
preparado también en el laboratorio 00:40:16
o EMB 00:40:18
porque contiene eosina y azul de metileno 00:40:19
eosin, metil en blue 00:40:23
ambos colorantes 00:40:25
eosina y azul de metileno 00:40:27
inhiben el crecimiento 00:40:29
de las gran positivas 00:40:31
y favorecen el crecimiento 00:40:33
de las gran negativas 00:40:35
pero es que además tiene una serie de componentes 00:40:37
que nos permite diferenciar 00:40:39
las gran negativa enterobacterias que crecen 00:40:41
Si os dais cuenta, hay aquí algunas bacterias que dan unas colonias que son negras y esta de aquí ha dado un crecimiento verde brillante metálico, metalizado. Estas colonias son de Escherichia coli, mientras que el resto son otro tipo de bacterias, enterobacterias. 00:40:44
¿De acuerdo? Bien. El lagartesei, el lagartesei lo hemos preparado también, está preparado, se prepara en el laboratorio y se utiliza también como prueba de identificación, prueba de identificación de enterobacterias. 00:41:04
Como veremos en las pruebas de identificación, trataremos el lagartesei más adelante 00:41:25
Pero ya veis que nosotros hemos sembrado cuatro tubos, tal cual, con cuatro bacterias diferentes 00:41:31
Y ya veis que después de haberlo cultivado 24 horas, el aspecto es completamente diferente 00:41:40
Tenemos todo el pico de flauta o el slant, aquí es amarillo, se ha acidificado, aquí es rojo, aquí es rojo, aquí es rojo también 00:41:45
El fondo puede ser amarillento, puede ser rojo, puede haber o no gas, producción de gas, o puede ser negro. Esto sería salmonella, por ejemplo. Esto es Escherichia coli, como ya veremos. ¿De acuerdo? Bien. 00:41:53
Agar chapman manitol 00:42:10
Se utiliza para 00:42:12
Estafilococcus 00:42:14
Para crecer específicamente 00:42:15
Estafilococcus 00:42:20
Solo crecen estafilococcus porque son los únicos 00:42:21
Que aguantan una concentración 00:42:23
De 7,5% 00:42:26
Peso 00:42:28
Volumen 00:42:29
De cloruro de sodio 00:42:30
Son bacterias alófitas 00:42:32
Por tanto es un medio 00:42:35
El cloruro sódico al 7,5% 00:42:37
7,5 gramos mililitro 00:42:40
cada 100 mililitros 00:42:44
este componente 00:42:46
la alta concentración de sales 00:42:49
es el compuesto que hace que sea selectivo 00:42:50
y solamente crezca 00:42:53
estafilococo 00:42:55
pero además tiene manitol 00:42:56
¿por qué es importante el manitol? 00:42:59
porque estafilococus aureus 00:43:02
lo fermenta 00:43:04
y acidifica el medio 00:43:06
de tal manera que el medio después de cultivarlo 00:43:07
aparece amarillento. Y Staphylococcus epidermidis, que es otro primo hermano, no fermenta el 00:43:09
manitol. Por tanto, este medio es selectivo, sí, y es diferencial. Y se utiliza, uno, 00:43:16
para crecer solamente Staphylococcus y dos, poder diferenciar si el Staphylococcus que 00:43:24
está presente en la muestra es Staphylococcus aureus o epidermidis. Ambos, bueno, Staphylococcus 00:43:30
son oportunistas, patógenos oportunistas. ¿De acuerdo? Bilis esculina. El bilis esculina se utiliza para enterococos. Para poder confirmar que la bacteria que hemos aislado es enterococo, se puede crecer en bilis esculina. 00:43:38
Es un agar que tiene bilis, la bilis inhibe el crecimiento de los granpositivos, y tiene esculina. Solo los enterococos son capaces de fermentar la esculina. Y, bien, el Deneasa se utiliza para Staphylococcus también, ¿de acuerdo? Pero se utiliza en la clínica. Nosotros no lo vamos a ver. 00:44:00
Otros medios selectivos, el agarce trimida, que lo hemos visto antes 00:44:21
Se utiliza para crecer pseudomonas, especialmente aeruginosa 00:44:28
Pseudomona es importante también en algunas contaminaciones de aguas 00:44:38
Entonces se puede crecer en agarce trimida, que da este tipo de colonias verdes 00:44:45
Y bueno, este tipo de crecimiento 00:44:51
El campilosel no se utiliza porque es para campilobacter, no se utiliza en aguas. El BCI tampoco se utiliza porque es solamente para garnerela, ¿de acuerdo? En la clínica. Garnerela, infecciones de garnerela. El agar granada tampoco y el owestin jensen tampoco se utiliza en aguas. Así que los pasamos. Este es un medio de cultivo para micobacterias, ¿de acuerdo? 00:44:54
El agar de Chadler, este es importante que lo conozcamos porque es un agar que se utiliza para el aislamiento y el crecimiento de aquellos que son anaerobos 00:45:21
Y es el que más se utiliza, nosotros no lo utilizaremos en el laboratorio, pero es el que más se utiliza 00:45:34
Y luego tenemos los medios cromogénicos, pues ya veis, este es el mismo medio, está cogido de la página web de la casa comercial 00:45:41
el agar cromogénico UTI, que se utiliza para infecciones urinarias, este en concreto, nosotros utilizaríamos otro para aguas, y ya veis que el tipo de crecimiento es muy diferente, la coloración de las colonias, la pigmentación de las colonias, dependiendo de cuál es la pigmentación, nos identifica ya rápidamente cuál es el microorganismo que está creciendo, ¿de acuerdo? 00:45:51
Si es escherichia coli, si es proteus, incluso si es una mezcla, ¿de acuerdo? O esclepsiela. Todos estos son enterobacterias, como ya veremos. Tenemos enterococcus y aquí también es estafilococcus, ¿de acuerdo? 00:46:17
Bien, medios líquidos, los que más se utilizan son, ya hemos visto el caldo selenito que es selectivo y diferencial, el caldo de tioglicolato, digamos que es un caldo común, general, ¿de acuerdo? 00:46:32
Igual que el caldo, el agua de peptona. El agua de peptona también es un caldo, también es un caldo que se utiliza de forma general en el que pueden crecer muchísimos microorganismos. 00:46:49
Idioma/s:
es
Materias:
Biología, Química, Tecnología, Ciencias Naturales
Etiquetas:
Laboratorio, Científicas
Niveles educativos:
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  • Formación Profesional
    • Ciclo formativo de grado superior
      • Primer Curso
      • Segundo Curso
Autor/es:
Pedro Melgar-Rojas
Subido por:
Pedro M.
Licencia:
Todos los derechos reservados
Visualizaciones:
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Fecha:
11 de abril de 2026 - 9:57
Visibilidad:
Clave
Centro:
IES BENJAMIN RUA
Duración:
47′ 08″
Relación de aspecto:
4:3 Hasta 2009 fue el estándar utilizado en la televisión PAL; muchas pantallas de ordenador y televisores usan este estándar, erróneamente llamado cuadrado, cuando en la realidad es rectangular o wide.
Resolución:
960x720 píxeles
Tamaño:
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