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Videoconferencia 28 mayo. Primera parte - Contenido educativo

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Subido el 31 de mayo de 2024 por Susana A.

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¿Veis la pantalla? He puesto la unidad 3, la de ácidos nucleicos. 00:00:00
Sí. 00:00:16
Muchas gracias. Bueno, pues vamos a dar un repaso así general a esta mirada de trabajo. Ahora seguro que como ya lo habéis estudiado, seguramente que os sirva de ayuda esto que vamos a ver hoy. 00:00:17
Entonces, vamos a empezar viendo cómo están formados los ácidos nucleicos. 00:00:41
Bueno, el que descubrió los ácidos nucleicos fue Friedrich Nietzsche y vamos a ir directamente a los ácidos nucleicos. 00:00:52
Entonces, sabemos que los ácidos nucleicos están formados por nucleótidos 00:01:05
y esos nucleótidos a su vez están formados por una base nitrogenada, una pentosa y un grupo fosfato. 00:01:10
Dentro de las bases nitrogenadas teníamos adenina, timina, guanina y citosina, esto es para el ADN 00:01:25
Y acordaros que para el ARN en vez de timina teníamos uracilo, ¿vale? Acordaros, uracilo, pues este tiene una R, pues ARN, uracilo. Estas fórmulas no os lo tenéis que saber, ¿vale? Pero sí los nombres, adenina, citosina, guanina y timina y uracilo. 00:01:35
Luego, otra parte de los nucleótidos es la pentosa. La pentosa es este ciclo de 5 átomos y de aquí sí que hay que saber, importante, tampoco tenéis que saber cómo es la fórmula en sí, 00:01:57
pero sí que tenéis que saber que hay una diferencia entre el ADN y el ARN y la diferencia es que en el ARN aquí tenemos dos grupos OH 00:02:20
Y en cambio en el ADN solamente tenemos aquí un grupo OH. Y esta pentosa es un azúcar y eso en el ADN se llama desoxirribosa y en el ARN se llama ribosa. 00:02:34
Y luego tenemos el grupo fosfato, que es el fósforo unido a varios oxígenos. Eso sería cómo están formados los ácidos nucleicos y en concreto los nucleótidos. 00:02:56
Ahora, igual que vimos con las proteínas, el ADN también tiene varias estructuras 00:03:18
Aquí en ADN tenemos estructura primaria, secundaria y terciaria 00:03:34
La primaria es igual que en proteínas, la primaria es la secuencia y el orden de los nucleótidos 00:03:38
y estos nucleótidos están unidos por enlaces fosfodiéster 00:03:46
aquí tenéis la base nitrogenada, la pentosa y aquí el grupo fosfato 00:03:55
pues esta unión entre este grupo fosfato y el azúcar de un nucleótido 00:04:03
y el azúcar del nucleótido siguiente se llama enlace fosfodiéster 00:04:08
Y estos enlaces se originan por el grupo que tenemos aquí, el OH, pues este es el que hace, o sea, con el que se produce el enlace covalente, enlaces fosfodiéster. 00:04:13
Esa sería la estructura primaria. Y luego tenemos la estructura secundaria. La estructura secundaria es la que fue descubierta por Watson y Crick con la ayuda de Rosalind Franklin. 00:04:29
Y ellos lo que dedujeron Watson y Crick es que el ADN se dispone en forma de doble hélice. Son dos cadenas que son antiparalelas y que giran sobre sí mismas. 00:04:51
mismas. Y ahora, entre estas dos cadenas, estas dos cadenas están unidas mediante las bases 00:05:08
nitrogenadas. Tenemos las bases nitrogenadas que están dispuestas aquí en horizontal y son las que 00:05:18
unen las dos cadenas y estas uniones son uniones por puentes de hidrógeno. Tened cuidado, estos son 00:05:26
puentes de hidrógeno y luego las uniones entre nucleótidos son enlaces fosfodiéster. Estos 00:05:34
puentes de hidrógeno, acordaros, se unen la adenina con la timina siempre y la citosina con 00:05:41
la guanina siempre. Esto en ADN. Si tuviéramos ARN, pues aquí tendríamos el uracil en vez de la 00:05:48
timina. Y ahora los puentes de hidrógeno son la adenina con la timina, forman dos puentes de 00:05:55
hidrógeno y la citosina con la guanina tres puentes de hidrógeno. Y otra cosa importante, 00:06:02
si nosotros conocemos la secuencia de una de las cadenas, pues podemos deducir la secuencia 00:06:10
de la otra cadena porque son cadenas que son complementarias. Pues donde tengamos una adenina 00:06:16
aquí, en el otro lado, en la otra cadena vamos a tener una timina. Tengamos una citosina, 00:06:22
una guanina y así. Y una de las cadenas va en sentido 5'-3' y la otra 3'-5'. Esta sería la estructura secundaria. 00:06:27
Y ahora, la estructura terciaria. La estructura terciaria ya lo que dijimos, como el ADN es una molécula muy grande 00:06:47
que tiene que caber en el núcleo de la célula, pues se va enrollando, enrollando, hasta que al final da lugar a los cromosomas. 00:06:58
En el caso de las células eucariotas, este ADN se va enrollando, o sea, y se va uniendo a una serie de proteínas que se llaman histonas. 00:07:09
Eso es en el caso de eucariotas. Y en el caso de prokaryotas, el ADN se va uniendo, se une a ARN y a otras proteínas, pero que estas no son históricas. 00:07:19
Otra cosa importante es los plásmidos. Esto, ahora que lo habéis repasado, seguro que ya os suena más, si os acordáis, del ADN recombinante. 00:07:37
Los plásmidos son moléculas de ADN que es extracromosómico, son circulares y que se replican y se transcriben independientes del ADN cromosómico. 00:07:50
Los plásmidos, muy importante. 00:08:05
El ARN, bueno, el ARN ya lo hemos visto un poquito, hemos visto ya cómo en vez de timina tenemos uracilo y luego tenemos citosina y guanina, esto lo mismo. 00:08:16
Las diferencias entre ADN y ARN, también hemos visto la pentosa, aquí en el ARN es ribosa y son las bases nitrogenadas 00:08:26
Y luego otra diferencia también entre ARN y ADN es que en el ADN tenemos doble hélice, dos cadenas y en cambio en el ARN solamente tenemos una cadena 00:08:39
En algún caso muy raro, en algún caso de algún virus, tenemos dos cadenas, pero lo normal es que haya solo una cadena. 00:08:50
Lo siguiente que vimos, a ver, esto de la ARN mensajero, esto como lo vamos a ver después con el dogma, esto lo repasamos después. 00:09:04
Una cosa antes de que se me olvide, todas estas autoevaluaciones que vienen a lo largo de todos los documentos, pues también hacedlas, porque también puede caer algo parecido en el examen. 00:09:15
Bien, ahora vamos a ver las propiedades. Bueno, pues las cadenas de ácidos nucleicos son cadenas hidrófilas. Hidrófila significa que se disuelven en agua, ¿vale? Porque van a formar puentes de hidrógeno. 00:09:29
Otra cosa importante del ADN, pues las cadenas de ácidos nucleicos tienen carga negativa, ¿vale? 00:09:57
Acordaros que esto es importante para luego cuando hacemos la electroforesis en gel de agarosa, ¿vale? 00:10:09
Como tienen un grupo fosfato, pues a pH fisiológico las cadenas de ADN tienen carga negativa y se comportan como ácidos. 00:10:17
Y bueno, las disoluciones de ADN son muy viscosas. 00:10:26
Luego, una cosa importante, la densidad. 00:10:33
Como hemos visto antes, entre citosina y guanina hay tres puentes de hidrógeno. 00:10:37
Por lo tanto, un ADN que tenga más cantidad de citosina y guanina tendrá entonces más enlaces por puentes de hidrógeno 00:10:42
y por lo tanto ese ADN, ese ácido nucleico tendrá más densidad, esa disolución tendrá más densidad, una influencia de la cantidad de citosina y de guanina. 00:10:53
Y bueno, que son químicamente muy estables y luego que el ADN absorbe de posiluz ultravioleta y absorbe a 260 nanómetros. Si os acordáis, en las proteínas se absorbían a 280 nanómetros. 00:11:07
Y esta relación entre la absorbancia de 260 y de 280 lo que nos va a indicar es cómo tenemos de puro nuestro ADN. 00:11:24
Otra cosa importante, la desnaturalización del ADN. ¿Qué significa desnaturalizar el ADN? 00:11:43
La desnaturalización del ADN lo que implica es que se rompen los puentes de hidrógeno entre las dos cadenas, los puentes de hidrógeno entre las bases nitrogenadas, entre adenina, timina, citosina, guanina, los puentes de hidrógeno y entonces se separan las dos cadenas. 00:11:49
Y, importante, lo más habitual es realizar la desnaturalización térmica con temperatura. Y hay una temperatura característica que se llama temperatura de fusión, TM, la M es de melting en inglés, y esta es la temperatura a la que se desnaturaliza el 50% de la molécula. 00:12:07
Y luego vimos también que había otras formas de desnaturalizar, que puede ser con ácidos o bases o con agentes químicos. Aquí tenéis la desnaturalización, la separación de las dos cadenas. 00:12:33
Ahora ya entramos en el metabolismo, acordaros del dogma central, el ADN se replica, se hacen copias, copias idénticas, luego el ADN se transcribe a ARN mensajero y por último se traduce, se sintetizan las proteínas. 00:12:55
Importante, en la replicación, pues la hipótesis válida es la hipótesis semiconservativa 00:13:21
Entonces las células hijas van a tener una célula original y una copia 00:13:32
La otra doble hélice va a tener una cadena original y una copia 00:13:38
Esa es la hipótesis semiconservativa 00:13:44
Vale. Ahora, importante la replicación. Entonces, para la replicación lo que vamos a hacer es eso, copiar las dos cadenas de ADN. Entonces, vamos a necesitar una serie de enzimas. No sé si alguien quiere decir algo. 00:13:48
¿Os coméis un poco? 00:14:23
Ay, no entiendo 00:14:26
A ver, igual si voy a 00:14:27
A ver 00:14:30
No sé si lo puede repetir 00:14:44
Porque es que no entiendo 00:14:48
Bueno, luego si no al final 00:14:49
De la clase 00:14:59
Creo que alguien tiene el micrófono abierto 00:15:00
Y no se da cuenta 00:15:08
Creo que es Noria 00:15:08
Vale, vale 00:15:11
Bueno, pues seguimos 00:15:13
Bien, entonces teníamos la helicasa que rompe los fuentes de hidrógeno entre las dos cadenas. Después tenemos las topoisomerasas. Las topoisomerasas, acordaros, cuando abrimos las dos cadenas, la doble hélice, ¿qué pasa? Que aquí se nos va a originar una tensión. 00:15:15
Pues entonces, para eso están estas enzimas topoisomerasas, ¿veis? Acordaros, enzimas siempre terminan en asa. Estas topoisomerasas son las que van a aliviar esta tensión que se genera aquí. 00:15:38
Otras proteínas son las SSB, estas de aquí, que estas proteínas son las que van a hacer que se mantenga la cadena abierta, que no se vuelva a cerrar. 00:15:51
Y luego ya teníamos, una vez que ya está la cadena abierta, teníamos la primasa, la ARN primasa, que lo que hace es poner un primer, una secuencia de nucleótidos y a partir de esa secuencia, acordaros, ya la ADN polimerasa empieza a copiar las dos cadenas. 00:16:01
Ahora, si os acordáis, la ADN polimerasa leía bien la cadena de 3' a 5', pero la otra cadena, si os acordáis, la tiene que leer como si dijéramos al revés 00:16:28
Y entonces, por eso se forman los fragmentos de Okazaki, porque se van colocando varias primers y se va leyendo como si dijéramos al revés 00:16:44
Y luego, claro, estos fragmentos de ARN se tienen que eliminar y una vez eliminados hay que unir los fragmentos que quedan y se unen con la ADN digasa. 00:16:54
Entonces, bueno, la replicación en eucariotas, esta no la vimos. 00:17:20
Ahora, ya tenemos la transcripción de ADN a ARN mensajero. 00:17:29
Pues aquí tenemos también tres etapas. Una iniciación en la que la ARN polimerasa detecta una secuencia que es la secuencia del promotor y a partir de aquí comienza la elongación. 00:17:34
La ARN polimerasa comienza a copiar toda la cadena. Aquí solamente copia una cadena, porque aquí solamente estamos pasando del ADN a ARN mensajero. Solamente se va a copiar una cadena. A la vez que se va copiando, va saliendo la cadena copiada. 00:17:52
Y aquí ya tenemos ARN, o sea, aquí tendríamos ya uracil. Y luego hay una serie de, una secuencia también, una que se llama secuencias terminadoras, que son las que indican que hay que leer hasta ahí, hay que leer. 00:18:11
Y luego importante de aquí era la maduración, acordaros que maduración solamente había en eucariotas, porque la maduración consiste en la eliminación de los intrones, intrones eran secuencias de ADN que no codifican a ninguna proteína, por lo tanto hay que eliminarlas. 00:18:28
Y por último teníamos la traducción de ARN mensajero a proteínas. Acordaros que cada tres nucleótidos, que se llaman codón o triplete, tres nucleótidos codifican a una proteína. 00:18:49
¿Y cómo sabemos qué tres nucleótidos? Pues eso se identifica, o sea, nos ayudamos con el código genético. 00:19:10
Entonces, ¿cómo se hace esta traducción? Pues para ello necesitamos, por una parte, los ribosomas. 00:19:25
En los ribosomas es donde se va a situar el ARN mensajero. 00:19:33
Y ahora, ¿qué se necesita también? Los ARN de transferencia. Acordaros que esos ARN de transferencia tienen cada uno un aminoácido acoplado y además esos ARN de transferencia tienen un anticodón, o sea que es el complementario al codón que hay aquí. 00:19:37
Si aquí tenemos ACC, pues en el anticodón tendríamos, en vez de A, que es adenina, tendríamos U de uracilo y G de guanina y otra G de guanina. 00:19:58
Y acordaros que se van uniendo los aminoácidos, o sea, se van incorporando el ARN de transferencia, se van uniendo los aminoácidos, dando lugar ya a la proteína. 00:20:13
Bueno, ahora acordaros también aquí que el código genético está degenerado, es decir, que puede haber más de un codón que codifique al mismo aminoácido. 00:20:25
Bueno, pues ahora vamos a ver cómo se aíslan y cómo se purifican los ácidos nucleicos, pero bueno, vimos que había varias formas de extracción del ácido nucleico, los ácidos nucleicos que podían ser pues o rotura mecánica o puede ser con tratamiento químico con detergentes, por ejemplo, o también con digestión enzimática. 00:20:55
Vale, acordaros cuando hicisteis la práctica en casa que añadisteis detergente, jabón 00:21:26
Y entonces ese jabón lo que hace es romper la pared celular 00:21:38
Como la pared celular tiene lípidos, grasas, pues ese jabón destruye la pared celular 00:21:42
Y luego acordaros también que añadíais también zumo de piña o líquido de lentillas 00:21:50
Ese zumo de piña o el líquido contienen enzimas, proteasas 00:21:59
Que van a desnaturalizar a las proteínas que están unidas al ADN 00:22:07
Y así se nos va a quedar el ADN más puro 00:22:12
entonces tenemos 00:22:15
vale, y luego 00:22:19
lo último que hacéis 00:22:24
acordaros en la práctica que hicisteis 00:22:26
le añadíais 00:22:28
alcohol muy frío 00:22:30
y eso es para precipitar el ADN 00:22:31
y luego en la práctica 00:22:34
de casa no, pero 00:22:38
cuando se hace 00:22:39
en el laboratorio pues también se añade 00:22:42
un agente quelante, por ejemplo 00:22:44
el EDTA 00:22:45
o a EDT 00:22:46
y que hace este agente quelante 00:22:48
pues va a secuestrar los cationes 00:22:50
como calcio y magnesio 00:22:52
y así las enzimas, por ejemplo la A de NASA 00:22:53
que esta enzima 00:22:56
la A de NASA degradaría 00:22:58
al ADN 00:23:00
y eso no nos interesa 00:23:01
por lo que hacen estos 00:23:04
el EDTA atrapan 00:23:06
estos cationes, calcio y magnesio 00:23:08
y así no dejan actuar 00:23:10
a esta enzima, a la A de NASA 00:23:12
Aquí os pongo una auto-evaluación para que reforcéis esto. El etanol para qué es, el EDTA, el detergente, el SDS en este caso y las proteasas. 00:23:14
Las proteasas son las enzimas que eliminan las proteínas porque las degradan. 00:23:41
Bien, pues aquí teníamos cómo extraíamos el ADN plasmídico y que había dos opciones, la mini-prep y la maxi-prep, pero que en realidad era por la cantidad que se ponía. 00:23:47
Bien, bueno, aquí la extracción de la ARN, que es parecida. 00:24:07
Y ahora, para purificar el ADN, pues podíamos hacerlo por extracción con cloroforno y fenol, pero este no se suele hacer. 00:24:12
Y si no, también por centrifugación. Acordaros, en las prácticas cuando hicimos la PCR hicimos alguna centrifugación. 00:24:24
Y el siguiente paso sería la cromatografía, que teníamos cromatografía sobre gel, cromatografía de intercambio iónico y cromatografía de absorción. 00:24:34
Si os acordáis, también en la práctica que hicimos en el laboratorio, también, si os acordáis, teníamos unos tubitos que también hacíamos pasar por ahí nuestra disolución de ADN. 00:24:44
Así es un método para purificar el ADN y ahora podemos también cuantificar, podemos saber cuánto de puro tenemos en nuestro ADN y lo mediríamos mediante espectrofotometría ultravioleta, lo que os decía antes, medir a 260 y a 280 00:24:58
y según la relación podemos saber si está más puro o menos puro. 00:25:22
Pero bueno, este valor no lo aprendáis, simplemente saber que la relación esta 00:25:32
nos va a dar idea de cómo está nuestro ADN, cuál es la pureza de nuestro ADN. 00:25:38
Bien, y ya lo último que se hacía era separar el ADN mediante electroforesis en gel de agarosa. 00:25:46
Vale, entonces, bueno, esto luego lo explico un poco con más detalle. 00:26:02
Vamos a pasar este de aquí, esta parte. 00:26:11
Ah, vale, pues entonces ya está terminado esta unidad A3. 00:26:23
No sé si me queréis preguntar algo de aquí o pasamos a la 4. 00:26:30
Sí, no me quedó clara lo de la ligasa porque no estaba en las presentaciones. 00:26:42
Ah, no. A ver, la ligasa, ¿en qué parte? ¿En el metabolismo? 00:26:50
No, estamos en la primera fase de replicación. 00:27:01
Sí 00:27:06
Y está la helicasa 00:27:07
La topoisomerasa 00:27:10
Y al final está la helicasa 00:27:12
Pero que no estaba en las presentaciones 00:27:13
Ah, no estaba 00:27:16
Pues se me pasaría 00:27:17
Vale 00:27:20
Me lo voy a apuntar de todas formas 00:27:22
Para corregirlo 00:27:24
O me parece a mí, vamos 00:27:25
Sí, sí 00:27:29
Puede ser que se me haya pasado 00:27:30
Voy a apuntármelo 00:27:33
Vale, pues la ligasa lo que hace es que cuando nosotros en la cadena que, nosotros tenemos la cadena que se lee de 3' a 5', entonces la ADN polimerasa va leyendo seguido, ¿no? 00:27:35
En cambio, bueno, y aquí se pone un cebador al principio, un primer para que la ADN polimerasa comience a copiar, pero en cambio en la otra cadena, la que va de 5' a 3', pues en esta cadena se necesitan poner varios cebadores, no sé si en este dibujo, no, vale, bueno, se necesitan poner varios cebadores, entonces, varios cebadores o primers. 00:27:55
Esos cebadores hay que eliminarlos. Entonces, esos cebadores los elimina la ADN polimerasa, la 1 en este caso. Y al eliminar estos cebadores, claro, luego tienes que volver a unir los otros fragmentos de ADN que te quedan. 00:28:27
pues esos dos fragmentos 00:28:48
¿cómo se unen? Pues con la ADN 00:28:50
ligasa. No sé si 00:28:52
es que no sabía si cerraba 00:28:57
la cadena o si solo juntaba estos 00:29:00
trocitos. No, eso va juntando 00:29:02
pues eso, va eliminando 00:29:04
los fragmentos del 00:29:05
cebador 00:29:08
la ADN polimeras a la 1 00:29:09
elimina esos fragmentos del cebador 00:29:12
y luego la ADN ligasa 00:29:14
pues va uniendo esos fragmentos que 00:29:16
se han quedado sueltos 00:29:18
Vale 00:29:20
Gracias Rafa 00:29:22
Nada 00:29:26
¿Tenéis alguna otra duda de esta parte? 00:29:26
Bueno, pues vamos a pasar 00:29:34
al 4 00:29:35
Subido por:
Susana A.
Licencia:
Todos los derechos reservados
Visualizaciones:
8
Fecha:
31 de mayo de 2024 - 12:54
Visibilidad:
Clave
Centro:
IES LOPE DE VEGA
Duración:
30′ 04″
Relación de aspecto:
1.78:1
Resolución:
1280x720 píxeles
Tamaño:
658.87 MBytes

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