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Videoconferencia 21 de Mayo - Contenido educativo

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Subido el 27 de mayo de 2024 por Susana A.

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Importante de aquí, las funciones de las proteínas, ¿vale? Entonces, ahora seguro que muchas de estas funciones ya os suenan un poco más. El otro día vimos que, ¿os acordáis? Los anticuerpos que eran proteínas, los anticuerpos eran las moléculas que el cuerpo genera, el organismo genera para defenderse de un antígeno. 00:00:00
El antígeno era el patógeno, que podía ser una bacteria, un virus. Los anticuerpos son proteínas y por eso son de tipo defensivo, defensivas. 00:00:24
Ahora os sonará también más la ADN polimerasa. Esta ya la conocéis más de la síntesis del ADN. Esta tiene función enzimática. 00:00:38
¿Os acordáis también? La función estructural tenía, por ejemplo, el colágeno. El colágeno o la queratina también tiene función estructural. Y luego, por ejemplo, de transporte, sabemos la hemoglobina que transporta el oxígeno de la sangre. 00:00:47
Vale, entonces de estas funciones tenéis que saber alguna de ellas, ¿vale? Os puede caer en alguna pregunta de test, os puede caer algo de esto, de funciones de las proteínas. 00:01:04
Bueno, aquí tenéis una autoevaluación 00:01:21
que ya está, yo creo que ya la hicimos 00:01:24
Vale, bien 00:01:27
Otra cosa importante también de 00:01:33
bueno, esto ya lo sabemos, ¿no? 00:01:36
Las proteínas están formadas por aminoácidos 00:01:39
Bueno, pues tenemos que saber 00:01:41
la fórmula de estos aminoácidos, ¿no? 00:01:43
Cómo están formados por un grupo ácido, el COOH 00:01:47
y por un grupo amino 00:01:51
Y esta sería la parte común, bueno, con el hidrógeno de aquí, esto sería la parte común de todos los aminoácidos y luego saber también que lo que diferencia unos aminoácidos de otros es el radical, el grupo este R, el radical, ¿vale? 00:01:53
Importante también de los aminoácidos, que al tener un grupo ácido y un grupo básico, pues se comportan con, o sea, tienen carácter anfótero, es decir, que pueden actuar como ácidos o como bases. 00:02:13
como ácidos, pues perderán este protón de aquí 00:02:29
al reaccionar con una base 00:02:35
y se quedará este grupo como C o doble enlace O o menos 00:02:37
y como bases, pues al reaccionar con un ácido 00:02:41
se quedará este grupo de aquí como NH3+. 00:02:47
Entonces, esto es carácter anfótero. 00:02:50
Pueden reaccionar como ácidos o como bases. 00:02:54
Ahora, importante también, si os acordáis, hay un determinado pH, el número de cargas positivas como negativas es igual y ese es el punto isoeléctrico. 00:02:56
Y a esta molécula de aquí se le llama, o sea, se dice que se encuentra en forma de ión dipolar o suiterión. 00:03:14
Entonces, cuando tenemos el mismo número de cargas positivas como negativas, a ese pH se llama punto isoeléctrico y a esta molécula de aquí se le llama ión dipolar o suiterión. 00:03:22
Y ahora, cuando el pH es ácido, el aminoácido va a tener carga positiva. ¿Por qué va a tener carga positiva? Porque este NH2 de aquí se va a convertir en medio ácido en NH3+. 00:03:39
Y ahora, el medio básico, pues el aminoácido va a tener carga negativa. ¿Por qué? Porque el medio básico, este grupo de aquí, va a estar como C doble enlace O o menos. 00:03:59
¿Vale? Bien. 00:04:14
grupo metilo, un CH3. Pues esos son grupos R-A polares, alifáticos y A polares. Y estos 00:04:53
son algunos ejemplos. La glicina solamente tiene un grupo, o sea, el R es un hidrógeno 00:05:03
solamente. Este sería el más sencillo de todos los aminoácidos, la glicina. Luego 00:05:10
Polalanina, bueno, yo no me lo sé, no os voy a preguntar fórmula el aminoácido valina, yo os diré, pues a lo mejor si la valina tiene como grupo RCH3, este es un aminoácido alifático, bueno, lo pondré en forma de test, pero bueno, más o menos, sería algo así. 00:05:16
Este aminoácido es alifático, es aromático, es polar. Esto lo tenéis que saber. Estos son alifáticos. La glicina, la lalina, la prolina, la valina, la leucina, la isoleucina, la metionina. 00:05:40
Y luego tenemos los que tienen en el grupo R un grupo aromático, aromático es un ciclo de 6 átomos de carbono y esta sería el... 00:05:56
Como esto lo tenéis vosotros, si estáis con el ordenador pues ampliándolo vosotros a la vez que lo amplio yo, porque es que no sé cómo compartir esto. 00:06:13
Vale, entonces tenemos grupos apolares alifáticos, que serían, por ejemplo, CH3 o CH2CH3, serían estos de aquí, los aromáticos, que son los que ya os acabo de comentar. 00:06:26
Y después tenemos los grupos en los que tienen R polares, los radicales que sean polares, pero además sin carga. Y estos serían la serina, la treonina, la cisteína. 00:06:47
Por ejemplo, la serina. En el radical tiene CH2OH, pues esto es un grupo polar, pero es sin carga. Es CH2OH, esa es la serina. 00:07:00
Y luego, pueden haber también grupos polares, pero cargados positivamente. Por ejemplo, la lisina. Por la lisina, si nos vamos al cuadro en el que tenemos los aminoácidos, la lisina tiene 4 CH2 y luego tiene un NH2. 00:07:21
Pues la lisina es un aminoácido que es polar y que va a tener carga positiva. 00:07:41
Como tiene aquí un NH2, va a tener carga positiva. 00:07:50
Luego, los aminoácidos con grupos R cargados negativamente, por ejemplo, aspartato y glutamato. 00:07:57
Pues estos, por ejemplo, son el, aquí tenemos el aspartato, que es igual que el ácido aspártico, 00:08:04
y que tiene en el grupo R un CH2, COOH. 00:08:08
O el ácido glutámico, que en el grupo R tiene CH2, CH2, COOOH. 00:08:13
Pues estos dos aminoácidos son aminoácidos polares y con carga negativa. 00:08:19
Entonces, bueno, aquí también tenéis una autoevaluación, que esta ya la hicimos. 00:08:30
Vale, pues vamos a pasar al siguiente punto, que son los péptidos. 00:08:37
O sea, ya aquí empezamos a ver cómo se forman las proteínas. 00:08:47
Entonces, los aminoácidos se unen uno con otro y se forman lo que se llaman péptidos. 00:08:56
Si se unen dos aminoácidos, pues sería un dipéptido. 00:09:05
Si son tres aminoácidos, un tripéptido y así hasta polipéptido. 00:09:08
entonces si se unen menos de 10 aminoácidos se llama oligopéptido 00:09:12
y cuando se unen ya muchos aminoácidos se denomina polipéptido 00:09:20
y para formar una proteína se forma cuando tenemos más de 50 aminoácidos 00:09:27
O también se puede llamar proteína cuando tenemos masas moleculares mayor de 10.000 00:09:37
Entonces esto es importante, menos de 10 aminoácidos, oligopéptido 00:09:45
Más de 10 aminoácidos, polipéptido 00:09:53
Y cuando ya es más de 50 ya hablamos de proteínas 00:09:57
Y ahora otra cosa importante es que cuando se unen dos aminoácidos 00:10:01
La unión se produce por el grupo ácido de un aminoácido y el grupo amino del otro aminoácido. 00:10:09
Así se desprende una molécula de agua y se forma el enlace peptídico. 00:10:27
¿Os acordáis? Enlace peptídico. Este es un grupo amida. 00:10:33
Pero con que sepáis que es enlace peptídico. Se une la parte ácida de un aminoácido y el grupo amino del otro aminoácido. Se pierde una molécula de agua y esto se queda unido por medio de un enlace peptídico. 00:10:39
Bueno, pues así es como se forman las proteínas 00:10:57
Ahora, ¿qué es lo que ocurre? 00:11:05
Que las proteínas, claro, se van uniendo a los aminoácidos 00:11:11
Y por lo tanto, al final, los péptidos o las proteínas 00:11:14
Lo que tienen es, en un extremo, tienen un grupo amino, un NH2 00:11:20
Y en el extremo final tienen un grupo ácido 00:11:25
O sea, igual que los aminoácidos, lo que pasa es que en medio 00:11:29
pues tienen muchas uniones de aminoácidos. Vale, pues para nombrar una proteína se nombra 00:11:33
primero por el grupo amino, por el N terminal y el último aminoácido sería el que tiene 00:11:40
el grupo ácido. Vale, entonces otra cosa importante, claro, como tenemos grupo amino 00:11:48
y grupo ácido, pues las proteínas también van a tener comportamiento ácido básico 00:12:03
igual que los aminoácidos y por lo tanto tienen también carácter anfótero. 00:12:09
Pueden actuar como ácidos o como bases. 00:12:14
Bueno, aquí nos preguntaban si sabía representar este péptido. 00:12:24
Vale, esto yo creo que ya lo hicimos. 00:12:30
Vale, pues ahora ya pasamos a las proteínas. 00:12:40
Vamos a ver qué es lo más importante de las proteínas. 00:12:43
Bueno, pues cosas importantes de las proteínas. 00:12:50
Pues, vale, esto ya lo hemos dicho, son uniones de aminoácidos. Mirad aquí esta frase, cada proteína se forma siguiendo las instrucciones contenidas en el ADN, el material genético de la célula. 00:12:54
Esta frase ahora ya la entenderéis mejor. Estas instrucciones son las que determinan cuáles de los 20 aminoácidos se incorporan a la proteína y en qué orden relativo o secuencia lo hacen. 00:13:11
Entonces, a partir de los 20 aminoácidos, pues se van a formar unas proteínas u otras, a partir de la combinación de esos 20 aminoácidos. 00:13:23
Ahora, estas proteínas, para entender su estructura, se describen cuatro niveles estructurales. 00:13:37
Lo primero sería la estructura primaria. La estructura primaria es simplemente el orden y la secuencia de qué aminoácidos tiene esa proteína y qué orden, qué secuencia tiene. 00:13:47
Esa sería la estructura primaria. Y dependiendo de cómo sea esa estructura primaria, pues luego va a tener una forma, esa proteína va a tener una forma tridimensional u otra. 00:14:02
Y si se modifica un aminoácido, pues eso puede dar lugar a que la estructura sea diferente, la estructura tridimensional. 00:14:17
Entonces, estructura primaria, simplemente tipo de aminoácidos y número de aminoácidos y la secuencia, el orden que sigue. 00:14:27
Dependiendo de cómo sea esta secuencia de aminoácidos, las proteínas van a tener unas funciones u otras. 00:14:37
Ahora, esta secuencia de aminoácidos, ¿qué pasa? 00:14:42
Que se forman enlaces, dentro de la misma cadena se forman unos enlaces por puentes de hidrógeno 00:14:48
Que estos enlaces por puente de hidrógeno, ¿os acordáis? 00:14:58
Los enlaces por puentes de hidrógeno podían ser entre oxígeno e hidrógeno o entre nitrógeno e hidrógeno 00:15:04
Pues aquí se unen, o sea, se forman puentes de hidrógeno entre el hidrógeno del amino, de un aminoácido, y el oxígeno del carboxilo, de otro aminoácido. 00:15:12
Entonces, ¿qué pasa? Que esta estructura primaria que la teníamos así alargada, pues de repente se forma una unión entre un ácido de por aquí y un grupo amino de otro aminoácido cercano. 00:15:24
En concreto es en el cuarto aminoácido siguiente. ¿Y esto a qué da lugar? Pues a la estructura secundaria, que podía ser de estos dos tipos. Bueno, yo os conté un tipo más, el de colágeno, pero aquí con que os aprendáis estos dos tipos es suficiente. 00:15:37
entonces teníamos que estas uniones, si las uniones son entre un aminoácido y uno cercano 00:15:55
que es el cuarto siguiente, como os digo, pues se nos forma la estructura alfa hélice 00:16:03
que sería esto de aquí 00:16:09
ahora, si las uniones por puentes de hidrógeno se forman entre un aminoácido de aquí 00:16:10
y un aminoácido que está mucho más lejano, pues eso lo que nos va a dar lugar es a la estructura secundaria de hoja plegada, o beta, que sería esta de aquí. 00:16:19
Estas son uniones por puentes de hidrógeno, pero entre un aminoácido y otro que está bastante más lejano. 00:16:34
Entonces, estructura secundaria alfa-hélice o hoja plegada o beta o con formación beta. 00:16:40
Vale, entonces estas son las dos estructuras secundarias, pero claro, ahora una vez que tenemos así la proteína, ¿qué pasa? Pues que esta proteína adquiere otro tipo de estructura que es la estructura terciaria. 00:16:55
Y esta estructura terciaria también hay de dos tipos. La estructura terciaria ya es la estructura tridimensional. Y teníamos dos tipos de estructura terciaria. Puede ser con formación filamentosa o con formación globular. 00:17:20
La filamentosa es una sola estructura secundaria. Son proteínas que tienen un solo tipo de estructura secundaria. Por ejemplo, la hélice de colágeno. Aquí todas las cadenas tienen conformación de alfa-hélice. 00:17:40
Y en cambio, las proteínas que tienen conformación globular son las que tienen varios tipos de estructura secundaria. 00:17:58
Aquí no hay dibujo, pero sería en los apuntes que os di en las presentaciones, en un dibujo teníais lo que era la estructura globular, la conformación globular. 00:18:11
globular. Entonces, en la conformación globular tenemos una parte de la cadena que tiene conformación 00:18:25
de alfa hélice, otra parte de la cadena que tiene conformación beta, otra parte que es 00:18:33
conformación al azar, no tiene ninguna estructura secundaria. Luego sigue la cadena y ahí otra 00:18:40
vez vuelve a tener estructura de conformación de alfa hélice y así se van aglomerando, 00:18:46
van formando un glóbulo, la propia cadena va formando un glóbulo. 00:18:53
Y ahora, importante, pues las que tienen proteínas con conformación filamentosa 00:19:02
son insolubles en agua y en disoluciones salinas. 00:19:09
Y en cambio, las de conformación globular son solubles en agua y en disoluciones salinas. 00:19:13
Importante también, pues algún ejemplo de esta, de conformación filamentosa, 00:19:20
el colágeno y la queratina. Y ahora, de conformación globular, importantes, por ejemplo, serían las enzimas. 00:19:24
Las enzimas tienen conformación globular. Otras serían las globulinas, las albúminas, histonas, protaminas. 00:19:35
Y, por último, se pueden unir varias proteínas con diferentes conformaciones, dando lugar a la estructura cuaternaria. 00:19:45
Esta estructura cuaternaria no la tienen todas las proteínas, solamente la tienen algunas 00:20:06
Entonces, la estructura cuaternaria es la unión de varias cadenas proteicas que se llaman protómeros 00:20:15
Por ejemplo, la hemoglobina sí que tiene estructura cuaternaria 00:20:25
La hemoglobina está formada por cuatro cadenas distintas que forman un tetrámero. 00:20:32
Entonces, las estructuras son importantes. 00:20:39
Estructura primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria. 00:20:44
Las tenéis que tener claras. 00:20:47
Por aquí también tenéis una autoevaluación. 00:20:49
Vale, ahora teníamos las enzimas. 00:21:00
Las enzimas ya hemos dicho que son proteínas y que son de tipo globular. 00:21:02
O sea, estructura terciaria globular. Son importantes porque son biocatalizadores. ¿Por qué son biocatalizadores? Son biocatalizadores porque catalizan reacciones que ocurren en las células. 00:21:08
Por esto es lo de bio, bio porque ocurren en las células y catalizadores catalizan reacciones que ocurren en las células. Y ya vimos lo que era un catalizador. Un catalizador lo que hace es disminuir la energía de activación de una reacción química. 00:21:29
La energía de activación, ya vimos que es esto de aquí, es el paso anterior a formar los productos. 00:21:50
Los sustratos se transforman en un estado, primero tienen que pasar por un estado de transición. 00:21:58
Aquí en rojo tenemos que aumentar la energía hasta este estado de transición. 00:22:04
Ahora, si añadimos una enzima, el mecanismo ya es diferente y ya el estado de transición ya no es, no se necesita tanta energía para llegar a este estado de transición. 00:22:09
Pues esto es lo que hacen las enzimas, disminuyen la energía de activación de una reacción que ocurre en una célula. 00:22:21
Y vimos también que el mecanismo es que la enzima se une a un sustrato, o sea, a una molécula, por ejemplo, la lactasa que se une a la lactosa, a este sustrato. 00:22:30
Se une enzima-sustrato, se modifica el sustrato dando lugar a productos y, por último, la enzima queda libre por un lado y los productos de la reacción por otro lado quedan libres. 00:22:51
Entonces, esta enzima puede volver a reaccionar con un sustrato. 00:23:10
Entonces, importante también de las enzimas es que la velocidad depende de la concentración de sustrato que está presente en el medio. 00:23:15
En la presentación que os puse, os puse una gráfica en la que se veía cómo a baja concentración de sustrato la velocidad aumenta, al aumentar la concentración de sustrato, hasta llegar a un punto, hasta llegar a una concentración de sustrato en la que la velocidad ya se mantiene constante. 00:23:42
¿Por qué? Porque todas las enzimas ya se han saturado de sustrato y ya no puede aumentar más la velocidad, ya no hay enzimas que puedan reaccionar con ese sustrato, entonces la velocidad ya se mantiene constante. 00:24:04
Entonces, las enzimas, o sea, la velocidad a la que reaccionan las enzimas depende de la concentración de sustrato que esté presente. 00:24:18
Y ahora, otra cosa importante, nosotros habíamos visto que estas enzimas son proteínas globulares, o sea que estas enzimas forman un glóbulo y ahora en este glóbulo hay una zona que se llama sitio activo, que sería esto de aquí, sitio activo y este sitio activo es diferente para unas enzimas de otras. 00:24:33
Y este sitio activo es el que va a hacer que esta enzima, por ejemplo, pueda reaccionar con este sustrato de aquí, porque este sustrato encaja aquí, encaja en este hueco, en este sitio activo de la enzima. 00:25:05
Ahora, la enzima modifica a este sustrato, veis aquí ya tenemos dos productos, el azul y el rojo, 00:25:24
y como decíamos antes, la enzima queda libre y aquí tendríamos los productos de la reacción. 00:25:31
Bueno, pues por esto se dice que la reacción enzima-sustrato es específica. 00:25:38
Específica, ¿vale? 00:25:44
Tenemos dos modelos de definir esta especificidad, el modelo de llave-cerradura 00:25:45
y ahora se utiliza más el de encaje inducido. 00:25:51
Pero los dos vienen a decir lo mismo, que la enzima va a tener un hueco, un sitio activo que va a ser específico para un sustrato determinado. 00:25:56
Y luego tenemos también los nombres de las enzimas, bueno esto yo lo amplié un poquito, 00:26:14
pero de aquí lo que tenéis que saber es que las enzimas, el nombre familiar es el terminado en asa. 00:26:20
La enzima que modifica la lactosa es la lactasa, la que modifica la maltosa es la maltasa. 00:26:31
Todas las que terminan en asa son enzimas. 00:26:39
Por ejemplo, aquí tenéis la ADN polimerasa, que esta ya os suena más. 00:26:43
Es la enzima que cataliza la reacción de polimerización del ADN. 00:26:47
Ahora, importante también qué función o qué actividad tienen algunas de las enzimas. 00:26:57
Esto en realidad es fácil, ¿no? 00:27:05
Porque las oxidorreductasas, pues catalizan reacciones de oxidación-reducción, redox. 00:27:07
Transferasas, pues catalizan reacciones de transferencia de grupos activos. 00:27:14
activos. Hidrolasas catalizan reacciones de hidrólisis. Hidrólisis suele ser porque 00:27:18
a partir de un polímero, de una macromolécula, esa macromolécula se rompe y se quedan los 00:27:28
monómeros. Y estas son hidrolasas. Liasas son las que catalizan reacciones a las que 00:27:33
eliminan agua, CO2 o amoníaco y se forma un doble enlace. Estas quizás sean un poco menos 00:27:42
intuitivas. Luego están las isomerasas. Estas también son un poquito más complicadas. Actúan 00:27:50
sobre moléculas y dando lugar a diferentes tipos de isómeros. Es fácil ver de isomerasas, 00:27:59
pues se obtienen isómeros. Isómeros, no sé si habréis visto de química orgánica, 00:28:11
pero son moléculas que tienen la misma estructura química, pero que pueden tener diferente posición de sus... 00:28:21
Bueno, hay varios tipos de isómeros, de isómeros de función... 00:28:31
Vale, esto no me voy a meter en ello porque es complicarlo. 00:28:37
Y luego las ligasas son las que catalizan reacciones de la síntesis, la degradación o síntesis de enlaces fuertes. 00:28:43
Ligasas, o sea, ligasas que unen enlaces. 00:28:53
Entonces, óxido reductasas, transferasas, hidrolasas, liasas, isomerasas y ligasas. 00:28:59
Aquí teníamos esta autoevaluación, que yo creo que también la hicimos. 00:29:08
Es bueno que hagáis también estas autoevaluaciones, que os puede servir para luego el examen. Aunque no sea exactamente así como lo pongan, pero puede ser algo parecido. 00:29:12
Vale, pues luego vimos también cómo había que separar y extraer estas proteínas. Y había varios tipos para extraer las proteínas. 00:29:30
Entonces, teníamos la lisis celular, la destrucción mecánica y la congelación-descongelación 00:29:58
Bueno, pues de aquí tenéis que saber un poco lo que es cada método 00:30:11
La lisis, la destrucción y congelar y luego descongelar 00:30:17
De aquí saber estos tres tipos 00:30:24
Bueno, aquí lo único que nos indican es que para manipular las proteínas normalmente se utilizan disoluciones tamponadas y se suele trabajar a bajas temperaturas para que no se degraden estas proteínas. 00:30:27
¿Vale? Importante, claro, se trabaja con disoluciones tamponadas para que no haya cambios de pH y el cambio de pH puede desnaturalizar las proteínas. La desnaturalización era la rotura de todos los enlaces y quedándose la proteína con la estructura primaria. 00:30:55
Luego teníamos cómo podemos saber la concentración que tenemos de proteínas y teníamos también tres métodos. Estos métodos pues tienen que sonar Lowry, Bradford y luego era el método espectrofotométrico. 00:31:20
El espectro fotométrico simplemente era absorber luz ultravioleta, o sea, preparar una disolución en la que tenemos solo proteínas y miramos a ver cuánto absorben. 00:31:47
Y sabemos que las proteínas absorben a 280 nanómetros. 00:32:00
Este sería el método más sencillo y luego teníamos el método de Lowry y el de Bradford. 00:32:04
En estos métodos obteníamos sustancias coloreadas. Por ejemplo, aquí en el de Bradford hacíamos reaccionar nuestras proteínas con este colorante que al reaccionar con las proteínas pasa de color rojo a azul y lo que se hace también es medir en el espectrofotómetro. 00:32:09
Entonces, en las tres técnicas se mide con un espectrofotómetro, se mide luz ultravioleta, bueno, en este caso sería luz visible, luz ultravioleta visible sería en el visible, porque estamos aquí, 595, entonces de aquí eso es saber más o menos cómo es un poquito cada método, 00:32:27
Sobre todo eso que se utiliza un espectrofotómetro. 00:32:59
Aquí también tenéis una autoevaluación. 00:33:09
Esto sería cómo se mide la concentración de proteínas. 00:33:18
Y ahora pasamos a fraccionar esas proteínas. 00:33:29
Y teníamos también varios métodos. 00:33:34
Teníamos diálisis, cromatografía y electroforesis. 00:33:37
Bueno, pues de aquí tendríais que saber un poco lo que es la diálisis 00:33:40
Y luego tendríais que saber de la cromatografía 00:33:47
Pues un poquito que es la cromatografía 00:33:56
Cómo separar mediante una fase estacionaria y una fase móvil 00:33:59
Cómo separar los componentes de una muestra 00:34:06
y luego saber de los tres tipos de cromatografía que se ven 00:34:10
que son filtración en gel, intercambio iónico y afinidad 00:34:18
pues saber un poco la diferencia entre unas de otras 00:34:23
filtración en gel, separamos las proteínas según su tamaño 00:34:26
teníamos aquí unos polímeros que tienen una serie de oquedades 00:34:30
y se van quedando retenidas las proteínas de menor tamaño. 00:34:38
Y entonces así podemos separar por tamaños. 00:34:43
La de intercambio iónico, pues aquí separamos las proteínas según su carga. 00:34:46
En la fase estacionaria poníamos una fase estacionaria que tuviera carga negativa, por ejemplo, 00:34:52
y entonces ahí se quedarían retenidas las proteínas que tengan carga positiva. 00:35:00
Y así se pueden separar unas de otras. 00:35:05
Y por último la de afinidad, la cromatografía de afinidad. Aquí lo que podíamos separar era, por ejemplo, aquí vais a entender mejor esta porque podríamos tener aquí una serie de anticuerpos como fase estacionaria y añadimos en la fase móvil los antígenos y si se quedan unidos es que hay reacción. 00:35:08
También podría ser en reacciones encima-sustrato. 00:35:38
Aquí tenéis otra autoevaluación. 00:35:56
Aquí dice si el principio del método de separación es la interacción entre moléculas de uno de los componentes de la muestra y moléculas unidas al soporte, hablamos de... 00:36:02
Pues sería cromatografía de afinidad. 00:36:12
Entonces, esto sería cromatografía y luego teníamos cromatografía. Aquí no está explicada, pero sí que tenéis que saber lo que es la cromatografía en capa fina. 00:36:14
Que eso lo tenéis en las presentaciones y también hicimos la práctica de cromatografía en capa fina. Si os acordáis teníamos una fase móvil que era una mezcla de disolventes, tenemos una fase estacionaria que es el gel de sílice. 00:36:39
y entonces de ahí tenéis que saber 00:36:58
pues por ejemplo 00:37:01
si tenemos, estamos separando 00:37:03
una serie de aminoácidos 00:37:04
pues como 00:37:06
porque unos quedan retenidos 00:37:07
más abajo y en cambio otros suben más 00:37:10
a lo largo de la 00:37:12
fase estacionaria 00:37:14
a lo largo del gel de sílice 00:37:16
como se calculan los RF 00:37:18
esas cosillas 00:37:21
tenéis que saber, eso lo tenéis 00:37:23
en las presentaciones 00:37:24
Y por último teníamos la electroforesis. La electroforesis sé que es un poquito más complicada. De la electroforesis pues tenéis que saber lo que es el concepto. 00:37:26
O sea, separamos las proteínas y las separamos mediante aplicación de un campo eléctrico. 00:37:44
Entonces, tenéis que saber, por una parte, cómo la fase sólida de esta técnica sería el gel de poliacrilamida. 00:37:54
Entonces tenéis que saber cómo se prepara este gel de poliacrilamida, pues a ver por ejemplo la función del TEMED, acordaros que este era el catalizador y luego teníamos el persulfato, que por aquí ahora no lo veo, aquí, el persulfato y el TEMED, 00:38:14
Estos son los que van a iniciar y aceleran el proceso, el persulfato y el temen. Estos son los que van a hacer que la acrilamida, si os acordáis, de acrilamida pasemos a poliacrilamida. 00:38:39
Y luego teníamos la bisacrilamida, que es la que va a unir esas cadenas de poliacrilamida. 00:38:56
Entonces tenéis que saber cómo se forma el gel de poliacrilamida. 00:39:08
También saber que la acrilamida y la bisacrilamida son neurotóxicos, 00:39:23
entonces que hay que trabajar en campana, con guantes, mascarilla, etc. 00:39:30
Y luego ya una vez que se forma ya el polímero, ya el polímero ya no es neurotóxico, 00:39:36
lo único que hay que tener cuidado pues si acaso queda algún monómero por ahí libre. 00:39:43
De esta electroforesis también saber que una vez que, o sea, por un lado preparamos el gel de poliacrilamida 00:39:55
Y ahora, por otro lado, teníamos que añadir el SDS para cargar a la proteína. 00:40:03
Vale, pues aquí se ha quedado esto atascado, a ver, sí, ahora. 00:41:02
Vale, entonces lo que hacíamos era utilizar un reactivo que se llamaba el SDS 00:41:22
y este reactivo lo que hacía era primero desnaturalizar la proteína, 00:41:28
es decir, se nos va a quedar la proteína con la estructura primaria 00:41:34
y aparte de eso, lo que hace es cargar a la proteína con carga negativa. 00:41:39
Por lo tanto, todas las proteínas se van a desplazar cuando nosotros apliquemos el campo eléctrico, 00:41:47
todas las proteínas se van a desplazar hacia el polo positivo 00:41:53
y se van a desplazar unas más que otras dependiendo de su masa molecular. 00:41:57
Por lo tanto, cuando nosotros estamos haciendo una electroforesis en condiciones desnaturalizantes, es decir, utilizamos el SDS para desnaturalizar la proteína y para cargarla negativamente, lo que hacemos es separar a estas proteínas por su masa molecular. 00:42:04
y ¿cuál es la diferencia? O sea, ¿cuáles se van a mover más o menos? 00:42:24
Pues como el gel de poliacrilamida es un gel que tiene una serie de orificios, 00:42:31
las que tengan menor masa molecular pues van a pasar a través del gel y van a aparecer más abajo 00:42:39
y las que tengan mayor masa molecular van a quedar más retenidas y quedarán más arriba. 00:42:46
Además, en este gel de poliacrilamida lo que hacemos es poner un patrón, un patrón de proteínas, 00:42:54
del que tenemos varias proteínas con diferentes masas moleculares y que se van a ir moviendo también cuando apliquemos el campo eléctrico 00:43:00
y que luego vamos a ver como una serie de bandas. 00:43:10
Ahora, con estas bandas que nos aparecen aquí, lo que hacemos es representar el logaritmo de la masa molecular frente a la distancia que recorren. 00:43:13
Y así, comparando, pues vamos a saber, por ejemplo, esta proteína, ¿qué masa molecular tiene? 00:43:41
Esta es la electroforesis. 00:43:55
Importante, los reactivos que se necesitan para formar el gel de poliacrilamida. 00:43:57
Y luego, para las proteínas, que hay que cargarlas con carga negativa, que se utiliza el SDS. 00:44:04
y cómo se mueven del polo negativo hacia el polo positivo cuando se aplica el campo eléctrico. 00:44:11
Pues esta sería la electroforesis. 00:44:22
Y luego ya tendríamos los puntos que vimos el otro día de identificación. 00:44:26
Ya tenemos nuestras proteínas, ahora queremos identificarlas. 00:44:32
Este método de Edman, este no lo estudiéis. 00:44:36
Este no lo he explicado, así que este no va a entrar. 00:44:40
El que sí que es importante es el MALDITOF. 00:44:44
Si os acordáis, está basado en una técnica de espectrometría de masas. 00:44:48
Y lo que hacíamos era aplicar un láser a nuestra muestra y hacer que nuestra muestra se cargue positivamente. 00:44:53
Y luego se analizan estos iones. 00:45:01
Y luego teníamos la identificación de antígenos y anticuerpos. 00:45:09
anticuerpos, acordaros que eran los ensayos inmunológicos, acordaros que la reacción 00:45:22
antígeno-anticuerpo es específica, cada antígeno reacciona con un anticuerpo y la 00:45:36
La técnica más importante de hacer estos ensayos inmunológicos es la técnica ELISA, que es una técnica en la que tenemos varios tipos. 00:45:45
teníamos el ISA directo, el ISA indirecto 00:46:04
y el ISA sandwich 00:46:08
y lo que es importante 00:46:09
vale, aquí ya está 00:46:13
bueno, esta sería la reacción que se especifica 00:46:16
antígeno, anticuerpo 00:46:19
importante 00:46:21
eso que hay cuatro tipos 00:46:23
no, cuatro no, tres tipos 00:46:26
directa, indirecta 00:46:31
Y sandwich, importante, pues que lo que se hace es que al anticuerpo se le une una enzima y a esa enzima luego se le va a adicionar un sustrato que va a reaccionar con esa enzima y va a dar un compuesto coloreado. 00:46:33
Y este compuesto coloreado es el que se va a determinar mediante espectrofotometría. 00:46:52
Entonces, la técnica Malditov es la técnica de espectrometría de masas y, en cambio, en la técnica Elisa se utiliza la espectrofotometría. 00:46:57
Y luego, acordaros también en el Bradford, Lowry y el espectrofotométrico, en esos la técnica que se utiliza es la espectrofotometría también. 00:47:16
Vale, pues esto sería así lo más importante de proteínas. 00:47:28
Bueno, luego tenéis también aquí la bioinformática. 00:47:43
De aquí, pues importante saber que la página está del NCBI. 00:47:51
NCBI, National Center for Biotechnology Information y importante que suene este, el BLAST, que es para comparar secuencias de una proteína que hemos obtenido, pues para compararlas con una base de datos. 00:47:56
Autor/es:
S.A.
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Susana A.
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27 de mayo de 2024 - 16:04
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