Videoconferencia 28 mayo. Segunda parte - Contenido educativo
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Vale, pues en este tema, cosas importantes.
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Bien, empezábamos con el corte, cómo se cortaban las... cómo se podía cortar el ADN.
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Entonces, importante aquí, hay una serie de enzimas que se llaman endonucleasas de restricción o enzimas de restricción que cortan el ADN en puntos determinados.
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determinado. Esos puntos se denominan sitios de restricción. Estas endonucleas, estas
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enzimas, se obtienen de bacterias o de células prokaryotas. Y acordaros que teníamos varios
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tipos. Teníamos las de tipo 1 y tipo 3 y las de tipo 2. Las que nos interesan a nosotros
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son las de tipo 2 porque son las que van a cortar de manera consistente, o sea, en el sitio donde a nosotros nos interesa.
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En cambio, las de tipo 1 y las de tipo 3 cortaban lejos del sitio de restricción, lejos de donde a nosotros nos interesa que se corte el ADN.
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Y ahora, las de tipo 2 necesitaban magnesio como cofactor. Acordaros que algunas enzimas necesitan de un cofactor para poder actuar y, bueno, que no necesitan energía.
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Ahora, estas endonucleasas, importante también, cortan en secuencias palindrómicas, acordaros que las secuencias palindrómicas eran aquellas que se leen igual la secuencia del 5' a 3' como la de la cadena complementaria también de 5' a 3'.
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Aquí tenemos adenina, timina, citosina, citosina, aquí A, T, C, C, D, ¿vale? Se leen igual.
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Entonces, las endonucleasas de restricción cortan secuencias palindróficas.
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Y acordaros que cada enzima de restricción cortaba una secuencia.
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Teníamos, por ejemplo, la ECO-R1, ¿vale? Que cortaba, pues bueno, ahora no me acuerdo qué secuencia cortaba,
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pero cada una corta en una secuencia determinada.
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Cosas importantes también, pues que una vez que la enzima corta,
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puede ser que se formen o extremos rumos o extremos cohesivos.
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Los extremos rumos son de este tipo, el corte es vertical y no quedan bases desapareadas.
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Y en cambio los extremos cohesivos, el corte es de este tipo y sí que quedan bases desapareadas
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y por eso se llaman también extremos pegajosos porque luego al quedar bases desapareadas
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luego va a ser fácil unir otra vez, puede ser con esta misma cadena o con otra cadena
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que se haya cortado con la misma enzima, como por ejemplo cuando se hace al cortar el ADN,
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cuando la técnica de ADN es recombinante.
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Entonces, importante de aquí, las enzimas cortan enlaces fosfodiéster, ¿vale?
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Aquí estamos cortando enlaces, por ejemplo, entre citosina y la guanina. Aquí estamos cortando enlaces fosfodiéster. Y luego había unas enzimas que se llaman las ADN ligasas. Bueno, aquí hablábamos un poco de cómo se nombraban estas enzimas, estas endonucleasas, de la bacteria de la que provenían, etc.
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y una vez que está cortado el ADN, pues ahora lo que se puede hacer es unirlo
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y veíamos que los extremos cohesivos eran fáciles de unir porque ya tenemos aquí bases desapareadas
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y en cambio si se quiere unir extremos romos es más complicado porque aquí no hay bases desapareadas
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y entonces lo que se hace es añadir una serie de nucleótidos para que se pueda unir bien
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Y ahora la unión va a ser un enlace, se va a formar un enlace fosfo-diéster.
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Entonces, esto sería el corte y la unión.
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Después teníamos la hibridación.
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La hibridación, acordaros, el objetivo de la hibridación es detectar si tenemos una secuencia de ADN determinada.
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¿En qué se basa esta técnica?
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Pues se basa en que como el ADN lo podemos desnaturalizar, es decir, abrimos las dos cadenas y ahora lo que hacemos es, en vez de que se unan estas mismas cadenas,
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que se han desnaturalizado, que hemos abierto, pues ahora lo que vamos a hacer es añadir una secuencia de ADN
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que sea complementaria a una de esas cadenas, a un fragmento de esas cadenas.
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Y además, esa secuencia de ADN que añadimos va a estar marcada, se llama sonda y está marcada con un fluoróforo, por ejemplo.
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Entonces cuando se una la cadena de ADN que teníamos con el fragmento de ADN que estamos añadiendo, si son complementarias se van a hibridar, se van a unir y eso lo vamos a poder detectar después.
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Y acordaros que teníamos varios tipos. Era la SAUDEN, que era con fragmentos de ADN. Luego teníamos la NORDEN, que era añadir ARN. Lo que hacíamos era hibridar fragmentos de ARN.
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ARN y aquí lo único, una diferencia aquí en la SAUDEN, primero teníamos que cortar el ADN y sin embargo en la NORDEN con el ARN no hace falta cortarlo porque es una cadena más corta, pero luego el procedimiento era el mismo.
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Y después teníamos la misma técnica pero que se hacía in situ, no hace falta extraer el ADN. Esto era la hibridación. Después teníamos la secuenciación, conocer los nucleótidos que forman el ADN y el orden de estos nucleótidos.
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Esto ha tenido mucha importancia para conocer el genoma humano, el proyecto del genoma humano.
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Y acordaros aquí, la técnica que se utiliza, la que es un poco más sencilla, es la técnica Sanger.
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Acordaros que aquí teníamos cuatro tubos y que, importante aquí, en cada uno de ellos poníamos un didesoxirribonucleico.
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Tridesoxinucleótido trifosfato, ¿vale? Bueno, da una adenina, acordaros que no tenía OHs y que por lo tanto no puede continuar copiándose la cadena.
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Y acordaros que luego se hacía una electroforesis y que a partir de la electroforesis se puede deducir cuál es la secuencia de nucleótidos del ADN que estamos analizando.
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Entonces, importante de aquí es lo que se utiliza, aparte de, o sea, es como copiar la cadena de ADN, lo que pasa, si eso se copia con la ADN polimerasa, necesitamos también un cebador, necesitamos también los cuatro nucleótidos, los de siempre, los normales, pero luego necesitamos otros cuatro nucleótidos que no tengan OH en la pentosa, en el grupo azúcar.
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Y en cada tubo de estos se añadía aquí la adenina sin la didesoxi, aquí la timina, la citosina, la guanina, en cada uno de ellos uno diferente.
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Esta es la técnica Sanford.
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Y luego teníamos ya unas técnicas más actuales de secuenciación, que ya eran con reactivos fluorescentes y ya no hacía falta poner cuatro tubos, en un mismo tubo ya se conseguía analizar.
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la de la técnica Sanger
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luego teníamos la PCR
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bueno, vamos a ver primero
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la clonación
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la del ADN recombinante
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y luego volvemos aquí
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vale, aquí
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la clonación, la técnica del ADN recombinante
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acordaros
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en esta técnica es una técnica
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de clonación celular
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es clonación celular porque
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estamos utilizando células
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en la PCR
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es una clonación a celular y ahora qué es lo que se pretende con esta técnica
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pues obtener grandes cantidades de un fragmento de adn que sabemos que
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codifica a una proteína que a nosotros nos interesa obtener mucha cantidad de
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esa proteína puede ser la insulina la hormona del crecimiento o cualquier otra
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proteína. Entonces, ¿cómo hacíamos? Lo que hacíamos era cortar el fragmento de ADN
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que nosotros sabemos que codifica esa proteína y utilizábamos un vector de clonación.
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¿Os acordáis? Lo que tenemos que cortar con las mismas endonucleasas de restricción.
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Y luego lo que hacíamos era unir estos dos fragmentos, el fragmento de ADN que habíamos cortado con nuestro vector de clonación.
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Uníamos y aquí ya tenemos el ADN recombinante, porque son los dos fragmentos de ADN.
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Y luego lo que hacíamos era insertar este ADN recombinante en una célula y hacer que creciera.
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Ahora, cosas importantes de aquí, pues cómo eran los vectores de clonación, cómo tenían que tener una secuencia para que se puedan replicar por sí mismos, cómo tenían que tener también alguna secuencia.
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Si os fijáis aquí en esta gráfica de la derecha, aquí teníamos también secuencias donde pueden cortar las endonucleasas. Por ejemplo, aquí cortaría la eco R1, aquí cortaría otra endonucleasa.
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Entonces tenemos diferentes secuencias donde pueden cortar las enzimas de restricción.
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Importante también, estos vectores tienen que tener una secuencia que nos sirva para luego identificar si el plasmio se ha introducido en la célula o no.
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Y esas secuencias normalmente son secuencias que tienen resistencia a antibióticos.
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O sea, son marcadores que son genes que dan resistencia a antibióticos.
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Bueno, normalmente el más típico vector de clonación son los plásmidos,
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luego teníamos los bacteriófagos, los cósmidos, los BAC, los JAK.
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Y ahora lo que hacíamos era introducir ese ADN recombinante en la célula hospedadora.
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Acordaros también que las células tenían que tener una serie de características.
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Y por último, tenemos que comprobar si esa célula hospedadora tiene el plasmido.
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Primero tenemos que identificar si esas células han adquirido el plasmido.
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¿Cómo se hace eso? Pues se pone el cultivo en un antibiótico. Ahora, si está el plásmido, como este plásmido tiene resistencia a los antibióticos, pues crecerán esas bacterias, pero si no tiene el plásmido, pues esas bacterias no van a crecer.
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A ver, voy a buscar a ver si eso está, si lo teníamos por aquí. Bueno, eso es, primero identificamos aquí, identificamos las bacterias que tengan el plásmido, entonces ponemos en antibiótico, pues solamente van a crecer esta de aquí de la izquierda, esta que tiene el plásmido.
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Y lo siguiente que tenemos que ver es que si esas bacterias, además de, o sea, si tienen el ADN recombinante y para ello había otra forma que era, vale, a ver dónde está esto, aquí.
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Entonces, para ver si la célula se ha modificado, o sea, si contiene el ADN recombinante, lo que hacíamos era romper aquí este gen en el plásmido, que este gen codifica a proteínas que tienen color azul.
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Por lo tanto, si introducimos aquí, si rompemos aquí esta secuencia, este gen, e introducimos aquí nuestro fragmento de ADN de interés, pues se va a romper este gen y ya no se nos van a formar células de color azul, sino que se nos van a formar células de color blanco.
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Entonces, primero identificar si la célula contiene el plásmido y segundo identificar si realmente tenemos el ADN recombinante o solamente tenemos el plásmido
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Y otra cosa aquí que se me ha olvidado deciros, cómo se transformaban las células, que podía ser por competencia natural, por competencia artificial o por electroporación
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Bueno, estos eran los hospedadores, los eucarióticos y algunas aplicaciones del ADN recuminante. Y ahora volvemos a la PCR.
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Bueno, la PCR. Importante lo que significa la sigla PCR, de reacción en cadena de la polimerasa. Importante también las etapas, la desnaturalización, es decir, que se rompen los puentes de hidrógeno entre las bases nitrogenadas.
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La hibridación, aquí se necesitan dos primers, estos dos primers son los que delimitan el fragmento que se va a copiar y ahora una vez que ya están los primers, la etapa de elongación, es decir, la ADN polimerasa empieza a copiar esas dos cadenas.
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Ahora, otra cosa importante. Estas tres etapas se repiten cíclicamente entre 20 y 40 veces. Acordaos de cuando pusimos en las prácticas y se van aumentando exponencialmente las cadenas de ADN.
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Y acordaros también de los componentes de la PCR. ¿Qué necesitamos? Pues el ADN que se quiere copiar. Bueno, importante, perdón, antes de esto, el objetivo de la PCR.
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El objetivo es obtener muchas copias de un fragmento de ADN partiendo de un mínimo. Aquí lo que os decía antes, aquí en este caso es una clonación acelular, porque aquí no tenemos ninguna célula, es una clonación acelular.
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Entonces, esos son los componentes que necesitamos. El ADN molde. Luego, la TAC polimerasa. Acordaros que antiguamente se utilizaba otra enzima pero que no resistía a los cambios de temperatura y en cambio está así. La TAC polimerasa resiste a los cambios de temperatura.
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Necesitamos eso, dos primers o cebadores.
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Los desoxinucleótidos, para que la ADN polimerasa vaya copiando y vaya cogiendo la adenina, la timina.
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También se necesita iones magnesio, dos más, para estimular a la enzima.
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Los iones magnesio actúan de cofactor, para que la enzima actúe.
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Y luego se necesita también que todo ello hacerlo en una disolución que sea amortiguadora, ¿vale? Porque acordaros que dependiendo del pH las proteínas se pueden desnaturalizar.
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Y por último se necesita el termociclador.
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Entonces, ¿problema de la PCR? Pues que, claro, es una técnica muy sensible, muy sensible que significa que con una mínima cantidad de muestra podemos obtener gran cantidad de copias de ADN.
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Pero claro, ¿cuál es el problema? Que si hay una pequeña contaminación, pues puede ser que se nos amplifique un fragmento de ADN que no nos interesa, o sea, que no es el que a nosotros nos interesa.
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Por lo tanto, una solución a este problema es la PCR en tiempo real o cuantitativa. Si os acordáis, en esta PCR lo que hacíamos era, los primers estaban marcados con un fluoróforo, es decir, son como una serie de sondas.
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y así podíamos ir analizando, cuantificando cómo se va amplificando el ADN
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y además así en la PCR normal teníamos que hacer después de la PCR
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se hace una electroforesis en gel de agarosa, pues aquí no es necesario hacer la electroforesis.
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Vale, y luego teníamos la transcriptasa inversa que es simplemente para que partimos del ADN.
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Entonces necesitamos encima que la transcriptasa inversa que sintetice el ADN complementario.
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Entonces, ahora quería poneros de la práctica que hicimos.
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Esto no está bien preparada la presentación, pero solamente es para repasar lo que hicimos en la práctica.
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Entonces, si os acordáis en la práctica que hicimos teníamos cuatro muestras de maíz y queríamos saber cuál era transgénico
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En el aula virtual tenéis el protocolo de la práctica que era de la marca de BioT
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Y ahí os explica, hay un poco de introducción de teoría de lo que son los transgénicos
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O sea, los compuestos transgénicos son aquellos a los que se ha introducido un gen diferente.
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Entonces, en esta práctica lo que nos interesaba era saber cuál de estas cuatro muestras de maíz, cuál era transgénico.
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¿Cómo hicimos la práctica? Pues en la primera etapa lo que hicimos fue extraer el ADN.
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En esta etapa, esto lo tenéis como se hizo en el protocolo, pero esto no lo tenéis que aprender, solamente eso, saber que extrajimos el, primero había que extraer el ADN, que esto fue lo que nos llevó un día entero.
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El siguiente paso que hicimos fue ya hacer la PCR
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Entonces en el kit que ya nos ofrecían en BioT
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Ya teníamos lo que se llama mix de la PCR
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Pues aquí en este mix ya teníamos todos los componentes que acabamos de ver
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Ahora los componentes para hacer la PCR
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Acordaros que poníamos en el Ependor
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Ependor que eran muy pequeños
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y que lo poníamos en el termociclador.
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Ahora, una cosa importante, aquí está, siempre estamos hablando que en la PCR tenemos dos primers,
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que esos dos primers van a amplificar un segmento de ADN.
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Pues aquí, en este caso, en esta práctica, lo que tenemos son cuatro primers.
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Dos primers van a amplificar regiones de maíz normal, regiones endógenas.
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Y ese fragmento, como luego vamos a hacer una electroforesis, pues nos debería aparecer a 226 pares de base.
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Y los otros dos primers nos van a amplificar genes foráneos, o sea, nos van a amplificar genes que nos están identificando que tenemos maíz transgénico.
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transgénico. Y ese gen foráneo va a ser un fragmento que va a aparecer a 184 pares
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de bases cuando hagamos la electroforesis. Entonces tenemos cuatro primers en el mismo
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ependor. Dos amplifican a maíz, un gen de maíz normal, endógeno, y otros dos primers
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Nos amplifican un gen de maíz transgénico foráneo.
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Entonces hicimos la PCR, bueno, pusimos el programa de temperaturas que nos indicaban para hacer las tres etapas
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y pusimos, me acuerdo, creo que 25 ciclos, no me acuerdo muy bien.
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Ahora, una vez terminada la PCR, lo que tenemos que analizar, tenemos que ver es si hemos amplificado el fragmento de ADN que a nosotros nos interesa y además con la electroforesis vamos a identificar en este caso si tenemos ADN transgénico o no, o sea, perdón, maíz transgénico o no.
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Por lo tanto, lo que hicimos luego fue hacer la electroforesis en gel de agarosa, pero para eso tuvimos primero que preparar el gel de agarosa.
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¿Os acordáis? El gel de agarosa lo preparamos disolviendo agarosa en una disolución tampón que se llama tampón TAE.
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T-A-E. Entonces, aquí acordaros que teníamos, o sea, había que ver qué tamaño eran nuestras cubetas. Hay diferentes tamaños de cubeta, tenemos 7x7, 7x10 y 15x11.
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La que nosotros teníamos era la de 7 por 10 y en esta cubierta caben 60 mililitros de disolución.
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Entonces, acordaros que teníamos que disolver la agarosa en el tampón TAE.
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Ahora, la disolución de agarosa que se prepara es al 3%.
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O sea, que si preparáramos 100 mililitros, pues tendríamos que pesar 3 gramos de agarosa. Pero como nosotros necesitamos 60 mililitros, pues si solo queremos 60 mililitros, tendríamos que calcular cuánta agarosa necesitamos para disolver en esos 60 mililitros.
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O sea, 3 gramos de agarosa en 100 mililitros, o sea, 3 gramos dividido entre 100 por 60 mililitros.
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¿Queremos preparar el doble? ¿Por qué queremos hacer dos geles?
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Pues serían 3 por 120 partido de 100.
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Y los gramos que nos salgan aquí serían los gramos que tenemos que disolver.
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Si os acordáis, los disolvíamos, no me acuerdo si utilizamos R. Meyer o una botella, no me acuerdo muy bien.
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y lo metíamos en el microondas, luego lo echábamos a la cubeta y colocábamos el peine para que se nos generara cuando se enfríe, que se nos queden los pocillos.
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En esos pocillos es donde ya introducíamos nuestra muestra.
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Ahora, antes que esto, para preparar, o sea, para disolver el gel de agarosa, perdón, la agarosa se disuelve en disolución tampón TAE, pero tenemos que disolverlo en disolución tampón TAE de 1 por, pero la que teníamos era de 50 por.
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Entonces tenemos que hacer los cálculos, esto es la concentración, teníamos que hacer los cálculos para preparar 1 por, entonces esto es por la relación de concentraciones, V1 por C1 igual a V2 por C2,
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Pues calculamos qué volumen tenemos que coger de la disolución de 50 por, de la que está más concentrada, o sea, 3 mililitros, tenemos que coger 3 mililitros de la disolución de 50 por y enrasar con agua hasta 150, porque son 150 mililitros los que preparamos en las prácticas.
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Si yo os digo, pues vamos a preparar 200 mililitros de disolución tampón TAE, 1 por, ¿cuál volumen tendrías que coger si tenemos de la concentración es 50 por?
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Pues sería aquí lo mismo, aquí pondríamos en vez de 150, pondríamos 200 por 1 dividido entre 50, bueno, el 10 a la menos 3 lo podríamos quitar.
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vale entonces esto sería eso para preparar el gel de agarosa
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y luego ya pondríamos la muestra en los pocillos y si os acordáis pusimos las
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cuatro muestras y luego pusimos los controles negativos
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y un control positivo no perdón esto está mal es era un control negativo y
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y dos positivos. Entonces, el control positivo era una disolución de ADN que lo daban ya en el kit y que es maíz normal.
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Y había otro control positivo, vale, esto es positivo, esto de aquí, otro control positivo en el que teníamos la disolución de ADN de maíz transgénico.
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Por lo tanto, si os acordáis, pinchábamos las muestras, aplicábamos el campo eléctrico, como el ADN tiene carga negativa se va a desplazar hacia el polo positivo y se van a separar unos fragmentos de ADN de otros por su masa molecular.
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Por lo tanto, bueno, aquí no tengo cómo daría en total, ¿no? Pero bueno, para que lo veáis un poco, el control negativo, pues, bueno, perdón, el control positivo, ¿no? Teníamos, a ver, sí, aquí el 2 y el 3 es lo mismo, es control positivo de ADN, o sea, de maíz normal, serían esta el 2 y el 3.
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Pues esta solamente nos tiene que dar un fragmento a 226 pares de bases, que es lo que hemos visto antes, que era el principio, aquí, ¿vale? Si es maíz normal nos tiene que salir a 226 y si es transgénico a 184.
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Por lo tanto, el maíz normal nos tiene que dar simplemente una banda a 226.
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Y el 4 y el 5, que son estos dos, nos van a salir dos bandas, la de 226 y la de 184.
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Y ahora, imaginaros que en esta de aquí, que hemos puesto maíz normal, nos hubiera salido otra banda.
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¿Qué nos está diciendo eso? Pues que algo ha fallado en la PCR, hemos debido hacer algo mal,
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porque no tiene por qué salir aquí otra banda de maíz transgénico.
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Ahora, imaginaros que aquí, en la que hemos puesto ADN transgénico, no nos sale esta banda, la de 184.
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¿Qué nos está indicando esto? Pues también que hemos hecho algo mal de la PCR, o la PCR, o la electroforesis.
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Algo ha salido mal, porque aquí no nos está dando banda de 184 de maíz transgénico. Por eso se hacen los controles.
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Y luego aquí he puesto esta otra que sería, esto ya son muestras y entonces aquí lo que nos están indicando que la 2, la 4, la 5 y la 7 son maíz transgénico porque nos aparecen dos bandas.
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esta sería 226 y esta 184
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y en cambio la 3 y la 6 es maíz normal
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porque solamente nos aparece una banda
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vale, bueno pues esto era lo que quería que vierais
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y vale, de esto
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de electroforesis en gel de poliaquilamida
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mirad también, creo que es en el tema, en la unidad 3
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viene también un ejercicio
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de, creo que es aquí en esta parte
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electrofrenesis
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electrofrenesis
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bueno, en las videoconferencias
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ya os expliqué como se hacía la electrofrenesis
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por aquí había un ejercicio
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para hacer
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pues ahora no lo encuentro
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a lo mejor era en el otro
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Profe, perdón, quería hacer
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una pregunta porque me puede conectar ahorita
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pero ya me toca volver a entrar a trabajar
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Sí, sí, dime
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De cara
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al examen como tal
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¿Cómo va a estar?
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¿Cómo va a ser el examen?
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¿Cómo se va a colocar
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la parte práctica? ¿Va a poner ejercicio?
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¿Cómo va a ser el examen como tal?
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Y perdone
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si lo comentó antes porque es que ahorita
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fue que me pude conectar
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el otro día yo creo que ya
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ya lo dije pero no pasa
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nada
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voy a poneros en el aula virtual
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a ver si puedo ir mañana
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os pongo por escrito
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como va a ser el examen
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pero os lo digo también
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en principio
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todavía no
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lo tengo terminado
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pero habrá 25
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alrededor, de 25
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más o menos, preguntas de test
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con 4 respuestas
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¿vale?
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cada 4 mal restan
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una bien
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puede que haya también alguna pregunta
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de verdadero o falso
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y puede que igual haya
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alguna pregunta también
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de escribir
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pero igual, simplemente igual
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rellenar una frase
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o algo
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o escribir una frase pero corta
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vale, entonces
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las preguntas de test
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y bueno, las de verdadero
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y falso en general
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miraros las
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autoevaluaciones que habéis hecho porque serán
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de ese estilo
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miraros también
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lo que os decía
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antes, en cada unidad
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de trabajo, a lo largo de cada
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documento vais teniendo
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ahí preguntas
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no sé si lo llaman autoevaluación, no sé cómo se llama
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pero ahí también tenéis cosillas, miraros eso también
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¿vale?
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¿qué más? luego va a haber
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problemas de
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la parte de replicación
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bueno, más bien de transcripción y de traducción
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aquellos problemas que hicimos
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pues de esos de
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Si tengo la cadena de ARN mensajero, una serie de nucleótidos, ¿qué proteínas se sintetizan?
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Yo os daría el código genético y vosotros tenéis que ir cada triplete, pues este metionina, tal, así, de ese estilo de los que hicimos.
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De esos ejercicios también había alguno que había algún dibujo que teníais que poner, había uno que era la transcripción o la traducción y teníais que poner cuáles eran los ribosomas, cuáles eran el ARN de transferencia, el aminoácido y eso.
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Miraros esos ejercicios. Y después, ¿habrá algún ejercicio que esté más relacionado con lo que se llama supuestos prácticos?
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Esos ejercicios, ¿qué puede ser? Pues puede ser una cromatografía en capa fina, por ejemplo
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Que eso lo vimos en prácticas y vimos también en la simulación
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En una de las videoconferencias hicimos una simulación con el programa este de Biomodel
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Puede ser que os pregunte algo también relacionado con la electroforesis en gel de poliacrilamida
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Que eso no hemos hecho prácticas, pero sí hicimos una simulación también con un biomóvil.
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Puede ser esto último que hemos visto de electroforesis en gel de agarosa, cómo preparar el gel, cómo preparar la disolución TAE, puede ser cómo se hace la PCR.
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y pues también podría ser
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quizá si os acordáis
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de
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en la técnica Sanger
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que también se pueden identificar
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la secuencia de aminoácidos
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que hicimos un problema
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podría ser eso también
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y
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pues ahora mismo
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no se me ocurre así
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así nada más
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eso sería
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más o menos el examen
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Vale, gracias
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Y luego
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lo que os decía también
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la parte, la primera
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que es de test y esa parte
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eso contará entre un 40 y un 60%
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eso todavía no lo tengo
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decidido
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y bueno, luego
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luego tenéis también los que habéis hecho las prácticas
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porque eso al final también cuenta
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siempre es para subir nota, nunca para bajar
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y pues eso más o menos
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sería el examen
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yo os pondría, os voy a poner también en el documento
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este, os voy a poner
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bueno, que tenéis que traer calculadora
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el DNI
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tenéis que ser puntuales
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¿vale?
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y bueno, antes de eso
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¿tenéis alguna duda de
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de esto
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de la parte de teoría
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de lo que hemos visto hoy?
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¿alguna otra duda?
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así de
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no, vale
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- Autor/es:
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- Susana A.
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- 31 de mayo de 2024 - 12:23
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