Enterotubos - Contenido educativo
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Los enterotubos son sistemas de 12 sectores que contienen medios de cultivo que permiten
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identificar bacterias de la familia de las enterobacterias y también algunas otras que
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sean gran negativas y oxidasa negativas. El sistema permite inocular simultáneamente
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todos los medios de cultivo y ejecutar 15 reacciones bioquímicas. Según la interpretación
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de estas reacciones bioquímicas como positivas o negativas, tras la incubación se obtiene
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una codificación numérica que permitirá identificar al microorganismo sembrado. Los reactivos se pueden
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comprar ya preparados pero también pueden hacerse en el laboratorio. El reactivo de COVAX se prepara
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disolviendo el perimetilaminobenzaldehido en alcohol y luego se añade lentamente el ácido.
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Así preparado debe tener un color amarillo paja y si se observa en cualquier momento un color
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marrón oscuro no debe utilizarse. Se debe preparar en vitrina de gases y se almacena
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en un frasco de color topacio y en refrigeración. Los reactivos Borges-Proskauer 1 y 2 pueden ser
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preparados como se indica en el vídeo. Después de su preparación son estables durante algunas
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semanas en frasco color topacio, cerrados herméticamente y mantenidos en refrigeración.
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El microorganismo a identificar ha de ser de aislamiento reciente.
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Si procede de cultivos con más de 48 horas, pueden dar lugar a resultados erróneos.
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Antes de sembrar el microorganismo, es necesario realizar una tinción de gram y la prueba de la oxidasa.
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Podrán ser sembradas las bacterias gram negativas que sean oxidasa negativas.
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Para ilustrar esta práctica se utilizarán los sistemas de la marca Entero Pluritest de la casa comercial Leofilchem
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Se toma un sistema Entero Pluritest y se anota la identificación de la muestra y la fecha de ejecución
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A continuación se desenroscan ambos capuchones del sistema, trabajando junto al mechero
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Utilizando la punta del hilo de inoculación colocada bajo el capuchón blanco y sin flamear, se toma una colonia bien aislada, teniendo cuidado de no penetrar en el agar que la sustenta
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Se debe observar una cantidad visible de inóculo en la punta
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Se inocula el sistema tirando del hilo por el extremo opuesto, girándolo y extrayéndolo a través de todos los sectores del sistema
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Después se reintroduce el hilo con un movimiento giratorio hasta la muesca de rotura
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Se rompe el hilo por la muesca plegándolo
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La parte del hilo que queda dentro del sistema mantiene el ambiente anaerobio necesario
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para las reacciones de los compartimentos glucosa, lisina y ornitina
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Utilizando la parte del hilo que ha quedado rota y que no se ha depositado en ningún sitio
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continuando en la mano del operador se agujerea la película de plástico por los orificios
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correspondientes de los sectores adonitol, lactosa, arabinosa, sorbitol, vp, dulcitol pa, urea y
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citrato para aportar un ambiente aerobio. La punta se desecha a bolsa de autoclave y ya por último se
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enroscan los dos capuchones. El entero tubo inoculado se incuba colocándolo horizontalmente
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o de forma vertical en una gradilla, a 36ºC durante 18-24 horas.
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Así acaba la primera sesión de trabajo.
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Tras la incubación, se observa el viraje de color de los sectores
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y se interpretan los resultados con la tabla junta.
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Se van transcribiendo los resultados obtenidos a la hoja de recogida de datos.
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Para constatar como positivo el test gas,
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se debe observar si la cera está separada del medio o no.
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En este caso es positivo.
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Se siguen apuntando los resultados, como positivos o negativos, según el color observado.
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Para las pruebas de indol y vp es necesario añadir reactivos. Para ello hay que agujerear
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la película de plástico. Lo más seguro para esto es utilizar una punta de pipeta
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estéril. Se hace un orificio de aproximadamente 3 o 4 mm de diámetro.
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Para el test del indol se añaden 3 o 4 gotas de reactivo de COVAX en el sector H2S indol.
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realizan la campana de gases. La reacción positiva sería la aparición de una coloración rosa-roja
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antes de 10-15 segundos. En este caso es negativa. Para el test de Bohr-Sproch-Cower se añade en el
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compartimento VP3 o 4 gotas del reactivo de VP1 y a continuación 2 o 3 gotas del reactivo VP2.
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La reacción positiva sería la aparición de una coloración roja antes de 20 segundos.
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En este caso es positiva.
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Ya solo resta obtener el código numérico.
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Los 15 test bioquímicos se encuentran divididos en 5 grupos que contienen 3 test
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y a cada uno se le asigna un valor de positividad.
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4 para el primer test positivo de cada grupo, 2 para el segundo y 1 para el tercero.
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En caso de que el test sea negativo se le asigna 0.
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Se suma entonces los valores para cada grupo y sostiene un código de 5 cifras.
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Este código se busca en el manual que la casa comercial pone a disposición de los clientes
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y que se puede consultar en la página web indicada.
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En el caso analizado, el código obtenido ha sido el 64163,
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correspondiendo a la especie Enterobacter cloacae.
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Los enterotubos, una vez analizados, se depositan en doble bolsa de autoclave
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y se llevan al mismo a 121 grados durante 15 minutos.
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Luego la bolsa se anuda y se desecha.
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- Idioma/s:
- Autor/es:
- Raquel Bermejo
- Subido por:
- Raquel M. B.
- Licencia:
- Reconocimiento - No comercial
- Visualizaciones:
- 68
- Fecha:
- 18 de marzo de 2024 - 17:03
- Visibilidad:
- Clave
- Centro:
- IES LOPE DE VEGA
- Duración:
- 08′ 52″
- Relación de aspecto:
- 1.78:1
- Resolución:
- 1280x720 píxeles
- Tamaño:
- 203.06 MBytes
