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UT7 - Fundamentos de Hibridación Molecular - 1ª Parte - Contenido educativo

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Subido el 18 de marzo de 2024 por Pedro M.

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Bien, vamos a empezar el tema 7 de hibridación de ácidos nucleicos. 00:00:01
Este tema, os recuerdo que es... 00:00:06
Vamos a ver los fundamentos de la hibridación de ácidos nucleicos 00:00:08
que nos va a dar la base para poder entender bien 00:00:12
todas las técnicas de hibridación. 00:00:15
Bien, vamos a empezar a ver unas generalidades sobre la hibridación 00:00:20
y su aplicación en la biología molecular. 00:00:23
Y lo que vamos a ver en este vídeo, fundamentalmente, 00:00:26
van a ser las bases teóricas de la hibridación. 00:00:28
En la segunda parte del tema veremos los tipos y características de las sondas, cómo se marcan las sondas, fundamentalmente qué tipos de sondas podemos utilizar en las técnicas de hibridación, los métodos de marcaje y de purificación de la sonda no son tan importantes porque normalmente cuando compramos una sonda ya viene marcada, pues el marcaje y su purificación no suelen ser necesarios. 00:00:30
Y una parte que es muy importante es las fases de la hibridación. 00:00:56
Todo esto lo explicaremos en la segunda parte del tema. 00:01:02
En este tema, por tanto, nos vamos a centrar en los dos primeros puntos de la unidad de trabajo. 00:01:05
Bien, la hibridación de ácidos nucleicos, ya hemos hablado de la hibridación, 00:01:13
en el tema 2 del temario consiste en la unión de dos moléculas que son monocatenarias 00:01:17
para formar una molécula bicatenaria. 00:01:23
La característica de la hibridación es que esta molécula es híbrida. Recordad que no es lo mismo el proceso de renaturalización y de desnaturalización-renaturalización que la hibridación. 00:01:27
Cuando hablamos de hibridación hablamos de que estas dos moléculas monocatenarias no estaban unidas ni asociadas inicialmente, por tanto son de origen diferente. 00:01:41
Por tanto la hibridación es un proceso de construcción artificial que no se da de forma natural y espontánea en el laboratorio, una construcción artificial de ácidos nucleicos bicatenarios. 00:01:55
Lo único que tiene que cumplirse para que se pueda dar la hibridación es que las dos cadenas sean complementares. Es el único requisito, ¿de acuerdo? De esa manera ya sabéis que tenemos híbridos DNA-DNA, híbridos RNA-RNA, híbridos DNA-RNA, ¿de acuerdo? 00:02:07
¿no? ¿Cuál es el objetivo de todas las técnicas de hibridación? Si en las técnicas de PCR el objetivo 00:02:28
es amplificar una secuencia, si en las técnicas de secuenciación el objetivo es conocer la secuencia 00:02:37
de nucleótidos, ¿cuál es el objetivo de la hibridación, de las técnicas de hibridación? El 00:02:44
objetivo es detectar, detectar secuencias concretas. Estas secuencias de ácidos nucleicos, imaginaos 00:02:49
que purificamos el genoma completo de unas células, de un tejido, de un individuo y en ese genoma 00:02:57
queremos detectar una secuencia de un gen, en concreto detectarla, identificarla, ¿se encuentra 00:03:04
la secuencia o no? Ese proceso de detección es de secuencias concretas. Estas secuencias es lo que 00:03:11
llamamos las secuencias diana. De tal manera que después de realizar la hibridación vamos a poder 00:03:20
obtener estructuras bicatenarias que están formadas por una secuencia diana y una sonda 00:03:28
pequeña, pequeñita, una sonda que es la que va a reconocer dicha secuencia diana. ¿De acuerdo? 00:03:34
Por tanto, las técnicas de hibridación nos van a permitir detectar secuencias diana empleando, utilizando sondas marcadas. 00:03:41
Os recuerdo que en biología molecular una sonda es un pequeño fragmento monocatenario de ácidos nucleicos parecido a un primer. 00:03:54
La diferencia entre una sonda y un primer es que la sonda suele ir marcada. 00:04:06
¿Cómo podemos marcar estas sondas? Normalmente se pueden marcar por radiación, con fluorescencia, se pueden marcar con aptenos, todo esto lo veremos en la segunda parte de la explicación del tema. 00:04:11
¿De acuerdo? Por tanto, en todas las técnicas de hibridación, en todas, partimos de una muestra, en este caso, en el ejemplo que nos ponen en el dibujo, es un DNA bicatenario. 00:04:28
Para poder realizar la hibridación necesitamos las hebras monocatenarias, el DNA del paciente, el DNA que hemos extraído monocatenario. 00:04:41
Para ello podemos jugar con la temperatura, como ya sabemos. 00:04:49
Este DNA monocatenario le vamos a tirar, entre comillas, le vamos a lanzar la sonda marcada y vamos a estudiar si la sonda complementaria existe en el DNA del paciente o no. 00:04:54
¿Cómo lo veremos? Si hay secuencia complementaria la sonda queda unida y veremos una hibridación positiva por marcaje positivo. 00:05:08
Si no hay complementariedad de bases, por tanto, en el DNA del paciente no existe la secuencia diana, la hibridación es negativa, no observaremos el marcaje. 00:05:17
Bien. Hay diferentes técnicas de hibridación y todas ellas se diferencian, se pueden clasificar dependiendo de estos cuatro parámetros, dependiendo del tipo de ácido nucleico que detectamos. 00:05:29
O sea, la secuencia diana puede ser de DNA o de RNA 00:05:45
El tipo de sonda que vamos a utilizar también puede ser una sonda de DNA, de RNA 00:05:49
O incluso una sonda sintética, ya lo veremos 00:05:55
El tipo de marcaje, que ya hemos dicho que puede ser radioactivo 00:05:58
Pueden ser fluorocromos, pueden ser aptenos 00:06:02
Y el medio o soporte 00:06:06
De esta manera tenemos técnicas de hibridación en medio sólido, en medio líquido 00:06:08
y técnicas de hibridación in situ. ¿De acuerdo? Muy bien. Para poder entender bien todo el proceso 00:06:14
de la hibridación que ya hemos dicho que es un proceso artificial que hacemos en el laboratorio 00:06:21
que no ocurre en la naturaleza, hemos de repasar el proceso de desnaturalización y de renaturalización 00:06:29
porque la hibridación comparte muchas características de la desnaturalización y de la 00:06:35
renaturalización. Hay cosas que vamos a ver en este apartado que en realidad son un repaso de lo que 00:06:41
ya vimos en el tema 2. La desnaturalización ya sabemos que es una propiedad físico-química de 00:06:47
todos los ácidos nucleicos, en concreto del DNA, que es bicatenario y consiste en la separación de 00:06:53
las dos hebras complementarias que forman parte del DNA. Esta desnaturalización la podemos conseguir 00:07:00
de dos maneras, o aumentando la temperatura o aumentando el pH. Aumentando la temperatura es 00:07:06
lo que hacemos en los ciclos de PCR, en la fase de desnaturalización. Esta cinética y la dinámica 00:07:12
de la desnaturalización la podemos representar gráficamente con lo que llamamos una curva de 00:07:20
fusión de cualquier molécula de DNA. Pues cualquier molécula de DNA picadenario podemos elaborar su 00:07:25
curva de fusión. La curva de fusión, como muchos parámetros en biología molecular, va a tener una 00:07:33
forma sigmoidea. ¿Cómo la hacemos? Vamos midiendo la absorbancia a 260 nanómetros de forma continua, 00:07:41
o sea, tenemos el DNA en un tubo y le vamos a irradiar con luz de 260 nanómetros y vamos a ir 00:07:48
midiendo la absorbancia de forma continua y de la misma manera simultáneamente vamos a ir 00:07:57
aumentando la temperatura. A medida que aumentamos la temperatura ocurre, obtenemos la curva de 00:08:02
fusión. La curva de fusión tiene esta morfología sigmoidea. Aquí representamos la temperatura 00:08:09
desde normalmente 4 grados, vamos a ir aumentando paulatinamente la temperatura y aquí vamos a ir 00:08:15
detectando y graficando el porcentaje de desnaturalización, es decir, entre comillas, el número de puentes 00:08:22
de hidrógeno de esta molécula que se han desnaturalizado y se han roto, ¿de acuerdo? Ya veis que como todas 00:08:30
las gráficas y sigmoideas tiene tres regiones, una primera región o región de latencia en la cual 00:08:38
aunque vayamos aumentando la temperatura, esa temperatura no es suficiente como para que se 00:08:46
produzca desnaturalización. No es suficiente para romper puentes de hidrógeno. Por tanto, durante 00:08:51
esta fase, al aumentar la temperatura, seguimos en el 0% de desnaturalización. Hasta que llega un 00:08:58
momento, en la segunda fase, donde hay un punto de inflexión, como veis aquí. Es aquel en el cual, 00:09:05
al aumentar un poquito más la temperatura, ya se empiezan a romper puentes de hidrógeno. 00:09:13
Bien, esta fase es una fase exponencial, como toda curva sigma idea, de tal manera que al aumentar muy poquito, muy poquito, muy poquito a poco la temperatura, los puentes de hidrógeno que se van rompiendo son muchos. 00:09:18
De tal manera que en muy poco rango de temperaturas, prácticamente pasamos del 0% o 10% de desnaturalización al 80-90% de desnaturalización. 00:09:34
Y llega un momento en el que ya se llega al 100% de desnaturalización y por mucho que aporte más temperatura ya las cadenas no se produce más desnaturalización porque las cadenas están completamente separadas. 00:09:51
Muy bien, en esta curva distinguimos un parámetro que es muy importante que es la temperatura de melting. ¿Qué es la temperatura de melting? La temperatura de melting o de fusión es la temperatura a la cual el 50% de los puentes de hidrógeno se han roto. Por tanto, es aquella temperatura en la cual se alcanza el 50% de desnaturalización. 00:10:04
¿De qué depende esta temperatura de melting? 00:10:29
Esta temperatura de melting depende de la composición de bases nitrogenadas 00:10:33
De tal manera que, si os acordáis, entre guaninas y citosinas tenemos tres puentes de hidrógeno 00:10:38
Si aquí en esta línea continua tenemos la curva de fusión de una molécula ideal de ácido nucleico 00:10:47
En la cual el 50% son guaninas y citosinas 00:10:54
por tanto el otro 50% son adeninas y timinas 00:10:57
pues tendríamos esta curva, ¿sí? 00:11:01
¿Qué es lo que ocurre o cuál es la curva de fusión 00:11:04
para una molécula en la cual el porcentaje de GCs 00:11:08
es del 20% y por tanto el 80% son adeninas y timinas? 00:11:12
Que la temperatura de melting, 00:11:17
aquella temperatura en la que se alcanza el 50% de desnaturalización 00:11:19
si os dais cuenta, la temperatura de melting es menor. 00:11:22
Necesito aportar menos energía para que se rompan los puentes de hidrógeno. 00:11:27
¿Por qué? Porque hay muchísimas menos guaninas y citosinas que adeninas y timinas. 00:11:32
El caso contrario lo representa esta molécula, donde el 80% son guaninas y citosinas. 00:11:37
Por tanto, la temperatura de melting será mayor. 00:11:43
Necesito aportar más energía para que se puedan desnaturalizar. 00:11:46
¿De acuerdo? 00:11:52
cualquier molécula de dna siempre se va a representar va a tener una temperatura de 00:11:52
melting que va a estar comprendida entre una molécula poliate esto es una molécula de dna 00:12:01
bicatenaria en la que todas las bases son adeninas y timinas no hay ni una sola citosina ni una 00:12:08
guanina esta molécula es la que presenta la temperatura de melting menor que sería esta de 00:12:14
aquí. El extremo opuesto lo compone una secuencia, una molécula de DNA cuya secuencia está formada 00:12:20
única y exclusivamente por guaninas y citosinas, ¿sí? Presentará una temperatura de melting 00:12:30
máxima. Entonces, entre esta temperatura de melting mínima del poliate y esta temperatura 00:12:36
de melting máxima del poligc, tenemos todo un rango de temperaturas de melting, de tal manera 00:12:43
que cualquier molécula de dna cualquier molécula de dna tendrá una temperatura de melting comprendida 00:12:51
entre la mínima y la máxima de acuerdo muy bien y la re naturalización cuando hablamos de la red 00:12:56
actualización si os acordáis en el tema 2 decíamos hablamos de re naturalización como el proceso por 00:13:06
el cual dos moléculas de DNA que están separadas, que se han separado por desnaturalización térmica, 00:13:15
se vuelven a reasociar. Por tanto, hablamos de renaturalización cuando dos hebras monocatenarias 00:13:23
que ya estaban unidas y las hemos desnaturalizado se vuelven a reasociar. Esto ocurre en la naturaleza 00:13:31
cuando disminuimos la temperatura, y esto ya lo sabemos, ¿de acuerdo? 00:13:39
Importante, el proceso de renaturalización es tremendamente más complejo, 00:13:45
muchísimo más complejo, es una cinética distinta y más compleja que la desnaturalización. 00:13:53
Romper puentes de hidrógeno es muy fácil. 00:13:59
Ahora, dos moléculas tremendamente largas, grandes, 00:14:02
que encuentren secuencias complementarias, que encuentren la base nitrogenada complementaria 00:14:06
y empiecen a formar de nuevo los puentes de hidrógeno, 00:14:13
esto es un proceso mucho más lento y muchísimo más complejo. 00:14:17
Esto lo tenemos que tener siempre en cuenta. 00:14:21
Muy bien, ¿de qué depende la cinética de renaturalización? 00:14:25
Pues una diferencia muy importante con la desnaturalización 00:14:29
es que si hemos dicho que la desnaturalización 00:14:32
Influye la composición de bases, porcentaje de guaninas y citosinas 00:14:34
En la renaturalización uno de los factores que influyen es la concentración 00:14:39
A mayor concentración del DNA 00:14:45
Mayor probabilidad de que se encuentren las secuencias complementarias 00:14:48
Y por tanto la renaturalización es más sencilla 00:14:55
Mayor concentración, mayor cantidad de DNA en el tubo 00:14:58
Pero más fácil es la renaturalización, mayor velocidad de renaturalización, ¿de acuerdo? Primera idea que tenemos que tener clara en la cinética de renaturalización, ¿de acuerdo? Esto sencillamente es para recordaros la idea que he dicho antes. 00:15:02
Fijaos, aquí tenemos un DNA bicatenario que lo hemos desnaturalizado y ahora tenemos esto. Son moléculas tremendamente largas que se tienen que reasociar otra vez, pero no de cualquier manera, sino que cada base nitrogenada tiene que encontrar su complementaria en la secuencia de la otra hebra. 00:15:19
Por lo tanto, es un proceso muchísimo más complejo y más lento. ¿De acuerdo? Esta cinética de la renaturalización tiene dos fases. Esto los científicos que lo estudian son científicos teóricos, pero sí que parece ser que hay una primera fase de nucleación que es muy lenta, muy lenta. ¿Qué es esto de la nucleación? 00:15:42
Pues si teníamos nuestro DNA bicatenario, que lo hemos desnaturalizado, lo que se observa es que al ir disminuyendo la temperatura poco a poco, hay un momento en el que estas moléculas monocatenarias, estas hebras, se empiezan a aproximar unas con otras y a lo largo de toda la molécula se empiezan a formar lo que vemos aquí, un centro de nucleación. 00:16:06
Un sitio donde hay 3 o 4, 5, 6, 7 pares de bases que son complementarias y forman puente de hidrógeno. 00:16:28
Y esto ocurre, a ver si puedo pintar, esto ocurre no solamente en esta zona, sino que ocurre, puede ocurrir muy a lo largo de toda la molécula, en varios sitios. 00:16:37
¿De acuerdo? De tal manera que se pueden reasociar en varios sitios, ¿de acuerdo? Sí, aquí se forman puentes de hidrógeno, aquí también se formarían puentes de hidrógeno, ¿de acuerdo? Y aquí se formarían puentes de hidrógeno. 00:16:52
En este caso, tenemos tres zonas de nucleación. Esta fase de nucleación, ya he dicho que es muy lenta, muy lenta. ¿Por qué? Porque, claro, daos cuenta que estas hebras monocatenarias son tremendamente largas. 00:17:09
Se tienen que posicionar una al lado de la otra para que se vayan encontrando pequeñas regiones de secuencia complementaria y formen puentes de hidrógeno, ¿de acuerdo? Una vez ocurren y se empiezan a formar estos centros de nucleación, ahora lo que ocurre es una fase que llaman en inglés ziperin, con dos P's, aquí lo tenemos, el ziperin o zipping, ¿de acuerdo? Es la fase de cierre en cremallera. 00:17:24
Esta fase es tremendamente rápida. ¿Y qué es lo que ocurre? Algo así parecido a lo que se está dibujando aquí. ¿De acuerdo? Es como si desde estos centros de nucleación hacia arriba y hacia abajo se empiezan a formar los puentos de hidrógeno complementarios ahora de forma muy rápida. ¿Por qué? Porque esta base y su base complementaria ahora están muy próximas. 00:17:52
esta y esta también están muy próximas 00:18:16
por tanto, este puente de hidrógeno se forma de forma muy fácil 00:18:20
pero es que este de aquí ahora ya ha quedado próximo con este 00:18:23
por tanto, este nuevo puente de hidrógeno también se forma de forma 00:18:27
se forma muy rápidamente, ¿de acuerdo? 00:18:30
por tanto, parece ser que en la dinámica de la renaturalización 00:18:34
hay una fase lenta de formación de centros de nucleación 00:18:41
y una vez formado unos cuantos centros de nucleación 00:18:45
se produce un cierre en cremallera, una fase tremendamente rápida. 00:18:48
¿De acuerdo? 00:18:53
Bueno, esto solamente para que sepamos un poquito más 00:18:53
de cómo es la cinética de renaturalización. 00:18:56
Estamos hablando de la velocidad de renaturalización. 00:18:59
Esta velocidad de renaturalización, 00:19:02
hemos dicho que depende de la concentración. 00:19:04
Aquí la tenemos. 00:19:07
Concentración. 00:19:09
Se puede calcular con esta fórmula que no hay que aprender la fórmula. 00:19:09
¿De acuerdo? 00:19:14
Aquí el parámetro más importante es este de aquí, este término de aquí, C0T, es decir, la concentración inicial por el tiempo. Fijaos que está en el denominador y esto es importante. 00:19:14
De tal manera que en base a este parámetro de la velocidad de renaturalización 00:19:29
Podemos obtener una gráfica también con la cinética de renaturalización 00:19:36
Uy, no sé qué le ha pasado a la presentación 00:19:42
Pero bueno, entonces representando la fracción de DNA renaturalizado 00:19:44
El porcentaje frente al logaritmo de CT 00:19:50
Que es este parámetro de aquí, ¿de acuerdo? 00:19:52
Podemos representar la curva de renaturalización y esta curva, la renaturalización, está relacionada con la complejidad del DNA que se renaturaliza, ¿de acuerdo? 00:19:55
Y esta es la segunda diferencia entre la renaturalización y la desnaturalización. 00:20:11
es decir, en la renaturalización no influye la longitud de la molécula 00:20:15
las moléculas pueden ser muy largas o muy cortas, da igual 00:20:21
se van a desnaturalizar siguiendo la misma dinámica 00:20:24
pero en la renaturalización no 00:20:28
renaturalizan a una velocidad mayor aquellas moléculas más simples 00:20:30
menos complejas, más pequeñas, menos largas 00:20:36
Aquí, por ejemplo, vemos la cinética de renaturalización de ADN complementario de un virus 00:20:40
Fijaos qué tamaño tiene, 3.500 pares de bases, es pequeñito 00:20:48
¿De acuerdo? Por tanto, su velocidad va a ser menor 00:20:52
Perdón, el CT va a ser menor 00:20:56
Eso significa que la velocidad va a ser mayor 00:21:00
Va a renaturalizar más fácilmente 00:21:02
Os recuerdo que el CT está en el denominador 00:21:04
Tiro para atrás 00:21:06
El CT está en el denominador 00:21:07
¿Os acordáis? Por tanto, si esto es muy grande, la velocidad es muy pequeña. ¿Sí? ¿De acuerdo? Por tanto, aquí estamos representando el logaritmo, tampoco nos confundamos. Cuanto más sencillo es el DNA, cuanto más cortas son las moléculas de DNA, mayor velocidad de renaturalización, renaturaliza mejor. 00:21:10
Fijaos que esta es mucho más larga y ya si nos vamos a Escherichia coli, que es una bacteria, todavía más larga 00:21:34
La velocidad es menor, ¿de acuerdo? 00:21:40
La velocidad de renaturalización es menor 00:21:43
Este DNA de E. coli renaturaliza mucho más despacio, ¿de acuerdo? 00:21:45
Nos quiero contar lo que ocurre en eucariotas 00:21:51
En eucariotas es todavía más complejo 00:21:55
Entonces, si aquí representamos la gráfica de renaturalización de un DNA eucariota genómico, este sería un DNA genómico, es muy complejo, en realidad no es una única gráfica, sino que tenemos tres solapadas, porque depende de los tipos de secuencia que se encuentran en ese genoma y del número de repeticiones de esas secuencias. 00:21:58
esto ya lo veremos más adelante 00:22:23
de todas maneras esta parte tampoco es tan importante 00:22:26
sencillamente que veáis que en realidad se solapan 00:22:29
dependiendo del número de secuencias que tenga 00:22:32
el DNA genómico de esa secuencia 00:22:35
¿de acuerdo? así llegamos a la hibridación 00:22:38
la hibridación tiene cosas comunes 00:22:41
con la desnaturalización y la renaturalización 00:22:45
¿de acuerdo? ya sabemos que el híbrido sonda secuencia diana 00:22:47
va a tener las mismas propiedades que una molécula bicatenaria de DNA. 00:22:51
Por tanto, puede desnaturalizarse y se puede renaturalizar. 00:22:56
Y la dinámica y cinética de desnaturalización y renaturalización de este híbrido 00:22:59
es idéntica a la de cualquier DNA, bicatenario, claro. 00:23:05
¿De acuerdo? 00:23:10
Las ondas reconocen regiones de DNA o RNA que son únicas, secuencias únicas. 00:23:11
¿De acuerdo? 00:23:19
Por tanto, en todo el genoma, una sonda se unirá a un único sitio, a una única secuencia diaria. Esto hace que la cinética de hibridación sea muy parecida, similar, a la cinética de renaturalización del DNA bicatenario, pero de secuencias únicas. ¿De acuerdo? Secuencias únicas, que sería este de aquí. Secuencias únicas. Por tanto, sigue un patrón sigmoideo. La hibridación. ¿De acuerdo? 00:23:19
que para cualquier DNA bicatenario 00:23:49
hemos calculado la temperatura de 00:23:51
melting, la temperatura 00:23:53
de melting de un híbrido también es 00:23:55
exclusiva. Cada híbrido 00:23:57
sonda secuencia 00:23:59
diana va a tener una curva 00:24:01
de fusión y por tanto una temperatura 00:24:03
de melting 00:24:05
específica, exclusiva 00:24:06
de ese híbrido. ¿De acuerdo? 00:24:09
Por tanto la temperatura 00:24:12
de melting del híbrido 00:24:13
también va a depender del porcentaje 00:24:14
de guaninas y citosinas. 00:24:17
Porque se comporta igual que cualquier DNA cuando desnaturaliza. Estas son unas ideas introductorias, pero que tenemos que tener claras sobre la hibridación. Por tanto, esto es cierto para cualquier técnica de hibridación que veremos posteriormente. 00:24:19
¿De acuerdo? ¿Qué factores influyen en la hibridación? Esto es muy importante. Lo voy a preguntar en el examen. ¿De acuerdo? Tres factores. El primer factor es la fuerza iónica, es decir, la concentración de sales. 00:24:37
¿Qué relación tiene la concentración de sales con la hibridación y la desnaturalización? A mayor concentración de sales, mayor temperatura de melting. ¿De acuerdo? Esta es la relación que hay. 00:24:53
Por tanto, si yo quiero aumentar la temperatura de melting de mi híbrido y por tanto que sea muy difícil que desnaturalice porque haya que aportar prácticamente 105 grados, una manera de hacerlo es hacer la hibridación en una solución con elevada concentración de sales. 00:25:06
A mayor concentración de sales, mayor temperatura de melting. Por tanto, el híbrido es más estable. Es mucho más difícil desnaturalizarlo. ¿De acuerdo? Muy bien. Primer factor. 00:25:26
segundo factor puedo añadir si me interesa agentes desnaturalizantes a la solución son agentes que 00:25:38
van a interferir con los puentes de hidrógeno del DNA desestabilizan la doble hélice y por tanto 00:25:48
hacen que sea más fácil la desnaturalización un ejemplo es el de MSO dimetilsulfóxido o la 00:25:53
formamida que se utiliza mucho de tal manera que si yo en el tampón en la solución subo la 00:26:01
concentración de forma amida y pongo forma amida la temperatura de melting disminuye ahora va a 00:26:07
ser mucho más fácil a menor temperatura el híbrido va a desnaturalizar ya veremos cuando nos interesa 00:26:13
poner mucha cantidad de sales o cuando nos interesa poner agentes desnaturalizantes etcétera y el 00:26:20
último ejemplo es la el número el porcentaje de bases nitrogenadas que no aparean no complementarias 00:26:27
lo que llamamos el mismatch que es el mismatch bueno pues imaginaos que este es el dna donde 00:26:38
tenemos la secuencia diana aquí se ha unido nuestra sonda de forma específica porque aquí está su 00:26:44
secuencia diana de acuerdo está formado a lo largo está formando a lo largo de toda su longitud está 00:26:51
formando puentes de hidrógeno imaginaos que de forma inespecífica esta sonda se ha unido también 00:26:59
por aquí sí pero claro como es inespecífica solamente se forman unos pocos puentes de 00:27:06
hidrógeno y hay una parte de la sonda una cola de la sonda que no forma puentes de hidrógeno la 00:27:13
pregunta es cuál de las dos uniones cuál de los dos híbridos es más fácil que desnaturaliza por 00:27:20
supuesto este de aquí pero que todo el mundo lo vea hay que romper menos puentes de hidrógeno 00:27:30
por tanto a mayor porcentaje de mismas menor temperatura de melty igual que la forma mira 00:27:36
Estos dos factores van en el mismo sentido 00:27:46
A mayor forma mida o de MSO o a mayor porcentaje de mismatch 00:27:49
Menor temperatura de melting 00:27:54
Va a ser más fácil quitarme de en medio estas uniones inespecíficas 00:27:56
¿De acuerdo? 00:28:00
Sin embargo, a mayor fuerza iónica 00:28:01
Mayor temperatura de melting 00:28:04
Como vemos aquí 00:28:07
Eso significa que en condiciones de alta fuerza iónica 00:28:08
Alta concentración de sales 00:28:14
las únicas uniones que van a permanecer son las que sean fuertes, ¿de acuerdo? ¿Se entiende? Muy bien, pues nada, con esto acabamos la primera parte de la explicación del tema 7 sobre los fundamentos de la hibridación. 00:28:15
Idioma/s:
es
Autor/es:
Pedro Melgar-Rojas
Subido por:
Pedro M.
Licencia:
Reconocimiento - No comercial - Sin obra derivada
Visualizaciones:
30
Fecha:
18 de marzo de 2024 - 9:06
Visibilidad:
Clave
Centro:
IES BENJAMIN RUA
Duración:
28′ 38″
Relación de aspecto:
1.78:1
Resolución:
1280x720 píxeles
Tamaño:
39.37 MBytes

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